拮抗血管新生诱导因子的融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抑制血管新生的融合蛋白及其用途。具体地，本发明专利技术涉及抑制多种血管新生因子的融合蛋白及其用途。更具体地，本发明专利技术涉及VEGF受体和FGF受体的融合蛋白及其在治疗与血管新生调控相关的疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及拮抗血管新生诱导因子的融合蛋白及其用途。具体地，本专利技术涉及抑制多种血管新生因子的融合蛋白及其用途。更具体地，本专利技术涉及VEGF受体和FGF受体的融合蛋白及其在治疗与血管新生相关的疾病中的用途。
技术介绍
血管新生(Angiogenesis)是导致恶性肿瘤生长和转移的基本要素之一 。血管新生过程受多种因子的调节，有些因子促进血管新生，有些因子抑制血管新生，因而，血管新生的调控是一个十分复杂的动态平衡过程。抗血管新生治疗旨在通过阻断血管新生刺激因子或者用血管新生抑制因子阻止肿瘤中血管的新生，从而达到控制肿瘤生长的目的。目前已经知道相当数目的血管新生刺激因子，例如血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor， VEGF)、@ 千会IfiHISi (Fibroblast growth factor, FGF)、肝细胞生长因子 Ofepatocyte growth factor, HGF)、DDRU EphAU EphA2、EphA8、 EphBl、、EphB4、EGFR、HER-2、ErbB3、MET、RON、CSF1R、KIT、PDGFR-A、PDGFR-B, TEK、Tie-I 等，这些因子能刺激血管内皮细胞的分裂、分化和血管的形态发生。其中，VEGF是目前所知对血管新生最特异、最有效的生长因子。在肿瘤组织内的缺氧环境中，肿瘤细胞分泌大量的VEGF，诱导血管内皮细胞的分裂和迁移，最终建立肿瘤血管网络。众多动物试验证明，抑制VEGF能阻止血管新生，进而抑制肿瘤的生长。正因为此，VEGF及其受体是抗血管新生药物最重要的靶标，目前在临床试验中取得显著疗效的抗血管新生药物有贝伐单抗(Bevacizumab，商品名Avastin)，它能够直接阻断VEGF，抑制肿瘤血管的新生，于2004年被美国FDA批准上市作为结直肠癌的一线用药，是第一个被批准上市的通过抑制血管新生发挥抗癌作用的新药。Avastin是一种人源化的抗VEGF的单克隆抗体，由美国著名生物技术公司Genentech生产。在大规模三期临床试验中，Avastin与化疗联合用药可以显著延长多种肿瘤病人的生存时间，包括直肠癌、肺癌、乳腺癌、肾癌等。Avastin在临床上的成功具有划时代的意义，它证明以肿瘤血管系统为靶标的抗血管新生治疗是一个在临床上有效的治疗手段，为多种肿瘤的治疗开辟了一个全新的途径。在西方国家，Avastin已在肿瘤治疗上得到广泛应用，是目前全球销售额最大的药物之一。除了 Avastin，还有若干个抗VEGF信号的药物正处于人体临床试验的后期，有望在将来几年进入临床应用。其中，美国生物技术公司Regeneron和Sanofi-Aventis合作的 Afliberc印t (或称VEGF-Trap)目前正在进行大规模第三期临床试验。Imclone公司的抗VEGF受体II (VEGFR2)单克隆抗体药物IMC-1121B也在第三期临床试验。毫无疑问，这些新药将为癌症的治疗提供新的选择，给病人带来新的希望。抗VEGF药物在肿瘤的临床治疗上取得了重大的进展，但是，临床试验也显示抗 VEGF治疗也存在相当大的局限。从肿瘤的治疗效果看，Avastin对直肠结肠癌病人能延长半数生存时间约3-4个月，对乳腺癌病人能延长半数生存时间约为7-8个月，因此，Avastin并不能长期有效地抑制肿瘤血管的生长。因此，如何进一步提高抗血管新生的临床治疗效果是肿瘤研究者需要解决的问题，也是研究开发下一代抗血管新生药物的重点ο导致抗VEGF治疗失败或产生抗性的的根本原因可能在于肿瘤血管新生是受到多种因子控制的，尽管VEGF在血管新生中起到重要作用，但它不是唯一的血管新生刺激因子。同时，由于肿瘤细胞的非均质性和肿瘤微环境的复杂性以及机体的代偿性反应机制，当 VEGF的活性被长时间抑制，其它血管新生刺激因子便会被表达，从而使肿瘤血管的生长不再依赖于VEGF信号途径。Hanahan的小组研究了胰岛肿瘤在接受抗VEGFR2治疗过程中肿瘤表达血管生长因子的变化，发现在抗VEGF的治疗过程中有若干基因的表达发生了变化，其中最为突出的是FGF-2的表达显著增加，研究表明对抗VEGF治疗出现耐受的肿瘤中FGF，尤其是FGF-2的表达显著增加，从而再次激活血管新生，而阻断FGF信号途径后肿瘤再生则被抑制。由此可见FGF-2的过度表达与肿瘤获得逃逸抗VEGF治疗的能力有着密切的关系。因此，同时抑制VEGF和FGF-2将可以更有效地治疗肿瘤等血管增生性疾病。目前小分子药物在双重或多重靶标拮抗方面已经取得了一定的进展，证明同时拮抗VEGF和FGF-2的抗肿瘤效果要优于单一靶向抗肿瘤治疗。但是小分子多靶标拮抗剂由于缺乏特异性，往往造成难以预测的副作用，这种副作用有时要在临床试验后期才显现，因此具有很大的风险。而大分子蛋白药物，尤其是Fc融合蛋白和单克隆抗体，具有特异性强、体内半衰期长等优点，是药物研发的重点领域，具有小分子药物不具有的优点。成纤维细胞生长因子(FGF)是结合肝素的生长因子家族，在哺乳动物中其具有22 个家族成员(FGF 1-14，16-23)。FGF在多种生物学功能上具有重要作用，例如细胞增殖、分化、迁移、血管新生和肿瘤发生。其通过结合并活化细胞表面FGF受体(FGFR)发挥其多种生物学功能。(参见,例如 Eswarakumar et al. Cytokine Growth Factor Rev. 16 139—149， 2005)。成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR)是与成纤维细胞生长因子家族成员相结合的受体。成纤维细胞生长因子受体中的一部分参与疾病过程。哺乳动物中有四个FGFR基因fgfRl-fgfR4。成纤维细胞生长因子受体由胞外区、跨膜结构域和胞内结构域组成。FGFR家族成员中，其配体结合性质和激酶结构域各有不同，但是都具有相似的胞外区。它们的胞外区包含三个免疫球蛋白样(Ig样)结构域第一 Ig样结构域、第二 Ig样结构域和第三Ig样结构域，在第一和第二 Ig样结构域之间还包含一段序列，在本文中，我们将所述第一 Ig样结构域和第二 Ig样结构域之间的序列称为FGFR Ig样结构域中间功能性序列区。所述中间功能性序列区包含一个酸性氨基酸区段，称为酸性盒 (acidic box, AB)0鉴于VEGF和FGF (尤其是FGF-2)在肿瘤血管新生中的重要作用，我们认为双重拮抗VEGF和FGF (尤其是FGF-幻的大分子蛋白药物将能够更好地抑制肿瘤血管的新生，在临床上得到更好的治疗效果。但到目前为止，尚未有成功构建对VEGF和FGF具有双重阻断作用的大分子融合蛋白的报道。因此，本研究旨在探索构建一种能同时拮抗VEGF和FGF(尤其是FGF-2)的Fc融合蛋白，该融合蛋白利用受体的特异性和高亲和力，将能同时阻断VEGF 和FGF信号。本研究的VEGF和FGF双重拮抗融合蛋白质将采用全人源的蛋白质序列，结合Fc融合蛋白优良的药物动力学特性，将具有良好的成药条件和临床应用的潜力。另一方面，在双靶标融合蛋白中，融合蛋白对各靶标的亲和力有赖于正确的蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．抑制血管新生的融合蛋白，其包含衍生自至少两种血管新生抑制剂的至少两个血管新生抑制单元。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：房健民，李栋，
申请(专利权)人：烟台荣昌生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：37