一种革兰氏阴性菌通用检测培养基制造技术

本发明专利技术的一种革兰氏阴性菌通用检测培养基，组成为：蛋白胨5.0g～7.0g，酵母浸膏2.5g～3.0g，葡萄糖1.0g，氯化钠0g～5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL，盐酸万古霉素0.5mg/L～1.0mg/L。本发明专利技术的培养基选择性高，可专一选择性地培养革兰氏阴性菌；配制简便，单独使用万古霉素作为选择剂，最简单的配方甚至只要在平板计数琼脂中添加0.5mg/L～1.0mg/L的盐酸万古霉素即可；对人和环境友好，万古霉素的使用浓度不超过1.0mg/L；工作效率提高，可直接计数革兰氏阴性菌菌落。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属革兰氏阴性菌通用检测培养基领域。
技术介绍
水产养殖环境中存在着许多类群的微生物，这些微生物在水体中互相作用，彼此消长，影响着水质的变化，决定着养殖的成败；因此，研究养殖水体中微生物类群、种类和数量的动态变化，对指导水体养殖、保护环境生态具有十分重要的意义。水产养殖环境中的微生物主要为细菌，细菌又分为革兰氏阴性和革兰氏阳性两大类，这两大类细菌由于细胞壁构造的不同，对消毒药物有着不同的敏感性，因此，快速了解水体中细菌菌群的变化，可指导水体正确消毒。另一方面，由于生物修复技术的日益推广， 通过快速检测，可能会发现水体中的阴性菌和阳性菌处于一个良性的平衡状态，因而不需要盲目去实施水体消毒，这对保护环境生态，实现健康养殖同样十分重要。判别菌群种类，需要合适的培养基，但目前还没有革兰氏阴性菌检测的通用培养基，可供参考的革兰氏阴性菌检测的培养基有以胆盐为抑菌剂的培养基，如结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)(见GB 4789. 3-2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数)，结晶紫中性经胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)(见SN 1632. 1-2005奶粉中阪崎肠杆菌检验方法第1部分分离与计数方法)；以万古霉素为抑菌剂的培养基，如改良月桂基硫酸盐胰蛋白月东肉汤—万古霄素(Modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycine medium, mLST-Vm)(见GB 4789. 40-2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验)， 中国专利《阪崎肠杆菌选择性分离培养基》(专利号200710075355. 7)公开的阪崎肠杆菌选择性分离培养基。胆盐(Bile salt)是由肝细胞分泌的胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合而形成的钠盐或钾盐，可抑制革兰氏阳性菌，该胆盐培养基中胆盐的用量为1. 5g/L ；试验发现，此浓度下的胆盐对革兰氏阴性菌有一定的抑制作用(抑菌性20% )，浓度越高，抑制作用越强；此浓度下的胆盐对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用；但研究表明，有些乳杆菌(见《鼠李糖乳杆菌耐酸及胆盐能力研究》食品科学，2008，四(1 ，449-451)和肠球菌(见《2株猪源益生性肠球菌对酸和胆盐及热的耐受性研究》北京农学院学报，2008，23 (4)，29-32)能耐受较高浓度的胆盐，耐受度分别达0.5% (即5g/L)和0.4% (即4g/L)。因此，以胆盐作为革兰氏阴性菌通用检测培养基的选择性不合适。万古霉素是由一种链霉菌产生的糖肽类抗生素，盐酸万古霉素为其盐酸盐，对革兰氏阳性菌有较强的杀菌作用，对革兰氏阴性菌无效，因此是一种理想的革兰氏阴性菌选择剂。在新研发的革兰氏阴性菌如阪崎肠杆菌检测培养基中也用到万古霉素作选择剂，但是万古霉素的使用浓度较高，如mLST中万古霉素的浓度为10mg/L，阪崎肠杆菌选择性分离培养基中万古霉素的浓度也有3.0-5.0mg/L，且同时要与头孢噻吩(C印halothin)组合使用。试验发现，当万古霉素浓度为2. 0mg/L时，对革兰氏阴性菌也有一定的抑制作用(抑菌性10% )，浓度越高，抑制作用越大。此外，由于万古霉素具有耳毒性和一定的肾毒性，且药物毒性较大，因此，在使用浓度上应予控制，使既能达到效果，又对人和环境友好。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是寻找一种选择性高、配制简便、对人和环境友好的革兰氏阴性菌通用检测培养基，用于研究和监测水产养殖水体中革兰氏阴性菌的动态变化。本专利技术以如下技术方案解决上述技术问题一种革兰氏阴性菌检测通用培养基， 由下述重量配比的原料制成蛋白胨5. Og 7. 0g、酵母浸膏2. 5g 3. 0g、葡萄糖1. 0g、氯化钠Og 5. 0g、盐酸万古霉素0. 5mg 1. Omg、琼脂15. 0g、蒸馏水IOOOmL, pH 7. 0 士 0. 2。本专利技术的突出优点在于1、选择性高可专一选择性地培养革兰氏阴性菌。2、配制简便单独使用万古霉素作为选择剂，不需要与其它任何抗生素组合使用；最简单的配方甚至只要在平板计数琼脂中添加0. 5mg/L 1. 0mg/L的盐酸万古霉素即可。3、对人和环境友好万古霉素的使用浓度不超过1. 0mg/L，大大低于参考标准所用的10. 0mg/L，对人和环境极为友好。4、提高工作效率无需挑选菌落进行染色镜检，可直接计数革兰氏阴性菌菌落。具体实施例方式以下实施例是对本专利技术的进一步描述，但本专利技术并不局限于以下实施例。实施例1实施例1培养基的配方如表1中所示。将蛋白胨5. 0g、酵母浸膏2. 5g、葡萄糖1. 0g、琼脂15. Og加于IOOOmL蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH至7. 0 士 0. 2，分装至锥形瓶，每瓶200mL，121 °C高压灭菌15min，得基础培养基。准确称取10. Omg盐酸万古霉素，溶于IOOmL蒸馏水中(折合浓度为100mg/L)，得盐酸万古霉素储存液，分装试管，置-20°C保存备用。取ImL菌浓度为103CFU/mL的大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、乳杆菌、屎肠球菌、地衣芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌加入9cm平板各 4皿(共40皿)，倾注加热后冷至45°C的基础培养基至其中2皿，每皿15mL，36°C培养Mh， 计数，作为对照；另将基础培养基200mL加热溶解后冷至50°C，加入ImL盐酸万古霉素储存液，摇勻，使其终浓度为0. 5mg/L，另外2皿每皿倾注15mL，36°C培养Mh，计数，与对照相比较，计算生长率，以生长率在95%以上为生长，表示为“ + ”，以生长率为0%为不生长，表示为“_”。所得结果如表2中实施1数据所示。从表中可以看出，大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌这些革兰氏阴性菌均生长，而乳杆菌、屎肠球菌、地衣芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌这些革兰氏阳性菌均不生长。实施例2重复实施例1的方法，只是基础培养基组成有所不同，如表1中实施例2所示。基础培养基由蛋白胨7. 0g、酵母浸膏3. 0g、葡萄糖1. 0g、氯化钠5. 0g、琼脂15. Og组成。盐酸万古霉素的终浓度仍为0. 5mg/L。培养结果如表2中实施例2数据所示。结果与实施例1 相同，革兰氏阴性菌全部生长，革兰氏阳性菌均不生长。实施例3重复实施例1的方法，只是基础培养基组成和盐酸万古霉素的浓度均有所不同， 如表1中实施例3所示。基础培养基由蛋白胨5. 0g、酵母浸膏3. 0g、葡萄糖1. 0g、氯化钠 5. 0g、琼脂15. Og组成。盐酸万古霉素储存液的添加量为2mL，其终浓度为1. Omg/L。培养结果如表2中实施例3数据所示。结果与实施例1相同，革兰氏阴性菌全部生长，革兰氏阳性菌均不生长。表1革兰氏阴性菌检测通用培养基配方权利要求1. 一种革兰氏阴性菌通用检测培养基，其特征在于所述培养基由基础培养基和盐酸万古霉素组成，具体组份为蛋白胨5.0 g 7.0 g酵母浸膏2.5 g 3.0 g葡萄糖1.0 g氯化钠0 g 5. 0g琼脂15.0 g蒸馏水1000 mL盐酸万古霉素0. 5 mg/L·02.根据权利要求1所述的革兰氏阴性菌通用检测培养基，其特征是所述革兰氏阴性菌通用检测培养基的PH本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种革兰氏阴性菌通用检测培养基，其特征在于所述培养基由基础培养基和盐酸万古霉素组成，具体组份为：

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军义，谢春，罗兆飞，李娟，
申请(专利权)人：广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：45