一种检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白诊断试纸，其特征在于：样品垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在底板上，金标结合垫放在样品垫上，在上层覆盖PE标签保护膜组装而成；其中金标结合垫上包被有胶体金标记的H-FABP小鼠单抗；硝酸纤维素膜上分别包被有H-FABP小鼠单抗构成的检测线T线和包被有H-FABP二抗构成的质控线C线。本发明专利技术的诊断试纸不仅特异性强，灵敏度高，不需要任何的辅助仪器，而且所需检测样品为尿液，方便患者自行取样，具有无创性的优点；同时，检测时间仅需5分钟，为确定或排除心肌梗死提供了方便快捷的方法，为早期治疗争取了宝贵的时间。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫化学检测
，具体涉及一种借助胶体金标记显色的免疫层析反应，用来快速检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白的诊断试纸的制备方法。
技术介绍
急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是常见的心血管疾病，有较高的发病率及病死率。最新的AMI诊断建议是以心肌坏死标志物为基础指标，结合病史、心电图、影像学改变、PCI、冠脉造影、心肌生化标志物的新诊断标准。心脏型脂肪酸结合蛋白(heart-typefatty acid binding protein, H-FABP)作为心肌损伤标志物，具有较高的敏感性和特异性，正在逐渐得到临床医生的认可，成为AMI 早期诊断的有效指标。H-FABP是一种可溶性细胞质蛋白，特异地存在于心肌组织中，分子量仅为14 15KD，正常人的血浆和尿中几乎不含有H-FABP。当心肌缺血或受损后，H-FABP被迅速释放入血，并原样从肾脏清除、尿液中排出；H-FABP在血中1.4士0.证达峰值，在尿中3士0. 6h 达峰值，可见尿液H FABP与血浆H FABP对早期急性心肌梗塞(AMI)具有同等的诊断价值。目前临床检测H-FABP的手段，均以血清或血浆为检测样本，采用双抗体夹心 ELISA试剂盒等检测方法，检测时间长，采集血样需进行分离处理，易发生溶血现象，不能满足为确定或排除心梗快速提供结果的要求。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术的目的在于通过对心脏型脂肪酸结合蛋白的检测技术研究，提供了一种检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白的诊断试纸及其制备方法。该诊断试纸不仅特异性强，灵敏度高，不需要任何的辅助仪器，而且所需检测样品为尿液，方便患者自行取样，具有无创性的优点；同时，检测时间仅需5分钟，为确定或排除心肌梗死提供了方便快捷的方法，为早期治疗争取了宝贵的时间。本专利技术的目的是这样实现的一种检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白诊断试纸， 其特征在于样品垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在底板上，金标结合垫放在样品垫上， 在上层覆盖PE标签保护膜组装而成；其中金标结合垫上包被有胶体金标记的H-FABP小鼠单抗；硝酸纤维素膜上分别包被有H-FABP小鼠单抗构成的检测线T线和包被有H-FABP 二抗构成的质控线C线。本专利技术的目的还可以这样实现所述的金标结合垫上包被有胶体金标记的 H-FABP小鼠单抗的制备方法如下所述的金标结合垫上包被胶体金标记的H-FABP小鼠单抗的制备方法如下(1)取胶体金溶液，用0. IM碳酸钾溶液调整PH为8. 0-9. 0，搅拌5min ；逐滴加入 H-FABP小鼠单抗，继续搅拌30min，加入5 %的牛血清白蛋白使其终浓度为1 %，搅拌15min， 静止Ih后，4°C保存备用；(2)将上述(1)步骤制备的金标H-FABP抗体结合物在12000rpm、4°C条件下，离心 30min，弃上清液，沉淀物用含BSA、0. 02% NaN3的PB液，将沉淀重悬为原体积的1/10， 4°C保存，将金标H-FABP抗体结合物喷涂于玻璃纤维膜上，室温干燥。(3)将上述⑵步骤制备的金标H-FABP抗体结合物喷涂于玻璃纤维膜上，室温干燥后，将膜用0. 05mol/L PH8. 0-9. 0的TBS浸洗3次，每次3min，用去离子水冲洗一次，浸入 0. 05mol/L PH3. 0-5. 0的柠檬酸缓冲液平衡5min，浸入37°C银染液中20-30min，将膜取出， 用去离子水冲洗，放入定影液lmin，去离子水冲洗，空气干燥。所述的硝酸纤维素膜上包被有H-FABP小鼠单抗构成的检测线T线是将H-FABP小鼠单抗喷涂于硝酸纤维素膜上，室温干燥后作为检测线T线。所述的硝酸纤维素膜上包被有H-FABP 二抗构成的质控线C线是将H-FABP 二抗喷涂于硝酸纤维素膜上，室温干燥后作为质控线C线。所述的底板是PVC板。本专利技术，其特征在于(一)金标结合垫的制备1)胶体金颗粒的制备取0. 01% HAuCl4水溶液100ml，加入1 %枸橼酸三钠水溶液anl，加热煮沸15min-30min，直至颜色变红；室温冷却后加入0. IMol/L K2CO3O. 5ml，混勻即得直径约15nm的胶体金颗粒，4°C保存；2)胶体金与H-FABP小鼠单抗用量比例的确定a、取IOml胶体金溶液，用0. IM碳酸钾溶液调整PH为8. 0-9. 0，搅拌5min，分装10 管，每管Iml ；b、将H-FABP小鼠单抗以0. 005Mol/L pH9. 0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5 μ g/ ml-50y g/ml，分别取1ml，加入上述胶体金溶液中，混勻；对照管只加Iml稀释液；c、5min后，在上述各管中加入0. Iml 10% NaCl溶液，混勻后静置浊，观察结果；d、结果观察，对照管和加入H-FABP小鼠单抗的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入H-FABP小鼠单抗量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色不变；以稳定Iml胶体金溶液红色不变的最低H-FABP小鼠单抗用量，即为H-FABP小鼠单抗的最低用量；3)胶体金标记H-FABP抗体的制备、纯化a、取IOml胶体金溶液，用0. IM碳酸钾溶液调整PH为8. 0-9. 0，搅拌5min ；逐滴加入H-FABP小鼠单抗继续搅拌30min，加入5%的牛血清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%，搅拌15min，静止Ih后，4°C保存备用；b、纯化将上述胶体金H-FABP抗体结合物在12000rpm、4°C条件下，离心30min。 弃上清液，沉淀物用含BSA、0. 02% NaN3的PB液，将沉淀重悬为原体积的1/10，4°C保存 4)银染色的处理将纯化后的金标H-FABP小鼠抗体结合物喷涂于玻璃纤维膜上， 室温干燥后将膜用0. 05mol/L PH7. 0-9. OTBS浸洗3次，每次;3min，用去离子水冲洗一次，浸入0. 05mol/L PH3. 0-5. 0柠檬酸缓冲液平衡5min，浸入37°C的银染液中20-30min，将膜取出，用去离子水冲洗，放入定影液lmin，去离子水冲洗，空气干燥，4°C保存备用；即得金标结合垫⑵；( 二)包被检测线T线和质控线C线的硝酸纤维素膜的制备将H-FABP小鼠单抗和H-FABP 二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜上，室温干燥，作为检测线T线和质控线C线，密封，4°C保存备用；(三)试纸的组装底板从一端依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜，吸收垫，金标结合垫放在样品垫上，然后在上层覆盖PE标签保护膜组装而成。与H-FABP的现有检测方法相比，本专利技术涉及的检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白的诊断试纸条具有如下优点和显著的进步(1)检测样品无需处理以尿液为检测样品，尿液H-FABP含量与血浆H-FABP含量对早期急性心梗(AMI)具有同等的诊断价值，病人可自行采集尿液，且样品可直接进行检测，无需前期处理，省略了以血清或血浆为样本需要对采集血样进行处理的过程，避免了样品处理过程中可能出现的溶血现象导致样品不能使用的问题，具有方便和无创性的优点；(2)检测速度快检测时间只需5分钟，能够快速为诊断提供判断依据；(3)检测准确率高、特异性强采用本专利技术方法所制H-FABP试纸与H-FABP ELI本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白诊断试纸，其特征在于：样品垫（１）、硝酸纤维素膜（３）、吸收垫（４）依次粘附在底板（５）上，金标结合垫（２）放在样品垫（１）上，在上层覆盖ＰＥ标签保护膜组装而成；其中金标结合垫（２）上包被有胶体金标记的Ｈ－ＦＡＢＰ小鼠单抗；硝酸纤维素膜（３）上分别包被有Ｈ－ＦＡＢＰ小鼠单抗构成的检测线Ｔ线（６）和包被有Ｈ－ＦＡＢＰ二抗构成的质控线Ｃ线（７）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭超，王丽丽，
申请(专利权)人：吉林雅强医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：82
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