本发明专利技术涉及鱼类免疫器官中表达的基因序列领域，具体是一种鮸鱼α类趋化因子基因CXCL10、检测方法和应用。本发明专利技术的基因的获得不仅为研究鱼类趋化因子CXCL10分子在先天免疫反应中的作用机理奠定基础，而且通过基因序列可以获得具有生物活性的蛋白产物，为进一步研究CXCL10的免疫学功能提供理论基础；此外，本发明专利技术的基因还可以用于抗病相关性研究，该基因在鮸鱼抵抗病原微生物入侵中具有重要功能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鱼类免疫器官中表达的基因序列，更具体涉及一种从鯢鱼脾脏和肾脏 SMART cDNA文库中筛选出的一个新α类趋化因子基因CXCLlO的核苷酸序列、氨基酸序列及其时空表达图谱。
技术介绍
动物免疫包括先天性免疫和获得性免疫两种。先天性免疫是指生物体所具有的对病原体和有害异物的基本天生抵抗性和防御性。先天免疫对绝大多数的病原体和有害异物具有快速、有力和非特异性作用的特点，尤其是在应对一些毒力发挥快，极易造成疫病暴发的病原体入侵中，能否对入侵病原体进行有效的先天免疫往往是宿主动物存活与否的关键。先天免疫包括从体表到体内细胞及分子等不同层次的防御体系。体表屏障较易被病原体突破，且一旦突破后则经常引起组织损伤，为其他潜在的病原体入侵提供有利途径，此时在细胞及分子层次上以炎症反应为主的一系列复杂免疫反应对杀灭入侵病原体具至关重要的作用。趋化因子大多是能结合肝素的多肽，主要由白细胞分泌，通过受体介导引起粒细胞、单核细胞及淋巴细胞的定向迁移和活化，对淋巴细胞再循环，炎症反应以及抗肿瘤等方面具有重要作用。依照保守的半胱氨酸残基，可分为CXC ( α )，CC ( β )，C ( γ )和CX3C (S)四类。α类趋化因子是最早鉴定的具有趋化嗜中性粒细胞的趋化因子，同时其也具有趋化单核细胞和淋巴细胞的功能。α类趋化因子专门吸引能表达CXCRl和CXCR2的嗜中性粒细胞。它们能在很广泛的细胞中对许多刺激物作出反应，特别是对像白细胞介素I和肿瘤坏死因子这样的前炎症细胞因子。主要的作用是促进嗜中性粒细胞与内皮细胞的黏附以及随后的相关基质蛋白和细胞表面物质沿着趋化因子的浓度梯度向炎症灶的定向移动并清除入侵病原体和有害异物。因此，对趋化因子基因超家族成员的克隆鉴定及其蛋白产物的结构和功能研究无疑能为鱼类先天免疫分子机制解析及提高鱼体抗病力提供坚实的技术支撑。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种新的鯢鱼α类趋化因子基因序列及对应氨基酸序列、检测方法和在制备鯢鱼抵抗病原微生物入侵产品中的应用。为实现本专利技术的专利技术目的，专利技术人提供如下技术方案一种鯢鱼α类趋化因子基因CXCL10，具有如SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。一种鯢鱼α类趋化因子基因CXCL10，它编码的蛋白质具有如SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列。本专利技术所述的基因CXCLlO是从鯢鱼脾脏、肾脏的SMART cDNA质粒文库中筛选到的一个基因，其cDNA序列和编码的蛋白质序列如下。该基因cDNA全长1157bp，自74bp 到442bp区段为其开放阅读框，编码122个氨基酸，5’端非翻译区长73bp，3’端非翻译区长7Mbp，有1个mRNA半衰期信号，多聚腺苷酸加尾信号(AATAAA)及多聚腺苷酸尾巴。在 Genbmk中进行同源性分析确定其为趋化因子基因超家族成员。CXCLlO基因的cDNA序列如下 ggggactacagatagtccagactgaagaaagactgagtgcactgtgatccagaacccgtctacagcaacaactATGAATTCAGCTGCTGTTGCCTTTCTCGTCTGCCTGCTTGTCTTCTATACACAAGGGCAACCAACCAACAGATCTA TTAAGTGTAAGTGTTTAAACGGTTATGTGGGCAAAATCAAACCACAAGACATCAAGGCAGGGCCTGTCACACATGAG CCAAGTATCTTCTGTCCACGTACAGAGATTATTATTACAACAACAGAAAATAGGGAGAAATGTGTGAATCCACGCTC ACCACTCGGAAAACTCATCCTGAAAAACAAAAACAAGTACCAGAAAAATGCAACTGTGAATACGACAGCAGCTTCAA GCTCAACGGACACGACAGCAGCTTCAAGCTCAACAAGACACCACACAACATCCAGGCTGTAGgactctgccactgca ctgaagaggatggagctgaaacactttttattgttgttgttcaccatcactgccttttatcaagtaaatacaataag tgggtagaagtgatcaaagtgtctgtttgtcctcttatatttgttgtggagaaattgctgaagtcagtggtcaatgg tgaggtcaggaaggaagaaagtgttcaggagcctctgatgtcttatgctgtatta^tttattgacgcttggccaagaa gaattagagacactctcaaagtacatcagaagtgcctgagtcggtctcacattctgccaaactcatcctggtggata gactttaaacccctacagataacaccacaaatactatacgcccagaattagccaaagagaatgtttttacccatgca ggtgttattctcagcatattctagtctggagacacagatgtctgtttacacagattggaacgtcaacggccagctat ctattatgtctatgaaggcagcaatagtctcttcgaccctggccaccacactgttgagatagactggcacctactgt tcccaatcaaagccaaacaattaatactgccgaggaccttaaggcccacacgtgaccttgtgtaagctaaggataaa aaattccataacaacattgtcttcatgtgtacataccaaataaatcatctgtatatactttttaagcaaaaaaaaaaCXCLlO基因编码的蛋白质序列如下 MNSAAVAFLVCLLVFYTQGQPTNRSIKCKCLNGYVGKIKPQDIKAGPVTHEPSIFCPRTEIIITTTENREKCVNPRSPLGKLILKNKNKYQKNATVNTTAASSSTDTTAASSSTRHHTTSRL。本专利技术还提供了一种鯢鱼α类趋化因子基因CXCLlO的检测方法，其中，所述的检测方法至少包括使用一对荧光定量PCR引物，所述的一对荧光定量PCR引物由上游引物和下游引物组成，其中，所述的上游引物(CXCL10-RT-F)具有如SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列；下游引物(CXCL10-RT-R)具有如SEQ ID NO. 4所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了上述的一种鯢鱼α类趋化因子基因CXCLlO在制备鯢鱼抵抗病原微生物入侵产品中的应用。作为优选，根据本专利技术所述的一种鯢鱼α类趋化因子基因CXCLlO在制备鯢鱼抵抗病原微生物入侵产品中的应用，其中，所述的病原微生物包括鳗弧菌。专利技术人运用实时荧光定量PCR技术检测了 CXCLlO在鯢鱼的鳔、眼球、鳍条、鳃、心脏、小肠、肾脏、肝脏、肌肉、脾脏中的转录本水平，结果表明该基因在所检测的十个组织中均有mRNA转录本存在，其中在小肠中的丰度最高，其次在眼球中，而在其他组织中则只检测到较少量的mRNA转录本存在。另外还检测到经鳗弧菌刺激后的脾脏和肾脏中的CXCLlO 基因表达量呈上升趋势，明显较正常水平高，这提示该基因在鯢鱼抵抗病原微生物入侵中具有重要本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种鮸鱼α类趋化因子基因ＣＸＣＬ１０，具有如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． １所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐田军，王日昕，程远志，石戈，孙悦娜，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：33
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