一种甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸制造技术

技术编号:6749429 阅读:519 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本实用新型专利技术涉及生物应用技术领域,特别涉及一种甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸。由上样垫、标记有HAV抗体的胶体金垫、HAV抗原垫,硝酸纤维素(NC)膜和吸样垫构成,NC膜包被有相互分离的检测(T)线和质控(C)线,在C线与T线之间喷有指示线。T线为抗人IgM抗体,C线为羊抗鼠IgG抗体。检测时将样本加在指示线上,在上样垫上加稀释液,然后观察免疫反应结果。具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。(*该技术在2020年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及生物应用
,特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测甲型肝炎病毒(HAV) IgM抗体试纸。
技术介绍
甲型肝炎是流行性肝炎的一种,由于甲型肝炎病毒(HAV)感染引起,是一类急性, 自限性疾病,预后良好,极少转变为慢性。HAV是通过粪-口途径传播的,即由病人的潜伏期或急性期粪便、血液中的甲肝病毒污染水源、食物、用具及生活密切接触经口进入胃肠道而传播。该病毒感染可引起不同程度的急性症状,包括爆发性肝炎。1988年初春,上海发生的一场突如其来的甲肝大流行,整整持续了 2个月,甲肝感染者超过35万人,死亡31人。甲肝的早期诊断具有重要意义。抗HAV-IgM是诊断甲型病毒肝炎的特异性指标。抗-HAV IgM阳性意味着患者处于甲型病毒性肝炎的急性期,并可作为早期诊断的可靠指标。免疫层析胶体金技术是一种新型的诊断技术,已得到较为广泛运用,其基本原理为利用胶体金标记一种抗原或抗体,在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体,检测时当样品中含有相应的特异性抗体或抗原时,胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物,然后在NC膜上层析,再被包被抗原或抗体捕获,形成肉眼可见的检测线,通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测等优点ο
技术实现思路
本技术的目的是提供一种具有简便、准确、快速、灵敏度和特异性高、经济实用、适合于现场检测等特点的甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸。为了达到本技术的目的采取如下技术方案一种甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,在塑料支撑板上粘贴上样垫,上样垫的一端紧密连接含有标记HAV抗体的胶体金垫,胶体金垫的另一端紧密连接的含有HAV抗原的抗原垫,抗原垫的另一端紧密连接硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线和质控线,检测线为包被在硝酸纤维素膜上的抗人IgM抗体,质控线为包被在硝酸纤维素膜上的羊抗鼠IgG抗体,在检测线和质控线之间且距检测线2. 5 3mm处划有指示线用于标识加样位置,硝酸纤维素膜的另一端紧密连接吸样垫形成试纸条,试纸条也可以装入塑料卡中形成卡式包装。所述的指示线加样量为3 5ul。所述的上样垫为玻璃纤维膜或无纺布,吸样垫为吸水滤纸。所述的甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,其特征在于所述的抗人IgM抗体的包被方法为以0. 01MpH7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1. 5mg/ml的溶液, 有喷膜机在NC膜下部以1. 3ul/cm的参数进行划线,包被T线,同时在NC膜上部包被羊抗鼠IgG作为C线,划线后将NC膜在干燥间(温度20 25°C,湿度小于30% )干燥8 10小时。所述的甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,其特征在于所述的HAV抗体标记胶体金颗粒的方法为以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30 50nm的胶体金溶液, 制备完成后取IOOml胶体金液放在烧杯中,用0. 2MK2C03调至pH8. 2,按IOOml胶体金溶液加入0. 5mgHAV单克隆抗体,室温搅拌2小时,加入终浓度0. 酪蛋白钠,0. 聚乙二醇 20000封闭20min,12000转离心30分钟,弃上清,用胶体金工作液复溶至66. 7ml,按Iml溶液铺16cm2的比例均勻地铺在玻璃纤维膜或无纺布上,再置干燥间温度20 25°C,,湿度小于30 %干燥2 4小时,制成胶体金垫,备用。所述的甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,其特征在于所述的HAV抗原垫制备方法为将HAV抗原胶体金工作液按(1 4)稀释,按Iml溶液铺18. 5cm2的比例均勻地铺在玻璃纤维膜或无纺布上,再置干燥间温度20 25°C,湿度小于30%干燥2 4小时,制成抗原垫,备用。试纸条的装配方法为在干燥室内温度20 25°C,湿度小于30%,取塑料支撑板, 将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴,在NC膜T线一侧距边缘Imm搭接抗原垫, 在抗原的另一侧距边缘Imm搭接胶体金垫,在胶体金垫另一侧距边缘2mm搭接粘贴上样垫; 在NC膜C线一侧距边缘1. 5mm处搭接吸样垫。然后用裁剪机将贴好的塑料板切成3mm或 4mm宽的试纸条。切好的试纸条可以再装入塑料卡内,形成HAV IgM抗体检测试剂卡。检测方法将被检血清或血浆平衡至室温,将制备好的试纸条或试剂卡平放,在 NC膜标示线上加入3 5ul被检样品,若样品中含抗HAV IgM抗体则被NC膜上的抗人IgM 抗体捕获,并与扩散到NC膜上的Ag-Ab-HAV-胶体金的Ag相结合,形成复合物,当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时,则形成一条肉眼可见的T线,C线作为试剂的质控标准,阳性和阴性样品检测时均会出现。用肉眼直接观察在20分钟内C、T线的出现情况,并判定检测结果。本技术甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸的优点检测时将样本加在指示线8上,在上样垫上加稀释液,然后观察免疫反应结果。具有简便、准确、快速、灵敏度和特异性高、经济实用、适合于现场检测等特点。附图说明图ι为本技术甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸结构示意图,1 上样垫 3 抗原垫 5 吸样垫 7:质控线 9 塑料支撑板2 胶体金垫 4 硝酸纤维素膜 6 检测线 8 指示线具体实施方式实施例制备甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸1主要材料HAV天然抗原、单克隆抗体、抗μ链单克隆抗体均为深圳市菲鹏生物股份有限公司提供,分别用于辅抗原垫、标记胶体金颗粒、包被硝酸纤维素(NC)膜;氯金酸和柠檬酸三钠为Sigma公司产品,用于空白金制备;硝酸纤维素膜为Millipore公司产品;酪蛋白钠、 聚乙二醇20000为Sigma公司产品,用于胶体金封闭;其它试剂均为分析纯试剂。2 方法2. IHAV单克隆抗体的标记用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液,制备完成后取三份胶体金,分别用0. 2MK2C03可将溶液pH调到pH7. 0、pH8. 2、pH9. 2、然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌,按每IOOml溶液0. 5mg、1. Omg, 1. 5mgHAV单克隆抗体缓慢滴加到胶体金溶液中,继续搅拌2小时,再加入终浓度为0. 酪蛋白钠,0. 聚乙二醇20000进行封闭20分钟,12000转离心30分钟,弃上清,用胶体金工作液复溶至66. 7ml,按Iml溶液铺16cm2的比例均勻地铺在玻璃纤维膜或无纺布上,再置干燥间温度20 25°C,,湿度小于30%干燥 2 4小时,制成胶体金垫,备用。2. 2HAV抗原垫制备方法将HAV抗原用胶体金工作液按1 1、1 2、1 4、1 8稀释,按Iml溶液铺 18. 5cm2的比例均勻地铺在玻璃纤维膜或无纺布上,再置干燥间温度20 25°C,湿度小于 30 %干燥2 4小时,制成抗原垫,备用。2. 3抗μ链单克隆抗体包被用0. OlM pH7. 2PBS抗μ链单克隆抗体包被分别稀释成1. Omg/mlU. 5mg/ml、 2.0mg/ml,然后用喷膜仪将抗μ链单克隆抗体在NC膜上按1. Ml/cm划线包被,同时包被羊抗鼠IgG抗体,包被完成后将NC膜置于干燥间干燥8-10小时,备用。2. 4试纸条的装配在干燥室内温度20 25°C,湿度小于30 %,取塑料支撑析,将已本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,其特征在于在塑料支撑板(9)上粘贴上样垫(1),上样垫(1)的一端紧密连接含有标记HAV抗体的胶体金垫(2),胶体金垫(2)的另一端紧密连接的含有HAV抗原的抗原垫(3),抗原垫(3)的另一端紧密连接硝酸纤维素膜(4),硝酸纤维素膜(4)包被有相互分离的检测线(6)和质控线(7),检测线(6)为包被在硝酸纤维素膜上的抗人IgM抗体,质控线(7)为包被在硝酸纤维素膜上的羊抗鼠IgG抗体,在检测线(6)和质控线(7)之间且距检测线(6)2.5~3mm处划有指示线(8)用于标识加样位置,硝酸纤维素膜(4)的另一端紧密连接吸样垫(5)形成试纸条,试纸条也可以装入塑料卡中形成卡式包装。

【技术特征摘要】
1.一种甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试纸,其特征在于在塑料支撑板(9)上粘贴上样垫(1),上样垫(1)的一端紧密连接含有标记HAV抗体的胶体金垫O),胶体金垫O)的另一端紧密连接的含有HAV抗原的抗原垫(3),抗原垫(3)的另一端紧密连接硝酸纤维素膜G),硝酸纤维素膜(4)包被有相互分离的检测线(6)和质控线(7),检测线(6)为包被在硝酸纤维素膜上的抗人IgM抗体,质控线(7)为包被在硝酸纤维素膜上的羊抗鼠IgG抗体,在...

【专利技术属性】
技术研发人员:李洲崔迎进
申请(专利权)人:天津中新科炬生物制药有限公司
类型:实用新型
国别省市:12

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