离心方法技术

本发明专利技术提供了一种将高比重物质和低比重物质从其混合物中分离的离心方法，该方法可防止在离心操作后收集低比重物质的过程中高比重物质的污染。该离心方法包括将包含高比重物质、低比重物质、以及热可逆凝胶和能够形成热可逆凝胶剂的已溶解的胶凝剂中的至少一种的混合物进行离心，其中，所述热可逆凝胶或者所述已溶解的胶凝剂可形成使所述低比重物质和所述高比重物质分离的凝胶层。所述离心操作优选在等于或低于所述胶凝剂的胶凝温度的条件下进行。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种将高比重物质和低比重物质从其混合物中分离出来的。
技术介绍
固液分离法是一种将高比重物质和低比重物质从其混合物中分离出来的方法，固液分离法可大致分为过滤分离法和沉淀分离法。过滤分离法是一种通过过滤操作将固体物质和液体物质分离的方法，所述过滤操作使用诸如滤纸、滤网、多孔薄膜之类的过滤材料， 并且利用自然重力、压缩力、减压力、离心力等作为驱动力。沉淀分离法是一种通过自然沉淀或离心力将混合物中的固体物质沉淀下来，并由此将其与上清液中的液体物质分离的方法，而利用离心力的方法称为离心法。在诸如离心法之类的沉淀分离法中，会出现这样的情况当将上清液与沉淀物分离时，沉淀物会进入上清液并将其污染。特别是当沉淀物的上部为浆液的形状时，则难以避免沉淀物进入并污染上清液。作为解决该问题的手段，已知一种使用沉淀辅助剂的方法 (例如，专利文件1)。然而，需要根据固体物质的种类来选择合适的沉淀辅助剂，而且还会存在合适的沉淀辅助物是未知的情况，所以该方法缺乏灵活性。此外，尽管也用于分离具有不同比重的液体混合物(液-液分离)。然而，即使是在离心辅助的液-液分离中，当对离心后形成为最外层的层进行分级时，仍会存在下层物质被污染的情况。[专利文件 1]国际公布 No. W02005/063979
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种可解决上述问题的。本专利技术人进行了深入的研究，结果发现，在使用了离心法的固-液分离中，通过使用热可逆凝胶(thermoreversible gel)或能够形成热可逆凝胶的已溶解的胶凝剂，可防止沉淀物进入并污染上清液。此外，本专利技术人还发现，在使用离心法的液-液分离中，通过使用热可逆凝胶或者能够形成热可逆凝胶的已溶解的胶凝剂，可防止高比重物质进入并污染低比重物质，由此完成了本专利技术。S卩，本专利技术包括以下实施方案。[1] 一种分离高比重物质和低比重物质的，其包括将包含高比重物质、低比重物质、以及热可逆凝胶和能够形成热可逆凝胶剂的已溶解的胶凝剂中的至少一种的混合物进行离心，其中，所述热可逆凝胶或者所述已溶解的胶凝剂可形成使所述低比重物质和所述高比重物质分离的凝胶层。[2]上述[1]所述的，其中，所述离心操作是在温度等于或低于所述胶凝剂的胶凝温度的条件下进行的。[3]上述[1]或[2]所述的，其中，所述混合物包含固体和液体。[4]上述[1]所述的，其中，所述混合物通过如下方法得到(a)将所述高比重物质、所述低比重物质和所述胶凝剂混合，或者将包含所述高比重物质和所述低比重物质的组合物与所述胶凝剂混合；以及(b)将包含所述高比重物质、所述低比重物质和所述胶凝剂的混合物加热，以使所述胶凝剂溶解。[5]上述[1]所述的，其中，所述混合物通过如下方法得到(A)获得溶解有所述胶凝剂的溶液；以及(B)将所述溶液与所述高比重物质和所述低比重物质混合，或者使将所述溶液与包含所述高比重物质和所述低比重物质的组合物混合。[6]上述[1]_[5]所述的，其中，所述混合物包含离子交换树脂。[7]上述[6]所述的，其中，所述离子交换树脂为螯合树脂。[8]上述[1]或[2]所述的，其中，所述混合物包含水成液和有机液体。[9]上述[8]所述的，其中，所述有机液体为选自苯酚、氯仿和异戊醇所组成的组中的至少一种。[10]上述[8]或[9]所述的，其中，所述水成液包含核酸。[11] [1]-[10]所述的，其中，所述胶凝剂为亲水性胶凝剂。[12]上述[11]所述的，其中，所述亲水性胶凝剂为琼脂糖。[13]上述[1]_[12]所述的，其中，所述胶凝剂部分地溶解在所述混合物中。[14]上述[1]_[13]所述的，其还包括收集所述低比重物质。[15] 一种组合物，包含能够形成热可逆凝胶的亲水性胶凝剂和离子交换树脂。根据本专利技术的示例性实施方案，可容易地防止沉淀物进入并污染上清液，其中沉淀物进入并污染上清液是通过沉淀分离法对上清液进行分级时所存在的问题。此外，还可容易地防止高比重物质进入并污染低比重物质，其中高比重物质进入并污染低比重物质是使用离心进行液-液分离时所存在的问题。附图说明图IA为示出了本专利技术示例性实施方案的固-液分离法的例子的图。图IB为示出了本专利技术示例性实施方案的固-液分离法的例子的图。图2为示出了通过常规方法进行用以大米DNA提取的离心后的状态图。图3为示出了通过本专利技术示例性实施方案的方法进行用以大米DNA提取的离心后的状态图。图4为示出了通过常规方法进行用以从植物中提取DNA的离心后的状态图。图5为示出了通过本专利技术示例性实施方案的方法进行用以从植物中提取DNA的离心后的状态图。图6为示出了通过常规方法进行用以从福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中提取DNA的离心处理后的状态图。图7为示出了通过本专利技术示例性实施方案的方法进行用以从福尔马林固定石蜡包埋的组织切片中提取DNA的离心处理后的状态图。图8为示出了实施例6中通过以鼠CCND基因中的164bp区段作为目标序列而获得的PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果的图。泳道M表示IOObp DNA Ladder Marker。泳道1表示阴性对照。泳道2表示阳性对照。泳道3和6分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR 产物，该上清液为使用不含胶凝剂的样品，通过极为小心的方式以避免树脂层的污染而收集得到的上清液。泳道4和7分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR产物，该上清液为使用不含胶凝剂的样品，通过故意使树脂层受到少量的污染而收集得到的上清液。泳道5和8分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR产物，该上清液为通过使用含有胶凝剂的样品而收集得到的上清液。图9为示出了实施例6中通过以鼠CCND基因中的416bp区段作为目标序列而获得的PCR的琼脂糖凝胶电泳结果的图。泳道M表示IOObp DNA Ladder Marker。泳道1表示阴性对照。泳道2表示阳性对照。泳道3和6分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR 产物，该上清液为使用不含胶凝剂的样品，通过极为小心的方式以避免树脂层的污染而收集得到的上清液。泳道4和7分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR产物，该上清液为使用不含胶凝剂的样品，通过故意使树脂层受到少量的污染而收集得到的上清液。泳道5和8分别表示使用2. 5 μ 1和1 μ 1的下述上清液作为PCR模板而获得的PCR产物，该上清液为通过使用含有胶凝剂的样品而收集得到的上清液。具体实施例方式以下详细描述本专利技术的示例性实施方案。在此，除非另有注释，否则在以下描述中 “％”是指“(重量/体积)％”。本专利技术的示例性实施方案的是一种通过离心方式来分离高比重物质和低比重物质的方法，其中通过在存在热可逆凝胶和/或能够形成热可逆凝胶的已溶解的胶凝剂的情况下进行离心，形成了使低比重物质与高比重物质分离的热可逆凝胶层。无论是固-液分离法还是液-液分离法中，本专利技术的示例性实施方案的均可应用。对本专利技术示例性实施方案的高比重物质和低比重物质没有特别的限定，只要高比重物质的比重高于低比重物质的比重即可。低比重物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种分离高比重物质和低比重物质的离心方法，其包括：将包含高比重物质、低比重物质、以及热可逆凝胶和能够形成热可逆凝胶剂的已溶解的胶凝剂中的至少一种的混合物进行离心，其中，所述热可逆凝胶或者所述已溶解的胶凝剂形成为使所述低比重物质和所述高比重物质分离的凝胶层。

【技术特征摘要】
2010.05.13 JP 2010-1111341.一种分离高比重物质和低比重物质的离心方法，其包括将包含高比重物质、低比重物质、以及热可逆凝胶和能够形成热可逆凝胶剂的已溶解的胶凝剂中的至少一种的混合物进行离心，其中，所述热可逆凝胶或者所述已溶解的胶凝剂形成为使所述低比重物质和所述高比重物质分离的凝胶层。2.根据权利要求1所述的离心方法，其中，所述离心操作是在温度等于或低于所述胶凝剂的胶凝温度的条件下进行的。3.根据权利要求1所述的离心方法，其中，所述混合物包含固体和液体。4.根据权利要求1所述的离心方法，其中，所述混合物通过如下方法得到(a)将所述高比重物质、所述低比重物质和所述胶凝剂混合，或者将包含所述高比重物质和所述低比重物质的组合物与所述胶凝剂混合；以及(b)将包含所述高比重物质、所述低比重物质和所述胶凝剂的混合物加热，以使所述胶凝剂溶解。5.根据权利要求1所述的离心方法，其中，所述混合物通过如下方法得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：碓井圭名子，岸田小百合，田中友美，向井博之，
申请(专利权)人：宝生物工程株式会社，
类型：发明
国别省市：JP