番茄TFT1基因在提高作物耐盐性中的应用。获取TFT1的DNA序列，以PCR手段从番茄体内克隆了TFT1基因的编码区，经测序鉴定后连接至改造过的载体pBI121，见图1，再以蘸花法转化目标作物。无论在正常生长条件下还是在盐胁迫的条件下，转TFT1作物都具有较高的APX活性，表明TFT1具有提高作物耐盐性能的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程
，涉及番茄TFTl基因在提高作物耐盐性中的应用。
技术介绍
土壤盐渍化是我国粮食减产的重要原因之一。改良盐渍地的途径与方法很多，近年来研究表明提高植物耐土壤盐渍化的遗传潜力也是有效的方法之一。近年来，许多研究表明植物14-3-3蛋白在调控植物抵御盐胁迫过程中可能扮演主要角色。人们利用转基因植物和突变体为材料在植物耐盐机制方面做了许多工作，但14-3-3蛋白在方面的作用研究较少。尽管14-3-3蛋白在调控植物抵御盐胁迫过程中可能扮演主要角色，但这方面的直接证据较少。番茄是适应性很强的作物，从北极圈到赤道都有栽培。尽管番茄对各种气候条件适应性很强，但不良环境因子的胁迫对产量的影响仍然很大，盐胁迫是这些不良环境之一且严重影响番茄的产量和品质。因此，提高番茄的耐盐能力具有重要意义。番茄体内 14-3-3蛋白基因家族共有12个成员，TFTl是其中的第一号成员。因此，本研究构建了过量表达TFTl的转基因拟南芥，以转TFTl拟南芥和野生型对照拟南芥作比较(Columbia)，研究了植物耐盐过程中TFTl角色和功能效应，能为通过分子生物学手段提高植物耐盐的能力和改良环境盐渍化提供能应用的基因，也为通过分子育种手段提高番茄的耐盐能力打下进一步的研究基础。
技术实现思路
技术问题本专利技术针对土壤盐渍化的现状，通过番茄TFTl基因提高植物耐土壤盐渍化的遗传潜力，从而提高作物耐盐性。技术方案番茄TFTl基因在提高作物耐盐性中的应用。获取TFTl的DNA序列， 以PCR手段从番茄体内克隆了 TFTl基因的编码区，经测序鉴定后连接至改造过的载体 PBI121，见图1，再以蘸花法转化目标作物。有益效果无论在正常生长条件下还是在盐胁迫的条件下，转TFTl作物都具有较高的APX活性，表明TFTl具有提高作物耐盐性能的作用。附图说明图1转化拟南芥的载体；图2TFT1的空间结构；图3野生型和转TFTl拟南芥体内At_L23a和TFTl基因的表达；图4盐胁迫下，野生型和转TFTl拟南芥体内H2A和MDA含量；三条数据为一组，从左至右分别为WT/L2/L6。图5盐胁迫下，野生型和转TFTl拟南芥体内酶活性变化。三条数据为一组，从左至右分别为WT/L2/L6。具体实施例方式实施例1材料与方法植物材料、生长状态、盐胁迫处理我们培养番茄的手段为水培，营养液为l/5H0agland。我们利用MS板(0. 8% agar 和3% sucrose)培养拟南芥。处理手段为0，80，100，115，130和150mM NaCl。我们以100 颗左右的拟南芥种子做萌发试验，播MS板5天后计数，以胚根穿出种皮为萌发。对于生长试验，我们取正常萌发5天后的生长一致的拟南芥为材料，将其移到MS板生长10天后，取拟南芥植株(苗龄15天)于液氮固定后，储存于-80°C冰箱以待分析用。每次试验重复三次，每次取10颗拟南芥植株。另外，每次试验至少重复两次(生物重复)。构建转基因拟南芥提取番茄RNA 和逆转录为 cDNA(Xu WF and Shi WM. 2006. Expression of profiling of the 14-3-3 gene family in response to salt stress and potassium and iron deficiencies in young tomato(Solanum lycopersicum)roots :analysis by real-time RT-PCR. Annals of Botany，98 :965-974.)。我们从 NBCI 的网站上得到 TFTl 的DNA序列，以PCR手段从番茄体内克隆了 TFTl基因的编码区，经测序鉴定后连接至改造过的载体PBI121，见图1。所有分子操作的方法见《分子克隆实验指南》第三版(Sambrook et al.，1989)。我们以蘸花法转化拟南芥(Clough SJ, Bent AF. 1998. Floral dip :a simplified method for Agrobacterium—mediated transformation of Arabidopsis thaliana. The Plant Journal 16:735-743.)。经过一系列的筛选、培养、鉴定之后，我们最后以转基因T3代的纯合系为材料进行试验分析。Real-time RT-PCR ；Real-time RT-PCR 方法见(Xu WF and Shi WM. 2006. Expression of profiling of the 14-3-3 gene family in response to salt stress and potassium and iron deficiencies in young tomato(Solanum lycopersicum)roots :analysis by real-time RT-PCR. Annals of Botany, 98 :965-974.)。表1 拟南芥 Real-time RT-PCR 的引物权利要求1.番茄TFTl基因在提高作物耐盐性中的应用。2.番茄TFTl基因在提高作物耐盐性中的应用，其特征在于获取TFTl的DNA序列，以 PCR手段从番茄体内克隆了 TFTl基因的编码区，经测序鉴定后连接至载体pBI121，再以蘸花法转化目标作物。全文摘要番茄TFT1基因在提高作物耐盐性中的应用。获取TFT1的DNA序列，以PCR手段从番茄体内克隆了TFT1基因的编码区，经测序鉴定后连接至改造过的载体pBI121，见图1，再以蘸花法转化目标作物。无论在正常生长条件下还是在盐胁迫的条件下，转TFT1作物都具有较高的APX活性，表明TFT1具有提高作物耐盐性能的作用。文档编号C12N15/82GK102220371SQ201110125298公开日2011年10月19日 申请日期2011年5月16日 优先权日2011年5月16日专利技术者施卫明, 许卫锋 申请人:中国科学院南京土壤研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．番茄ＴＦＴ１基因在提高作物耐盐性中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许卫锋，施卫明，
申请(专利权)人：中国科学院南京土壤研究所，
类型：发明
国别省市：84
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。