本发明专利技术提供一种3′，5′-环腺苷单磷酸的结晶方法。本发明专利技术所提供的方法包括：1)将3′，5′-环腺苷单磷酸水溶液与碱进行反应，生成3′，5′-环腺苷单磷酸盐；2)将步骤1)中反应生成的3′，5′-环腺苷单磷酸盐溶液与酸进行反应，生成3′，5′-环腺苷单磷酸；3)于0～15℃下，保存步骤2)中得到的3′，5′-环腺苷单磷酸，即得。本发明专利技术所提供的方法可以明显改善最终产品质量，结晶收率高，操作简单，重复性好，适合3′，5′-环腺苷单磷酸的工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于结晶
，具体涉及一种3’，5’ -环腺苷单磷酸的结晶方法。
技术介绍
3'，5，-环磷酸腺苷(3'，5' -cyclic adenosine monophosphate)是蛋白激酶致活剂，是核苷酸的衍生物。3'，5’-环磷酸腺苷是在人体内广泛存在的一种具有生理活性的重要物质，由三磷酸腺苷在腺苷环化酶催化下生成，能调节细胞的多种功能活动。作为激素的第二信使，在细胞内发挥激素调节生理机能和物质代谢作用，能改变细胞膜的功能，促使网织肌浆质内的钙离子进入肌纤维，从而增强心肌收缩，并可促进呼吸链氧化酶的活性， 改善心肌缺氧，缓解冠心病症状及改善心电图。此外，对糖、脂肪代谢、核酸、蛋白质的合成调节等起着重要的作用。目前有关3’，5’ -环腺苷单磷酸结晶的研究鲜有文献报道。在2000年出的版的 《最新生化药物制备技术》中报道，在化学合成的3’，5’ -环腺苷单磷酸结晶工艺，加等体积的95%乙醇，用2mol/L盐酸调pHl 2，即析出白色结晶，过滤，取结晶干燥，得成品cAMP， 母液回收，收率62. 48%。由于化学合成过程中添加了如吡啶、三氯氧磷等毒性较大的试剂， 且反应不完全，副产物多，最终导致后续分离结晶收率很低。另外，在中国专利CN1702076A 中公开了直接用冷冻干燥法对3’，5’ -环腺苷单磷酸浓缩液进行结晶，但由于冷冻干燥法仅能除去溶液中的水分，虽然收率为100%，但产品的纯度并没有进一步提升，且真空冷冻干燥设备投资大，能源消耗成本较高，限制了该技术的工业化应用。
技术实现思路
3’，5’-环腺苷单磷酸上的磷酸基的解离平衡常数的pK值为3. 3 3. 9，调节溶液的ρΗ即可改变它的存在形式，如下式，当pH > pK时，3’，5’-环腺苷单磷酸上的磷酸基将与碱反应生成对应的3’，5’-环腺苷单磷酸盐，当pH < pK时，3’，5’-环腺苷单磷酸盐将与酸反应生成3’，5’ -环腺苷单磷酸。cAMP · H++NaOH = cAMP · Na++H20cAMP · Na++HCl = cAMP · H++NaCl因此，本专利技术的目的是提供一种新的高收率的3’，5’ -环腺苷单磷酸的结晶方法， 采用反应-低温相结合的结晶技术取代溶剂强析方法和冷冻干燥方法，以克服现有3’， 5’ -环腺苷单磷酸结晶技术中产品质量差，收率低的缺点。本专利技术的目的是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提供一种3’，5’ -环腺苷单磷酸的结晶方法，所述方法包括以下步骤1)将3’，5’ -环腺苷单磷酸水溶液与碱进行反应，生成3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液；幻将步骤1)中反应生成的3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液与酸进行反应，生成3’，5’ -环腺苷单磷酸；3)于0 15°C，优选为0 10°C，更优选为5 10°C下保存步骤2)中反应生成的3’，5’ -环腺苷单磷酸，即得。优选地，所述步骤1)中3’，5’ -环腺苷单磷酸水溶液与碱进行反应，直至溶液pH值为pH 6. 0 10. 0，优选为pH 6. 0 9. 0，更优选为pH 6. 5 8. 0。优选地，所述碱选自氨水和氢氧化钠溶液中的一种或几种，其浓度为2 10M，优选为3 6M，更优选为3 5M。优选地，所述步骤1)中的3’，5’-环腺苷单磷酸水溶液的浓度为15 350g/L，优选为 150 200g/L。优选地，所述步骤2)中的反应温度为10 40°C，优选为15 35°C，更优选为 30 35 。优选地，所述步骤幻中3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液与酸进行反应，直至溶液pH 值为pH 1. 0 3. 5，优选为pH 1. 5 3. 0，更优选为pH 2. 0 2. 5。优选地，所述酸选自硫酸、盐酸和磷酸中的一种或几种，其浓度为0. 01 10M，优选为0. 05 8M，更优选为2 4M ；优选地，所述步骤幻中的酸以按3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液体积的0.01 0. 5% /min的流速，优选为0. 04 0. 4% /min，更优选为0. 1 0. 4% /min的流速缓慢加入至3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液中。优选地，所述步骤2)中加入酸的过程中还包括以20 250rpm的搅拌速度，优选为90 200rpm，更优选为100 150rpm的搅拌速度进行搅拌。优选地，所述步骤3)中的保存时间为5 25小时，优选为5 20小时，更优选为18 20小时。优选地，所述方法还包括抽滤、乙醇洗涤和真空干燥步骤幻所得产品的步骤。优选地，所述方法包括以下步骤1)用3 5M氨水或氢氧化钠与浓度为150 200g/L的3’，5’ -环腺苷单磷酸水溶液反应，生成3’，5’ -环腺苷单磷酸铵盐或钠盐溶液， 溶液PH值为pH 6. 5 8.0 ；2)将步骤1)中生成的3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液于30 35°C下与浓度为2 4M的酸进行反应，直至溶液pH值为pH 2. 0 2. 5 ;3)在5 10°C下保存步骤幻中得到的产物18 20小时，抽滤、乙醇洗涤和真空干燥后，即得。优选地，所述步骤2)中的酸以0. 1 0. 4ml/min的流速缓慢加入至3’，5’ -环腺苷单磷酸盐溶液中； 优选地，所述加入酸的过程中还包括以100 150rpm的搅拌速度进行搅拌的步骤。此外，本专利技术还提供了一种3’，5’ -环腺苷单磷酸的制备方法，所述方法包括采用上述的方法使3’，5’ -环腺苷单磷酸水溶液结晶的步骤。本专利技术还可采用以下技术方案来实现。一种3’，5’ -环腺苷单磷酸的结晶方法， 用2 IOM氨水或氢氧化钠与浓度为15 350g/L 3，，5，-环腺苷单磷酸水溶液反应生成 PH在6 10之间的3’，5’ -环腺苷单磷酸铵盐或钠盐溶液，然后置于结晶罐中，温度保持在10 40°C，搅拌转速控制在20 250rpm，按水溶液体积的0. 01 0. 5% /min的流速加入浓度为0. OlM 10. OM的酸进行反应结晶，直到水溶液的pH值为1. 0 3. 5为止，停止搅拌，在0 15°C下保存5 25h，再经抽滤、乙醇洗涤、真空干燥即得纯度高于99%的3’， 5’-环腺苷单磷酸晶体。其中，优选的氨水或氢氧化钠浓度为3 6M。其中，3’，5’_环腺苷单磷酸铵盐或钠盐溶液PH控制在6 9之间。其中，优选的是温度保持在15 35°C，搅拌转速控制在90 200rpm。其中，优选的是按3’，5’-环腺苷单磷酸水溶液体积的0. 1 0. 4% /min的流速加入浓度为0. 05M 8. OM的酸。上述酸为硫酸、盐酸或磷酸溶液。其中， 优选的是直到3’，5’-环腺苷单磷酸水溶液的pH值为1. 5 3. 0为止，停止搅拌。其中，优选的是在0 10°C下保存5 20h。最优选的技术方案如下用3 5M氨水或氢氧化钠与浓度为150 200g/L 3’， 5’-环腺苷单磷酸水溶液反应生成pH为6. 5 8. 0之间的3’，5’-环腺苷单磷酸铵盐或钠盐溶液，然后置于结晶罐中，温度保持在30 35°C，搅拌转速控制在100 150rpm，按初始 3’，5’-环腺苷单磷酸水溶液体积的0. 1 0. 4% /min的流速加入浓度为2 4M的酸，直到3’，5’ -环腺苷单磷酸水溶液的pH值为本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种３’，５’－环腺苷单磷酸的结晶方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：１）将３’，５’－环腺苷单磷酸水溶液与碱进行反应，生成３’，５’－环腺苷单磷酸盐溶液；２）将步骤１）中反应生成的３’，５’－环腺苷单磷酸盐溶液与酸进行反应，生成３’，５’－环腺苷单磷酸；３）于０～１５℃，优选为０～１０℃，更优选为５～１０℃下保存步骤２）中得到的３’，５’－环腺苷单磷酸，即得。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：应汉杰，钱文斌，陈勇，陈晓春，柏建新，熊健，林晓清，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：84
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