本发明专利技术公开了一种流动注射化学发光法在线检测赤霉素的方法。配制硫酸铈铵溶液(Ce(IV))，Na2SO3溶液，赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液。主动泵分别将上述的Na2SO3溶液和赤霉素标准溶液以30～60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以30～60r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10～20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；重复上述操作，测试样品赤霉素化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量。本发明专利技术检测方法简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，宜于应用到工业或农业生产中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属植物化学、植物生理学、植物病理学、植物保护、天然产物化学、食品化学、分析化学、有机化学、生物化学、植物次生代谢物质的生理学领域，特别涉及。
技术介绍
赤霉素是广泛存在的一类植物激素，是五大类植物激素之一。其化学结构属于二萜类酸，由四环骨架衍生而得，能打破种子的休眠期，促进植物生长，现在通常用赤霉菌深层发酵生产赤霉素，产物中有数十种之多，其中最主要的活性成分是赤霉素A3，又称赤霉酸 (gibberellic acid)，赤霉素A3分子结构具有氧化还原的特点。赤霉素不仅对水稻、棉花等经济作物有多种作用，而且可以药用；医用赤霉素可作为外用药，有止痒、收敛、生肌、长皮的作用，对皮肤损伤、糜烂、溃疡病灶以及内科一些常见疾病都有一定的疗效。植物体内内生的真菌-赤霉菌含量的高低对植物的生长很重要，如果植物体内生或外源的霉菌大量繁殖会诱发出过量的赤霉素，过量的赤霉素会导致小麦、水稻作物等发生立枯病、枯叶病、枯尖病以及根腐病等；植物体内的内生真菌-赤霉菌过于缺乏会导致植物体内赤霉素含量过低而诱发出矮秆或矮化等疾病，而本专利技术所述的流动注射化学发光法在线检测赤霉素的方法可用于监控植物的育种、栽培及植物保护等。这种方法是物理学的流动注射和化学的化学发光相结合，利用化学物质在氧化还原反应过程中有荧光或磷光， 对该部分光信号转变成电信号，再进一步信号放大，依据发光强度达到定量分析的目的。目前分析检测方法有①高效液相色谱法(张超英等1993;李建飞，王德良 2010)、②薄层色谱法(程国华等1991)、③荧光分光光度法(罗国安等1990 ；索兰弟等 1996)、④紫外-可见光分光光度法(王保勤，牛吉山2007)、⑤红外光谱法(何伟平1991)寸。各种检测方法的缺点①高效液相色谱法仪器比较贵，同时要有该专业技术人员， 一般赤霉素加工厂不易实现，另外专用色谱纯的流动相和色谱柱比较贵，以及高压液相色谱法等仪器不方便携带；②薄层色谱法所用的化学试剂比较多，实验过程复杂，适合于小样品的纯化；③荧光分光光度法的检测限比较高；④紫外-可见光分光光度法反应时间长，测样速度慢；⑤红外光谱法的线性范围窄，容易受其他杂质干扰。这几种方法都适合于大学及研究所对赤霉素的研究；相比之下，流动注射化学发光法灵敏度高，线性范围宽，仪器设备简单，越来越受人们青睐。由于在H2S04酸性介质中，赤霉素可以增敏Ce (IV) -Na2S03体系产生化学发光这一现象，据此，本专利技术提出这种测定赤霉素的化学发光体系，并结合流动注射技术，建立起了一种简单、快速测定赤霉素的新方法。该方法不仅有足够的灵敏度和稳定性，而且有很好的选择性
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。具体步骤为用0. 08 0. 12mol/L H2SO4 作为溶剂配制 5. OX KTW/L 的硫酸铈铵(Ce (IV))， 用二次蒸馏水作为溶剂配制ι. ο X 10-2mol/L的Na2SO3溶液，用pH为5 7的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠磷酸缓冲液(0. 1 0. 3mol/L)为溶剂配制浓度为2. 5mg/mL赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液。主动泵分别将上述浓度的载流Na2SO3溶液和赤霉素标准溶液以30 60r/ min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后， 副动泵将硫酸铈铵溶液以30 60r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10 20秒， 各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品赤霉素的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量。 上述测试过程及各种化学试剂(亚硫酸钠、硫酸铈铵及待测样等)均保持在35°C恒温条件下，上述试剂均为分析纯。在优化的条件下，赤霉素标准溶液的浓度在5. 0 X 10_3 1. 0 X KT1mgAiL范围内与发光强度Δ I呈线性关系，这表明可利用这一方法对赤霉素作定量分析。本专利技术所述流动注射化学发光法由于其灵敏度高，重复性好，线性范围宽，仪器设备简单，操作简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，易于应用到工业或农业生产中。附图说明附图为本专利技术所述赤霉素A3分子结构图。赤霉素A3分子结构具有氧化还原的特点，被氧化时有荧光释放出来，这种光能够被具有独特电化学发光检测功能的仪器检测，被氧化的信号强度与其分子结构上的羟基数量成正比，由此分析赤霉素。具体实施例方式实施例用0. lmol/L H2SO4作为溶剂配制5. 0 X 10_4mol/L的硫酸铈铵(Ce(IV))，用二次蒸馏水作为溶剂配制ι. ο X 10_2mOl/L的Na2SO3溶液，用pH为6. 2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠磷酸缓冲液(0. 2mol/L)为溶剂配制浓度为2. 5mg/mL赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液。 主动泵分别将上述浓度的载流Na2SO3溶液和赤霉素标准溶液以45r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以45r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间15秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品赤霉素的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量。上述测试过程及各种化学试剂(亚硫酸钠、硫酸铈铵及待测样等)均保持在35°C恒温条件下，上述试剂均为分析纯。权利要求1. ，其特征在于具体步骤为用 0. 08 0. 12mol/L H2SO4作为溶剂配制5. 0X 10_4mol/L的硫酸铈铵Ce(IV)，用二次蒸馏水作为溶剂配制1. OX 10_2mol/L的N S03溶液，用pH为5 7，浓度为0. 1 0. 3mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠磷酸缓冲液为溶剂配制浓度为2. 5mg/mL赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液；主动泵分别将上述浓度的载流Na2SO3溶液和赤霉素标准溶液以30 60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪；待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以30 60r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10 20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品赤霉素的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量；所述测试过程及各种化学试剂均保持在35°C恒温条件下，所述试剂均为分析纯。全文摘要本专利技术公开了。配制硫酸铈铵溶液(Ce(IV))，Na2SO3溶液，赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液。主动泵分别将上述的Na2SO3溶液和赤霉素标准溶液以30～60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以30～60r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10～20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；重复上述操作，测试样品赤霉素化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量。本专利技术检测方法简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，宜于应用到工业或农业生产中。文档编号G01N21/76GK102253034SQ20111009431公开日2011年11月23本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种流动注射化学发光法在线检测赤霉素的方法，其特征在于具体步骤为：用０．０８～０．１２ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４作为溶剂配制５．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ的硫酸铈铵Ｃｅ（ＩＶ），用二次蒸馏水作为溶剂配制１．０×１０－２ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ２ＳＯ３溶液，用ｐＨ为５～７，浓度为０．１～０．３ｍｏｌ／Ｌ的磷酸氢二钠－磷酸二氢钠磷酸缓冲液为溶剂配制浓度为２．５ｍｇ／ｍＬ赤霉素标准溶液和样品赤霉素溶液；主动泵分别将上述浓度的载流Ｎａ２ＳＯ３溶液和赤霉素标准溶液以３０～６０ｒ／ｍｉｎ的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪；待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以３０～６０ｒ／ｍｉｎ的流速通过十六通注射阀，注样时间１０～２０秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品赤霉素的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品赤霉素的含量；所述测试过程及各种化学试剂均保持在３５℃恒温条件下，所述试剂均为分析纯。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郝再彬，蒋泽军，张达，龙施华，王秀丽，刘红艳，
申请(专利权)人：桂林理工大学，
类型：发明
国别省市：45
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