金黄色葡萄球菌截短SasA蛋白在大肠杆菌中的表达及应用制造技术

本发明专利技术涉及在大肠杆菌中高效表达金黄色葡萄球菌截短的SasA(Serine-rich?adhesion?forplatelets)蛋白的方法。根据GenBank报导的金黄色葡萄球菌SasA基因全长序列(GenBank：BX571856.1)，设计引物扩增金黄色葡萄球菌SasA基因的142-999bp，扩增得到的基因序列如SEQ?ID?No.1，其编码的蛋白序列如SEQ?ID?No.2。扩增得到的SasA基因经双酶切后连接入表达载体pET21a(+)中，重组SasA蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达，目的蛋白占碎菌上清总蛋白的约20％。经QFF柱、镍柱纯化后，目的蛋白纯度可达85％以上。通过本发明专利技术的方法制备的重组蛋白具有很好的免疫原性，能够诱导小鼠产生高滴度保护性抗体，抵御致死剂量金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡。本发明专利技术在金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗的大规模高效制备中具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．截短的金黄色葡萄球菌ＳａｓＡ基因，是下述核苷酸序列之一：１）序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１的ＤＮＡ序列；２）编码序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２的蛋白序列；３）与序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１限定的ＤＮＡ序列具有９０％以上同源性且具有激发机体对金黄色葡萄球菌产生免疫保护作用的核苷酸序列；４）在高严谨条件下可与序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．１限定的ＤＮＡ序列杂交的核苷酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈薇，易绍琼，于长明，徐俊杰，侯利华，付玲，任军，于婷，
申请(专利权)人：军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：11