【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物工程领域，特别涉及一种在酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)细胞壁外表面展露表达脂肪酶以提高该酶活性的方法。
技术介绍
酯是一大类在化工、食品、医药等领域广泛应用的重要产品或中间体，仅用作食用香料的酯即达数百种。各种酯的合成路线相同，均以羧基供体(如酸、酸酐)和羟基供体 (如醇、淀粉等)为原料，通过酯化反应制备。用产脂肪酶的微生物细胞已能进行许多种酯的生物合成。与酯的化学合成相比， 酯的生物合成具有效率更高、反应条件温和、能耗低等优点。但目前应用的脂肪酶主要存在以下问题酶的重组表达方式一般是细胞内表达和分泌表达。细胞内表达时由于酶不能与细胞外底物接触，从而极大地影响酶的催化效率，而且酶分子集聚在细胞内形成反馈抑制， 也影响表达效率。分泌表达的主要缺点是表达效率不高，而且也不能实现完全分泌表达，总有相当一部分表达产物滞留于细胞内，从而也不能实现酶与细胞外底物的完全接触。这两种表达方式都导致酶催化效率不高。本专利技术开发一种将脂肪酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面的技术，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高脂肪酶活性。
技术实现思路
针对现有的脂肪酶催化效率低的问题，本专利技术提供一种将脂肪酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面的技术，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高脂肪酶活性。本专利技术的，包括以下步骤将脂肪酶基因(Genbank 号AF229435)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号164)的N端， 然后插入酿酒酵母表达载体GALl启动子(Genbank号AY428072)下游MF α...
【技术保护点】
１．一种提高脂肪酶活性的方法，其特征在于包括以下步骤：将脂肪酶基因连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列的Ｎ端，然后插入酿酒酵母表达载体ＧＡＬ１启动子下游ＭＦα１信号肽序列的Ｃ端，构建成表达框，表达框从Ｎ端到Ｃ端：ＧＡＬ１启动子＋ＭＦα１信号肽序列＋脂肪酶基因＋α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：阮晖，陈美龄，马风兰，陈赟，廖文艳，徐娟，王睿之，周陈伟，何国庆，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86
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