本发明专利技术公开了一种毛细管电泳缓冲液及其制备方法。本发明专利技术提供的电泳缓冲液，pH为7.5-8.5，溶剂是水，溶质包括一种阴离子和金属螯合剂；所述阴离子与所述金属螯合剂的配比为(12.164-48.656)g∶(0.8-1.2)mmol；所述阴离子为N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸和/或N-三(羟甲基)甲氨基-2-氨基丙磺酸。实验证明，用本发明专利技术的缓冲液进行毛细管电泳基本能够获得理想的分型图谱(均如图1所示)，并且本发明专利技术的缓冲液的效果好，即降低电渗作用、稳定性、重复性都优于其他缓冲液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
毛细管电泳作为一种重要分子生物学技术，已被广泛的用于不同生物分子(DNA、 RNA、蛋白质等)的分离。DNA测序及DNA片段分析等都基于电泳这种技术。在碱基测序过程中，需将DNA产物变性形成DNA样本的单链结构，继而通过毛细管电泳使不同片段长度的单链DNA分子分离以实现DNA序列的测定及特定DNA片段分离及检测。在STR遗传标记分析过程中，同样需将DNA特定位点的荧光标记产物变性成DNA 样本的单链结构，继而通过毛细管电泳将不同长度且不同荧光的DNA片段分离，通过后续软件分析以实现遗传鉴定。目前，在DNA片段分离及检测最常见的检测设备主要是美国ABI公司的PRISM 310、3100、3100-Avant、3130和3130x1型遗传分析仪等。上述仪器均属于毛细管电泳仪，该类仪器在电泳时其正负电极需要放置电泳缓冲液。缓冲液的缓冲能力及维持电流稳定的能力决定着全部电泳过程的稳定性及电泳结果的可靠性与重复性。缓冲溶液就是具有缓冲能力的溶液，提供稳定的PH值，使电渗流稳定，如果样品带电，那么样品所带电荷也是稳定的，从而使得结果可重复性增强。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种毛细管电泳缓冲液。本专利技术提供的电泳缓冲液，pH为7. 5-8. 5，溶剂是水，溶质包括一种阴离子和金属螯合剂；所述阴离子与所述金属螯合剂的配比为(12. 164-48. 656) g (0. 8-1. 2)mmol ；所述阴离子为N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸和/或N-三(羟甲基)甲氨基-2-氨基丙磺酸。上述阴离子、所述金属螯合剂与水的配比为(20_30)g (0. 8-1. 2) mmol (90-110)ml,优选为(24. 328-25. 93) g Immol 100ml。上述溶质是所述阴离子和金属螯合剂；所述金属螯合剂优选为EDTA。上述溶质还包括一种阳离子；所述阳离子为双(三羟甲基)氨基甲烷；所述阳离子与所述阴离子的摩尔比为1 1。上述溶质是所述阴离子、所述阳离子和金属螯合剂；所述金属螯合剂优选为 EDTA0本专利技术的另一目的在于提供一种溶胶缓冲液。本专利技术提供的溶胶缓冲液是用上述电泳缓冲液制备得到的。上述溶胶缓冲液是将上述电泳缓冲液与尿素、2-吡咯烷酮混合制备得到；所述电泳缓冲液与尿素、2-吡咯烷酮的配比是(8-12)ml (45-52) g (3_8)ml ；优选配比是:31Oml 48g 5ml。本专利技术的又一目的在于提供一种电泳溶胶。本专利技术的电泳溶胶是用有机聚合物与上述溶胶缓冲液混合制备得到。上述有机聚合物与上述溶胶缓冲液的配比是 100ml，优选是 4g IOOml ；所述电泳溶胶的pH为7. 5-8. 5 ；所述有机聚合物优选为聚N，N-二甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺和/或聚N，N- 二甲基丙烯酰胺。上述电泳缓冲液、上述溶胶缓冲液或上述电泳溶胶在毛细管电泳中的应用均属于本专利技术的保护范围。实验证明，实施例2，3中缓冲液在被用作毛细管电泳缓冲液之初时，在实验结果上与实施例1缓冲液无显著性差异，基本能够获得理想的分型图谱(均如图1所示)，且无优劣之分。但添加了双(三羟甲基)氨基甲烷的实施例1的缓冲液在电泳次数达到一定程度时候，会比实施例2，3中单纯由TAPS与EDTA组成的电泳缓冲液表现的更加稳定，能够具有较多的使用次数(图2-图7)。将本专利技术的电泳缓冲液换成TAE缓冲液、TBE缓冲液或TPE缓冲液进行毛细管电泳得不到标准DNA样品9947A的正确DNA分型(图8-图10)，而实施例1中电泳缓冲液能得到标准DNA样品9947A的正确DNA分型(图11)，进一步说明本专利技术的缓冲液的效果好， 即降低电渗作用、稳定性、重复性都优于其他缓冲液。附图说明图1为利用实施例1缓冲液的Typer1^OO分子量内标的STR分型图谱。图2为用实施例2的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。图3为用实施例2的电泳缓冲液进行电泳，进行第48组样本检测时实时荧光监测结果。图4为用实施例3的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。图5为用实施例3的电泳缓冲液进行电泳，进行第64组样本检测时实时荧光监测结果。图6为用实施例1的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。图7为用实施例1的电泳缓冲液进行电泳，进行第80组样本检测时实时荧光监测结果。图8为利用TAE作为电泳缓冲液的标准DNA样品9947A的STR分型图谱。图9为利用TBE作为电泳缓冲液的标准DNA样品9947A的STR分型图谱。图10为利用TPE作为电泳缓冲液的标准DNA样品9947A的STR分型图谱。图11为利用实施例1电泳缓冲液的标准DNA样品9947A的STR分型图谱。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不限于以下实施例。下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、一、10X电泳缓冲液配制1、在含80mL去离子水的容器中加入20.924g双(三羟甲基)氨基甲烷和三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸。2、在磁力搅拌器上混勻。3、再加入 2mL 0. 5M EDTA 溶液。4、用NaOH溶液(4M)调节pH到8，最后用去离子水定容至100mL。5、用孔径0. 2um膜过滤(除去样品中颗粒性杂质)，得到IOX电泳缓冲液，分装后4°C保存。二、溶胶配制1、溶胶缓冲液配制①取实施例1上述步骤制备得到的IOX电泳缓冲液10ml，加入40ml去离子水；②然后用天平称量48g尿素(8M)加入上述溶液中，搅拌溶解后；③再加入5mL 2_吡咯烷酮(分析纯)，最后定容至IOOmL,得到溶胶缓冲液(pH值为8)，放入4°C冰箱冷藏。2、溶胶(凝胶)获得④称取4g制备的白色固体聚N，N- 二甲基丙烯酰胺加入步骤③得到溶胶缓冲液中，然后再加入搅拌子，过夜搅拌使其充分溶解；⑤然后用0. 22 μ m的滤膜过滤，得到溶胶(pH值为8)，在4°C冰箱冷藏。实施例2、一、10 X缓冲液配制1、在含80mL去离子水的容器中加入24. 43g N-三(羟甲基)甲基_3_氨基丙磺酸。2、在磁力搅拌器上混勻。3、再加入 2mL 0. 5M EDTA 溶液。4、用NaOH溶液0M)调节pH到8，最后去离子水定容lOOmL。5、用孔径0. 2um膜过滤，得到IOX电泳缓冲液，分装后4°C保存。二、溶胶配制1、溶胶缓冲液配制①取实施例2上述步骤制备得到的IOX电泳缓冲液10ml，加入40ml去离子水②然后用天平称量48g尿素(8M)加入上述溶液中，搅拌溶解后；③再加入5mL 2_吡咯烷酮(分析纯)，最后定容至IOOmL,得到溶胶缓冲液(pH值为8)，放入4°C冰箱冷藏。2、溶胶获得④称取4g制备的白色固体聚N，N- 二甲基丙烯酰胺加入步骤③得到溶胶缓冲液中，然后再加入搅拌子，过夜搅拌使其充分溶解。⑤然后用0. 22 μ m的滤膜过滤，得到溶胶(pH值为8)，在4°C冰箱冷藏实施例3、缓冲液的配制方法如下一、10 X缓冲液配制1、在含80mL去离子水的容器中加入25. 93g N-三(羟甲基)甲氨基_2_氨基丙磺酸。52、在磁力搅拌器上混勻。3、混勻过程中再加入anL 0. 5M EDTA溶液。4、用NaOH溶液0M)调节pH到本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．电泳缓冲液，ｐＨ为７．５－８．５，溶剂是水，溶质包括一种阴离子和金属螯合剂；所述阴离子与所述金属螯合剂的配比为（１２．１６４－４８．６５６）ｇ∶（０．８－１．２）ｍｍｏｌ；所述阴离子为Ｎ－三（羟甲基）甲基－３－氨基丙磺酸和／或Ｎ－三（羟甲基）甲氨基－２－氨基丙磺酸。
【技术特征摘要】
1.电泳缓冲液，PH为7.5-8. 5，溶剂是水，溶质包括一种阴离子和金属螯合剂； 所述阴离子与所述金属螯合剂的配比为(12. 164-48. 656) g (0. 8-1. 2)mmol ； 所述阴离子为N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸和/或N-三(羟甲基)甲氨基-2-氨基丙磺酸。2.如权利要求1所述的电泳缓冲液，其特征在于所述阴离子、所述金属螯合剂与水的配比为(20-30) g (0. 8-1. 2)mmol (90-110)ml,优选为(24. 328-25. 93) g ； Immol ； IOOml03.如权利要求1或2所述的电泳缓冲液，其特征在于所述溶质是所述阴离子和金属螯合剂；所述金属螯合剂优选为EDTA。4.如权利要求1或2所述的电泳缓冲液，其特征在于所述溶质还包括一种阳离子；所述阳离子为双(三羟甲基)氨基甲烷；所述阳离子与所述阴离子的摩尔比为1 1。5.如权利要求4所述的电泳缓冲液，其特征在于所述溶质是所述阴离子、所述阳离子和金属螯合剂；...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵兴春，叶健，姜伯玮，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。