灭蚊制剂的制备方法及灭蚊制剂的应用技术

本发明专利技术公开了一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备摇蚊幼虫杀灭制剂的制备及应用方法，其制备方法包括如下步骤：将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养基上扩大培养，培养物用无菌水制成悬浮种子液，将种子液加入发酵缸培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体，对发酵液进行后处理得到液剂、粉剂或固定剂型的制剂；此种制剂对花翅摇蚊具有特殊毒效，使用浓度内２４小时对３龄幼虫的杀灭率达到９８％。采用此种微生物制剂对城市水源和供水设施中孳生的摇蚊污染进行治理，符合环保、低残留的要求，多种剂型适用于不同特征水域，具有高效、浓缩、缓释的优点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

Preparation method of mosquito killing preparation and application thereof

The invention discloses a method for using Bacillus thuringiensis subsp. Preparation and application method of chironomid larvae killing preparation, its preparation method includes the following steps: the sand tube spore inoculation to the eggplant bottle on the slant medium and expanded in culture, using sterile water to prepare suspension seed liquid culture, the seed liquid is added fermentation cylinder culture to sporangium rupture and release spore and parasporal crystal budding, the fermented liquid by postprocessing liquid, powder preparation or fixed dosage form; the preparation has special toxic effect on Chironomus, using concentration within 24 hours of the 3 instar larvae of the killing rate reached 98%. With the breeding of microorganisms on chironomid pollution of water sources and water supply facilities in the city governance, environmentally friendly, low residue, various dosage forms suitable for different characteristics of water, has the advantages of high efficiency, concentration and release.

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水污染防治技术，具体涉及采用微生物防治水体昆虫污染的技术，更具体地说，涉及一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备防治摇蚊幼虫的灭蚊制剂的方法及应用该灭蚊制剂消除水体中摇蚊幼虫污染的方法。
技术介绍
摇蚊科(Chironomidae)与大蚊科、蚊科、蠓科、蚋科等一起，同属于双翅目(Diptera)长角亚目(Nematocera)，属完全变态昆虫，整个生长发育过程包括卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。其幼虫又名红虫或血虫，活虫体呈圆筒形，分节，鲜红色。摇蚊没有叮咬人畜的行为，广泛分布于池塘、沟渠、湖泊、水库等水体的淤泥中。摇蚊科幼虫为一种十分重要的底栖动物，以水底与池壁的各种有机物和藻类等为食，摇蚊幼虫在水体沉积物中的活动影响沉积物的性质，对于水环境的生物学和物理性质产生不可忽视的影响。另外，摇蚊也是各种病原体的携带者，可携带伤寒杆菌和副伤寒多种病菌，少数种类可诱发人类哮喘等过敏变态反应疾病。目前，世界上已知摇蚊科种类已达3000余种，广泛分布于俄罗斯，朝鲜，日本，黎巴嫩，欧洲，北美洲和我国。在城市水库水源中常有大量摇蚊孳生，其虫卵和幼虫随原水进入城市的供水处理工艺设施，由于原水中丰富的藻类等有机营养物质和沉淀池的适宜生存环境而造成摇蚊及其幼虫在供水设施孳生繁殖。其幼虫(俗称红虫)经常穿透砂滤层进入管网，不仅影响水质感官指标，并有传播疾病的潜在危险。对城市水源和供水系统的红虫防治一直是国内外供水界的一大技术难题，主要原因是红虫繁殖迅速，对环境的耐受力较强，很难与氯接触而被灭活，一般的物理防治方法和化学药剂也无法在水源和供水系统中使用，因而长期以来缺乏行之有效的治理手段。在对城市水源的昆虫防治中，选择并合理使用无公害药剂十分重要。相比于化学杀虫剂，微生物防治可以高效、低毒、安全地防治水源及水处理过程中的摇蚊幼虫污染，具有特殊优点和广泛的应用前景。用于蚊虫防治的微生物菌株苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.Iaraelensis，简称Bti)，其伴孢晶体对双翅目昆虫具有专一毒杀作用，在昆虫特有的强碱性中肠环境下溶解并释放出毒性片段，作用于昆虫中肠上皮细胞组织，引起微绒毛区域肿胀、内质网膜空泡形成，伴随核糖体丧失和对线粒体的各种损伤，引发蚊虫的迅速死亡。晶体蛋白对双翅目蚊虫具有特异毒效，对其他包括鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物无毒无害，Bti的灭蚊实践在美国、法国、前苏联、我国、印尼、埃及和西非进行多年，大量的毒理学试验和在世界各国的应用证实它们对环境和其他生物的良好安全性。Bti一直运用于噬血蚊虫的杀灭，虽然对摇蚊幼虫具有一定毒效(国外已有研究证实)，但从未应用于摇蚊科昆虫防治。经过对国内外相关专利的检索，也未发现有将其应用于水环境尤其是供水系统中摇蚊幼虫的内容。
技术实现思路
本专利技术要解决的一个技术问题在于，提供一种摇蚊幼虫杀灭制剂的制备方法，所制备的灭蚊制剂能有效杀灭红虫，并且安全无毒，不产生水体化学污染。用本方法制备的制剂能适用于不同的水体进行灭蚊防治；本专利技术要解决的另一个技术问题在于，提供一种将上述灭蚊制剂在不同水体杀灭摇蚊幼虫的应用方法。提供一种摇蚊幼虫杀灭制剂的制备方法，所述制剂是一种液体剂型，所述液体制剂每毫升中苏云金芽孢杆菌以色列亚种的芽孢和伴孢晶体的含量不低于109个，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养(第一种培养基)，在30℃下扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30毫升，制成悬浮液，75℃下处理15分钟；3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体(第二种培养基)，发酵时间40小时左右；发酵时，缸温保持在30±1℃；缸压保持在0.3-0.5kg/cm2；通气量每分钟1∶1，搅拌转速220-240rpm；4)将发酵液酸化处理(即用H2SO4调PH至4.3)，并采用板框压滤得到液体剂型的灭蚊制剂。提供另一种针对摇蚊科幼虫的灭蚊制剂的制备方法，所述制剂是一种粉体剂型，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养(第一种培养基)，在30℃下扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30毫升，制成悬浮液，75℃下处理15分钟 3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体(第二种培养基)，发酵时间40小时左右；发酵时，缸温保持在30±1℃；缸压保持在0.3-0.5kg/cm2；通气量每分钟1∶1，搅拌转速220--240rpm；4)将发酵液用填充剂进行吸附，采用板框压滤形成滤饼，将滤饼打浆，再加入助剂，喷雾干燥得到粉剂型灭蚊制剂。提供另一种针对摇蚊科幼虫的灭蚊制剂的制备方法，所述制剂是一种将发酵菌液喷涂在载体上的固定化剂型，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养(第一种培养基)，在30℃下扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30毫升，制成悬浮液，75℃下处理15分钟；3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体(第二种培养基)，发酵时间40小时左右；发酵时，缸温保持在30±1℃；缸压保持在0.3-0.5kg/cm2；通气量每分钟1∶1，搅拌转速220-240rpm；4)将发酵后的菌液均匀喷涂在无纺布载体上，每克无纺布喷涂浓度为10％的发酵菌液约0.5毫升；5)喷涂辅助固定化材料海藻酸钠溶液，每克无纺布的喷涂重量约为0.15克；6)在辅助固定化材料上再一次均匀喷涂浓度为10％的发酵菌液约0.5毫升；7)喷涂主固定化材料聚乙烯醇溶液；每克无纺布的喷涂重量为0.34克 8)自然干燥后封卷，形成固定化灭蚊制剂。上述制备方法中的第一种培养基由下列重量比的材料构成牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，琼脂1.5-2.0％，PH值为7.0-7.2，在1.05Kg/cm2的压力和121.3℃的条件下灭菌20分钟制得。上述制备方法中的第二种培养基由下列重量比的材料构成玉米浆2％，大豆粉2.5％，玉米淀粉2％，其他无机盐，PH值为7.2，在1.05Kg/cm2的压力和121.3℃的条件下灭菌20分钟制得。在上述制备方法中，每克无纺布中含有海藻酸钠0.15g，聚乙烯醇0.34g，液剂产品1.2克，水5毫升。以上三种产品中包含的苏云金芽孢杆菌以色列亚种芽孢和伴孢晶体具有如下特征芽孢呈卵圆形，直径1.0×1.5μm，对不良环境具有较强的抗性，在适宜环境下可萌发为苏云金杆菌营养体。具耐热性(可在75℃处理20分钟后存活)。伴孢晶体是近似球形的复合蛋白质聚合物，大小不等，直径范围0.5～1.2μm，并含有葡萄糖和甘露糖等糖类成分。伴孢晶体蛋白在昆虫中肠强碱性环境下被蛋白酶水解，成为24～25kDa的毒性多肽，产生对作用昆虫的强烈毒性。芽孢增强伴孢晶体对昆虫的毒力。以上所述的砂土管孢子指一种菌种保藏方式，即将上述菌种放置在抽真空的灭菌沙土管中进行保存。将制得的液体剂型或粉体剂型灭蚊制剂应用在池塘等静水水域杀灭摇蚊幼虫，液体灭蚊剂的使用浓度为100ppm，粉剂的使用浓度为20ppm，按估计水量每天喷洒，持续15天，使用周期为30天。将制得的固定化剂型灭蚊制剂应用在流动水域中进行水处理，沿池壁一米以上布设固定化剂型灭蚊制剂，每10天本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备摇蚊幼虫杀灭制剂的方法，所述制剂为液体剂型，所述液体制剂每毫升中苏云金芽孢杆菌以色列亚种的芽孢和伴孢晶体的含量不低于１０↑［９］个，其制备方法包括如下步骤：１）将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养，在 瓶中放入第一种培养基，在３０℃下扩大培养７２小时；２）将培养菌苔加入无菌水３０ｍＬ，制成悬浮液，在７５℃下处理１５分钟；３）发酵：将悬浮液直接加入发酵缸，培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体，在缸中放入第二种培养基，发酵时间 ４０小时左右；发酵时，缸温保持在３０±１℃；缸压保持在０．３－０．５ｋｇ／ｃｍ２；通气量每分钟１∶１，搅拌转速２２０－２４０ｒｐｍ；４）将发酵液酸化处理，用Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］调ＰＨ至４．３，并采用板框压滤得到液体剂型的灭蚊制剂。

【技术特征摘要】
1.一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备摇蚊幼虫杀灭制剂的方法，所述制剂为液体剂型，所述液体制剂每毫升中苏云金芽孢杆菌以色列亚种的芽孢和伴孢晶体的含量不低于109个，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到茄子瓶斜面培养，在瓶中放入第一种培养基，在30℃下扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30mL，制成悬浮液，在75℃下处理15分钟；3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体，在缸中放入第二种培养基，发酵时间40小时左右；发酵时，缸温保持在30±1℃；缸压保持在0.3-0.5kg/cm2；通气量每分钟1∶1，搅拌转速220-240rpm；4)将发酵液酸化处理，用H2SO4调PH至4.3，并采用板框压滤得到液体剂型的灭蚊制剂。2.一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备摇蚊幼虫杀灭制剂的制备方法，所述剂型为粉体剂型，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到第一种培养基，30℃下在茄子瓶斜面扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30mL，制成悬浮液，75℃下处理15分钟；3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，在第二种培养基中培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体，发酵时间40小时左右；发酵时，缸温保持在30±1℃；缸压保持在0.3-0.5kg/cm2；通气量每分钟1∶1，搅拌转速220-240rpm；4)将发酵液用填充剂进行吸附，采用板框压滤形成滤饼，将滤饼打浆，再加入助剂，喷雾干燥得到粉剂型灭蚊制剂。3.一种采用苏云金芽孢杆菌以色列亚种制备摇蚊科幼虫杀灭制剂的制备方法，所述制剂是一种发酵菌液经载体固定的固定化剂型，其制备方法包括如下步骤1)将砂土管孢子接种到第一种培养基，30℃下在茄子瓶斜面扩大培养72小时；2)将培养菌苔加入无菌水30mL，制成悬浮液，75℃下处理15分钟；3)发酵将悬浮液直接加入发酵缸，在第二种培养基中培养至芽孢囊破裂释放出芽孢和伴孢晶体，发酵时间4...

【专利技术属性】
技术研发人员：张金松，周令，雷萍，梁明，
申请(专利权)人：深圳市水务集团有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]