一种根结线虫生防菌剂及其生产工艺制造技术

本发明专利技术属于农业虫害生物防治领域，具体涉及一种根结线虫生物防治微生物菌剂及其生产工艺。本发明专利技术要克服现有技术存在防治效果不理想、专一性差、防效时间短和污染大的问题。本发明专利技术的技术解决方案是：一种根结线虫生防菌剂，由下述重量份数计的原料组成，枝顶孢霉菌菌粉10-15份、沸石20-30份、硅藻土50-60份、几丁质5份和麸皮5-10份。本发明专利技术是一种含有对根结线虫有侵染、灭杀生物防治作用的枝顶孢霉孢子的微生物菌剂，可用于农业设施蔬菜水果种植过程中危害严重的根结线虫病害的生物防治，对辣椒、西红柿和黄瓜等根结线虫的防治效果可达93%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业虫害生物防治领域，具体涉及一种根结线虫生防菌剂及其生产工艺。
技术介绍
根结线虫为植物根系专性内寄生动物，是世界性威胁农业生产的主要病原物。据有关研究证实，根结线虫寄主已超过3000种植物，分属114科，包括单子叶植物，双子叶植物，草本植物和禾本科植物。该病害发生会引起严重农作物产量损失，一般造成减产10% 20%， 严重的可达75%以上。据不完全统计，线虫危害使世界农业平均每年减产24. 5%，所造成农作物经济损失约在1000亿美元。在我国，根结线虫在大部分地区均有发生，侵染作物达百种以上，如水稻、花生、香蕉、柑橘、烟草、甘薯、大豆、棉花、西瓜、马铃薯以及花卉、果树、中药材等，给我国农业生产带来极大损失。在我国该病害致使寄主作物常年减产13 25%，严重时可达70%以上，严重制约了我国蔬菜、果品、花卉等作物的生产和出口创汇，我国农作物每年因根结线虫的危害而遭受的经济损失达数亿元。陕西于2000年首次发现根结线虫病害，现已在陕西的陕北、陕南及关中地区的不同作物上发现此病害，侵害作物包括设施蔬菜、水果、药用植物、农作物等。研究表明， 在陕西一般棚室当年发生根结线虫病害引起黄瓜减产5%左右，第2年减产10% 15%，第 3年减产20 % 30 %，4年以上减产超过50 %，甚至绝收。除直接侵染危害外，根结线虫还和其它病原物造成复合侵染，使作物病害加重，给我省农业生产带来了极大的危害。农作物根结线虫病害防治目前有多种方法，但大多效果不太理想。采用田间轮作和使用非寄主植物或抗病植物是防治根结线虫的主要管理措施，但其具有一定局限性，如大多数根结线虫种类具有较广的寄主范围，同时，田间病源根结线虫种群大部分是几个种的混合群体，防治效果难以持续。此外，化学杀线虫剂如溴甲烷、必速杀、克线磷、呋喃丹、阿维菌素等曾被广泛地使用，并且获得过一定效果，但易造成土壤环境污染，蔬菜残毒超标等影响品质甚至销售。其他措施如日晒、淹水，使用无病苗木、土壤改良在某些情况下虽能取得一些防治效果，但效果甚微或有较大的局限性。因此，采用以生物防治为核心的无公害可持续治理方法成为控制根结线虫病害主要方向。
技术实现思路
本专利技术要提供一种根结线虫生防菌剂及其生产工艺，以克服现有技术存在防治效果不理想、专一性差、防效时间短和污染大的问题。为克服现有技术存在的问题，本专利技术的技术解决方案是一种根结线虫生防菌剂， 由下述重量份数计的原料组成，枝顶孢霉菌菌粉10-15份、沸石20-30份、硅藻土 50-60份、 几丁质5份和麸皮5-10份；所述枝顶孢霉菌菌粉的制备过程如下(1)液体培养取国家专业微生物菌种库获得的枝顶孢霉菌，接种于液体发酵培养基中，得到种子液，所说的液体发酵培养基中包含胶体几丁质1. 0-2. 0份，葡萄糖0-1. 0份，磷酸二氢钾1. 0份，氯化钙0. 2份，氯化钠0. 2份，硫酸镁0. 5份；其过程是液体发酵培养基按照每瓶IOOml分装于500ml三角瓶中，121°C，30min灭菌后，接种枝顶孢霉菌种，观°c ±l°C，180rmp振荡幅度培养3天制成生防菌剂的种子液； 7L液体发酵培养基置于IOL的发酵罐中，得到的种子液按15%体积接种于液体发酵培养基中，搅拌150转/min，控制溶氧0. 20-0. 28M3/M3 · min，液体深层发酵72hr，得种子母液；(2)固体培养将上述种子母液按质量比为10%的接种量接入固体培养基中，固体培养基按下述重量配比的原料制得，麦麸500g，硝酸钠0. 3^0. 6g，磷酸二氢钾0. lg，硫酸镁 0. 05 0. Ig,氯化钠 0. 05 0. Ig,硫酸铁 0. 000Γ0. 0002g,蔗糖 2. 0-4. Og,加水 500g, 28 士 1°C固体浅层发酵7 10天，制成固体发酵物；(3)粉碎把固体发酵物干燥至水份为15%，将干燥好的培养物用筛孔为149μπι的吸尘粉碎机粉碎，并置于孔径为149 μ m振动筛上分筛，得枝顶孢霉菌菌粉。上述胶体几丁质通过下述方法制得，将10份细粉几丁质溶于100份浓盐酸中，搅拌均勻，于4°C放置Mh，然后取浓盐酸100份研磨均勻，加入500份体积浓度为50%的乙醇搅拌，离心4000r/min，IOmin,除去上清液，再加入蒸馏水洗涤离心，重复洗涤离心至pH7. 0 制备获得。上述根结线虫生防菌剂的制备工艺准确称取菌粉10-15份、麸皮5-10份、沸石 10-15份、硅藻土 20-30份后，混合15 20 min，再依次加入沸石5_15份、硅藻土 25-35份、 几丁质5份，混合3(T40min，筛分分装后，即获得根结线虫生防菌剂。本专利技术是一种含有对根结线虫有侵染、灭杀生物防治作用的枝顶孢霉孢子的微生物菌剂，可用于农业设施蔬菜水果种植过程中危害严重的根结线虫病害的生物防治，本专利技术与现有同类技术相比，优点是(1)本根结线虫生防菌剂主要用于蔬菜水果种植的设施大棚，因其环境条件如温度、湿度可控，有利于生防菌剂中微生物孢子的萌发、繁殖；(2)本生防菌剂采用根部洒施使用方法，能在最短时间内在病害植株根部土壤定植，利于发挥侵染、灭杀作用。(3)本生防菌剂使用粉状几丁质为诱导剂，可以诱导菌剂中的微生物产生几丁质酶，几丁质是根结线虫虫卵、虫体的成份，菌剂中微生物通过产几丁质酶，酶解虫体、虫卵外壁完成对根结线虫的侵染。(4)本菌剂使用表面积较大的沸石为载体，除能吸附数量较大的枝顶孢霉孢子外，也是微生物孢子的保护剂，有效保护孢子免收外界因素影响。(5)本菌剂采用的是液固双相发酵工艺生产，前工艺种子、种母生产采用液体深层发酵，确保纯种发酵并利于菌丝萌发，后工艺菌粉生产采用利于孢子生长、便于粉碎及筛分、成本低廉的固体发酵工艺。(6)本菌剂符合国家微生物农药组成不得添加化学成分农药的有关质量指标要求。具体实施例方式下面将通过具体实例对本专利技术作详细的说明在发生根结线虫的蔬菜大棚，本专利技术使用量为75-150kg/hm2，可采用固体洒施于地表， 然后翻埋至20cm的土壤中，施后3天勿浇水，亦可在黄瓜、西红柿、辣椒等蔬菜定植时，结合整地与有机肥一起均勻穴施在栽移坑中，然后按照常规进行种植管理。实施例1:一种根结线虫生防菌剂，由以下方法制备得到 首先制备枝顶孢霉菌菌粉 (1)液体培养称取胶体几丁质2. 0g，磷酸二氢钾(KH2PO4) 1. 0g，氯化钙(CaCl2) 0. 2g，氯化钠(NaCl)0.2g，硫酸镁(MgSO4) 0.5g，溶于IOOOml蒸馏水，调节pH为7. 0，按照每瓶IOOml分装于 500ml三角瓶中，121°C，30min灭菌后，接种国家专业微生物菌种库获得的枝顶孢霉菌种； 所说的胶体几丁质通过下述方法制得，将10份细粉几丁质溶于100份浓盐酸中，搅拌均勻， 于4°C放置Mh。然后取浓盐酸100份研磨均勻；加入500份50%的乙醇搅拌，离心4000r/ min, IOmin,除去上清液，再加入蒸馏水洗涤离心，重复洗涤离心至pH7. 0制备获得，观 0C 士 1°C，ISOrmp振荡幅度培养3天制成生防菌剂的种子液，将此种子液按15%重量体积接种于，胶体几丁质14. Og,磷酸二氢钾(KH2PO4) 7. Og,氯化钙(CaCl2) 1. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种根结线虫生防菌剂的制备工艺，依次包括下述步骤：准确称取菌粉１０－１５份、麸皮５－１０份、沸石１０－１５份、　硅藻土２０－３０份后，混合１５～２０　ｍｉｎ，再依次加入沸石５－１５份、硅藻土２５－３５　份、几丁质５份，混合３０～４０ｍｉｎ，筛分分装后，即获得根结线虫生防菌剂其中所述枝顶孢霉菌菌粉的制备过程如下：（１）液体培养：取国家专业微生物菌种库获得的枝顶孢霉菌，接种于液体发酵培养基中，得到种子液，所说的液体发酵培养基中包含胶体几丁质１．０－２．０份，葡萄糖０－１．０份，磷酸二氢钾１．０份，氯化钙０．２份，氯化钠０．２份，硫酸镁０．５份；其过程是：液体发酵培养基按照每瓶１００ｍｌ分装于５００ｍｌ三角瓶中，　１２１℃，３０ｍｉｎ灭菌后，接种枝顶孢霉菌种，　２８　℃±１℃，１８０ｒｍｐ振荡幅度培养３天制成生防菌剂的种子液；７Ｌ液体发酵培养基置于１０Ｌ的发酵罐中，得到的种子液按１５％体积接种于液体发酵培养基中，搅拌１５０转／ｍｉｎ，控制溶氧０．２０－０．２８Ｍ３／Ｍ３·ｍｉｎ，液体深层发酵７２ｈｒ，得种子母液；（２）固体培养：将上述种子母液按质量比为１０％的接种量接入固体培养基中，固体培养基按下述重量配比的原料制得，麦麸５００ｇ，硝酸钠０．３～０．６ｇ，磷酸二氢钾０．１ｇ，硫酸镁０．０５～０．１ｇ，氯化钠　０．０５～０．１ｇ，硫酸铁０．０００１～０．０００２ｇ，蔗糖２．０－４．０ｇ，加水５００ｇ，２８　±１℃固体浅层发酵７～１０天，制成固体发酵物；（３）粉碎：把固体发酵物干燥至水份为１５％，将干燥好的培养物用筛孔为１４９μｍ的吸尘粉碎机粉碎，并置于孔径为１４９μｍ振动筛上分筛，得枝顶孢霉菌菌粉。...

【技术特征摘要】
1.一种根结线虫生防菌剂的制备工艺，依次包括下述步骤准确称取菌粉10-15份、麸皮5-10份、沸石10-15份、硅藻土 20-30份后，混合15 20 min,再依次加入沸石5_15份、 硅藻土 25-35份、几丁质5份，混合3(T40min，筛分分装后，即获得根结线虫生防菌剂其中所述枝顶孢霉菌菌粉的制备过程如下(1)液体培养取国家专业微生物菌种库获得的枝顶孢霉菌，接种于液体发酵培养基中，得到种子液，所说的液体发酵培养基中包含胶体几丁质1. 0-2. 0份，葡萄糖0-1. 0份，磷酸二氢钾1. 0份，氯化钙0. 2份，氯化钠0. 2份，硫酸镁0. 5份；其过程是液体发酵培养基按照每瓶IOOml分装于500ml三角瓶中，12rC，30min灭菌后，接种枝顶孢霉菌种，28 °C ±1°C，ISOrmp振荡幅度培养3天制成生防菌剂的种子液； 7L液体发酵培养基置于IOL的发酵罐中，得到的种子液按15%体积接种于液体发酵培养基中，搅拌150转/min，控制溶氧0. 20-0. 28M3/M3 · min，液体深层发酵72hr，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈卫荣，韩丽萍，孙晓宇，路鹏鹏，沈俭，陈志杰，门欣，李玥，
申请(专利权)人：陕西省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：87