竹叶提取物及其制品中黄酮含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及竹叶提取物及其制品中黄酮含量的测定方法，具体地说，其包括以下步骤：(a)使竹叶提取物或其制品进行酸解处理；(b)提供用于HPLC分析用的反相高效液相色谱系统；(c)分别将不同的标准品溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离；(d)将步骤(a)酸解溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离；(e)对竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定性表征；和任选地，(f)对竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定量表征。本发明专利技术的方法可以准确地测定竹叶提取物或其制品中的黄酮化合物的组成分布及其含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及天然产物的测定方法，具体涉及天然产物中黄酮类物质的测定方法， 更特别地涉及。
技术介绍
竹叶作为一种“药食两用的天然植物”已被广大消费者所接受，竹叶提取物主要功 能性成分为黄酮糖苷，具有抗氧化和抑菌活性，可以作为一种生物黄酮类保健营养素进行 开发。以竹叶为原料，利用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析、有机溶剂液液萃取等方法制备的 竹叶黄酮粉产品已经上市，因此，竹叶提取物在食品、化工、医药、农业等领域具有广阔的市 场前景。目前，用于测定竹叶提取物及其制品中黄酮含量的方法是分光光度法，分光光度 法是利用黄酮类化合物结构上的酚羟基及其还原性羰基能够与金属盐试剂形成有色络合 物原理进行测定。此法设备价廉，操作简便，但样品未经分离纯化，受花色素、酚酸及其它酚 性成分的干扰，误差较大，结果高于实际含量。此外，由于竹叶提取物及其制品中的黄酮类 成分比较复杂，不同种类的黄酮化合物相互之间的的含量亦相差非常大，分光光度法的另 一项重要缺点是难以了解竹叶提取物及其制品中各种黄酮化合物的分布及其具体含量、比 例等，而对这些参数的了解对于产品的深入开发和评价具有重要意义。尽管我国林业科研人员对竹叶提取物的开发利用已进行了一定的研究，由于行业 中仍缺乏测定竹叶提取物及其制品中黄酮含量的明确而有效的方法，这在一定程度上制约 了竹叶提取物的开发利用。因此，建立一个更精准的测定竹叶提取物及其制品中黄酮含量 的方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术人令人惊奇地发现，通过将竹叶提取物或其制品进行酸水解处理，然后采 用特定的色谱条件进行高效液相色谱分析，可以准确地测定竹叶提取物或其制品中的黄酮 化合物的组成分布及其含量。本专利技术基于上述发现而得以完成。专利技术概述因此，本专利技术第一方面涉及测定竹叶提取物或其制品中黄酮化合物种类和/或含 量的方法，其包括以下步骤(a)使竹叶提取物或其制品进行酸解处理；(b)提供用于HPLC 分析用的反相高效液相色谱系统；(c)分别将不同的标准品溶液注入液相色谱系统，进行 色谱分离；(d)将步骤(a)酸解溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离；(e)对竹叶提取物 或其制品中的黄酮类化合物进行定性表征；和任选地，(f)对竹叶提取物或其制品中的黄 酮类化合物进行定量表征。本专利技术第二方面提供了一种信息说明资料，其中记载了本专利技术第一方面任一项所 述的方法。专利技术详述本专利技术第一方面涉及测定竹叶提取物或其制品中黄酮化合物种类和/或含量的 方法，其包括以下步骤(a)使竹叶提取物或其制品在盐酸甲醇溶液中加热，进行酸解处理，过滤，得酸解 溶液；(b)提供反相高效液相色谱系统，其包括色谱柱、流动相、包括等度和/或梯度的 洗脱程序、以及装配有二极管阵列检测器或紫外检测器的色谱仪；(c)分别将不同的标准品溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离，所述各标准品溶 液独立地包含一种或多种选自下列7个的标准品异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、木 犀草素-6-C-阿拉伯糖苷、木犀草素、苜蓿素；(d)将步骤(a)所得酸解溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离；(e)根据步骤(C)所得各标准品的色谱响应值以及步骤(d)所得酸水解溶液的色 谱响应值，对所述竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定性表征；和任选地，(f)根据步骤(C)所得各标准品的色谱响应值以及步骤(d)所得酸水解溶液的色 谱响应值，对所述竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定量表征。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(a)中，所述盐酸甲 醇溶液是甲醇与25%盐酸的混合物。在一个实施方案中，所述甲醇与25%盐酸的混合物是 二者以体积比O 6) 1“2 5) 1、或约4 1的混合物，优选是约4 1的混合物。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(a)中，所述加热是 在沸水浴中加热。在一个实施方案中，所述加热是在沸水浴中回流。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(a)中，所述酸解处 理的时间为1 3小时。在一个实施方案中，所述酸解处理的时间为1. 5 2. 5小时。在 一个实施方案中，所述酸解处理的时间为约2小时。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(a)中，所述竹叶提 取物或其制品与盐酸甲醇溶液的比为50mg (IOml 50ml)。在一个实施方案中，所述竹 叶提取物或其制品与盐酸甲醇溶液的比为50mg (15ml 40ml)、50mg (20ml 30ml)、 或约50mg 25ml，优选的比为约50mg 25ml。本领域技术人员理解，根据所述竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物的含量 不同，所述竹叶提取物或其制品与盐酸甲醇溶液的比可以作适当的改变，以获得较佳的酸 解效果；类似地，其它因素亦可作适当改变。在一个实施方案中，在步骤(a)中，所述盐酸 甲醇溶液是甲醇与25%盐酸二者以体积比约4 1的混合物，所述加热是在沸水浴中回 流，所述酸解处理的时间为约2小时，所述竹叶提取物或其制品与盐酸甲醇溶液的比为约 50mg 25ml。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(b)中，所述色谱柱 是ODS柱。在一个实施方案中，所述色谱柱是5 μ m粒度填料的ODS柱。在一个实施方案中， 所述色谱柱是5 μ m粒度填料的ODS柱。在一个实施方案中，所述色谱柱是5 μ m粒度填料的 YMC-Pack ODS AQ型色谱柱。在一个实施方案中，所述色谱柱是5 μ m粒度填料的YMC-Pack ODS AQSG. 6mm x 250mm)色谱柱，或者是具有在本专利技术所述色谱条件下与该5 μ m粒度填 料的YMC-Pack ODS AQ型6mm χ 250mm)色谱柱分离效果相当的色谱柱。在一个实施方 案中，所述色谱柱是ODS柱，并且其在在本专利技术所述色谱条件下可以使下列标准品相互之间的分离度达到1. 0以上异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素-6-C-阿拉伯糖 苷、木犀草素、苜蓿素。优选地，该色谱柱可使上述7个标准品相互之间的分离度达到1. 1 以上、1.2以上、1.3以上、1.5以上、或2.0以上。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(b)中，所述流动相 包括流动相A和流动相B，所述流动相A是乙腈，所述流动相B是0.5% (V/V)磷酸水溶液。在本专利技术第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(b)中，所述洗脱程 序是以0. 5 2ml/min(优选约lml/min)的流速，在第一洗脱时间段内以包含10 15% 流动相A和加至100%流动相B的混合液中进行等度洗脱，然后在第一洗脱时间段内从上 述混合液经线性梯度变化到包含40 50%流动相A和加至100%流动相B的混合液中进 行梯度洗脱。在一个实施方案中，所述第一洗脱时间段使用的洗脱液是包含约12%流动相 A和约88%流动相B (本领域技术人员理解，(1) 二者之和为100%，和/或⑵两种流动相 的比例可作适当调整以获得更佳的分离效果；此(1)和(2)在其它情况下亦是适用的)的 混合液。在一个实施方案中，所述第二洗脱时间段使用的梯度洗脱液是包含约12%流动相 A和约88%流动相B的混合液经线性梯度变化到包含约45%流动相A和约55%流动相B本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．测定竹叶提取物或其制品中黄酮化合物种类和／或含量的方法，其包括以下步骤：（ａ）使竹叶提取物或其制品在盐酸甲醇溶液中加热，进行酸解处理，过滤，得酸解溶液；（ｂ）提供反相高效液相色谱系统，其包括色谱柱、流动相、包括等度和／或梯度的洗脱程序、以及装配有二极管阵列检测器或紫外检测器的色谱仪；（ｃ）分别将不同的标准品溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离，所述各标准品溶液独立地包含一种或多种选自下列７个的标准品：异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素－６－Ｃ－阿拉伯糖苷、木犀草素、苜蓿素；（ｄ）将步骤（ａ）所得酸解溶液注入液相色谱系统，进行色谱分离；（ｅ）根据步骤（ｃ）所得各标准品的色谱响应值以及步骤（ｄ）所得酸水解溶液的色谱响应值，对所述竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定性表征；和任选地，（ｆ）根据步骤（ｃ）所得各标准品的色谱响应值以及步骤（ｄ）所得酸水解溶液的色谱响应值，对所述竹叶提取物或其制品中的黄酮类化合物进行定量表征。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭雪峰，岳永德，汤锋，王进，姚曦，
申请(专利权)人：国际竹藤网络中心，
类型：发明
国别省市：11