一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法，该枯草芽孢杆菌制剂由包括以下步骤的制备方法制备的枯草芽孢杆菌发酵液制成，其中以0.5％～5％(重量比)的接种量将枯草芽孢杆菌种子液接入发酵培养基，在压力为0.02～0.15MPa、搅拌转速为100～300转/分、通风比为1∶0.3～1.5(体积比)的条件下发酵20～40小时。本发明专利技术采用液体深层发酵法代替固体发酵法使得制备工艺的效率提高，通过进一步优化各步骤采用的培养基的组成以及发酵工艺条件，使得最终产品中的枯草芽孢杆菌活菌含量得到大幅度提高；该枯草芽孢杆菌制剂耐酸、耐胆盐，在肠道环境中保持高效稳定；芽孢形成率高，更耐高温，便于加工和保存。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业生物
，具体涉及。
技术介绍
畜禽肠道内的微生物与饲料在体内的消化吸收有着密切关系，其直接影响到体内的合成代谢。保持肠道内有益菌群保持正常可以预防畜禽感染疾病，对抗有害菌，同时产生乳酸、过氧化氢以及抗菌物质，促进营养物质的消化吸收。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)呈杆状，直径为0. 6 1. 0 μ m，长1. 5 2.0μπι。芽孢中生，椭圆，孢囊不膨大，革兰氏反应阳性。菌落粗糙，不透明，不闪光，扩张， 呈污白色或微带黄色。在畜牧和养殖业中，枯草芽孢杆菌相比其他有益细菌具有其独特的优势它的肠道内定殖力强，繁殖速度快；能够产生大量的内生消化酶，可提高日增重和饲料转化率，可抗拉稀、抗应激、优化环境；抗逆性强、耐酸碱和高温高压，在饲料加工和储存过程中不易失活。将其应用于饲料工业中，可以有效调节畜禽肠道中的菌群平衡，明显改善肠道微生态环境，抑制有害菌生长，提高免疫力，降低发病率，增加成活率；促进生长，提高日增重，提高饲料消化吸收率，降低饲养成本，改善肉质；使畜禽对冷热应激、断奶应激、食物应激、环境变化等有很好的抵抗作用；优化生态环境，降低动物舍内氨气、硫化氢等有害气体的浓度，减少粪便中有机物的排泄。因此，枯草芽孢杆菌被广泛应用于饲料添加剂的生产中。但是，现有的枯草芽孢杆菌制剂普遍存在所含活菌数量不够高的缺陷，另外其在运输、保存和使用过程中的稳定性较差，不能完全有效地适应外界环境以及畜禽体内环境，这些都导致现有枯草芽孢杆菌制剂的效力降低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于饲料添加剂的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法， 该枯草芽孢杆制剂的活菌含量更高，并且在畜禽肠道环境和外部环境中更加高效稳定。用于实现上述目的的技术方案如下一方面，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，该制备方法包括以下步骤以0. 5% 5% (重量/重量)的接种量将枯草芽孢杆菌种子液接入发酵培养基， 在压力为0. 02 0. 15MPa、搅拌转速为100 300转/分、通风比为1 0.3 1.5(体积/体积)的条件下发酵20 40小时；其中，按重量百分比计算，所述发酵培养基包含一种或几种选自豆饼粉0. 3%、尿素0. 2%、硫酸铵0. 05% 0. 3%、磷酸氢二铵 0. 05% 0.3%、大豆蛋白胨0. 05% 0.3%、酵母膏 3%、鱼粉0. 1.2%、豆粕粉0. 1% 5%、棉粕0.01% 0. 和豆粕水解液0. 5%的氮源；一种或几种选自大米粉0. 05% 2. 1%、面粉0. 3. 5%、葡萄糖0. 05% 1.0%、乳糖0. 0.8%、淀粉0. 05% 0. 5%、蔗糖0. 05% 0. 5%、玉米粉0. 1. 5%、玉米淀粉0. 1. 5%和麸皮0. 05 % 0. 5 %的碳源；以及碳酸钙0. 05 % 0. 8 %，磷酸氢二钾0. 01 % 0. 06 %，硫酸镁0. 01% 0. 40%，硫酸锰0. 01% 0. 06%，氯化钠0. 05% 0. 5%，氯化钾0. 05% 0.3%，磷酸二氢钾0. 005% 0. 07%和碳酸氢钠0. 005% 0. 03%，pH为7. 0 7. 5。在上述制备方法中，优选地，豆粕水解液是由豆粕与水的混合物在pH为9 11、温度为80 90°C的条件下水解20 60分钟制得的，其中豆粕与水的质量比为1 5 100。在上述制备方法中，优选地，枯草芽孢杆菌种子液的制备方法包括以下步骤(1)将枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基，于观 45°C下培养15 36小时得到单菌落；所述斜面培养基包含牛肉浸膏5. 0 15. Og/mL,大豆蛋白胨5. O 15. Og/mL,酵母膏 5. O 15. Og/mL,氯化钠 5. O 15. Og/mL,葡萄糖 3. O 10. Og/mL 和琼脂 20 30g/mL，pH 为 7. O 7. 5 ；(2)将步骤(1)获得的单菌落接种于菌液培养基，在观 451、100 300转/分的条件下培养15 36小时得到枯草芽孢杆菌液；所述培养基包含蛋白胨5 15g/mL，牛肉膏2 8g/mL和氯化钠3 8g/mL, pH为7. 4 ；(3)将步骤⑵得到的枯草芽孢杆菌液以0.5% 5%接种量(重量/重量)接种于种子培养基，于观 45°C、100 300转/分的条件下培养15 36小时得到枯草芽孢杆菌种子液；按重量百分比计算，所述菌液培养基包含玉米粉0. 5 % 2. O %，葡萄糖0. 1 % 1.0%，豆饼粉0. 5% 3%，鱼粉0. 1. 5%，碳酸钙0. 31% 1. 69%，硫酸铵0. 05% 0. 15%，磷酸氢二钾0. 01% 0. 06%，硫酸镁0. 01% 0. 06%和硫酸锰0. 01% 0. 06%。在上述制备方法中，优选地，发酵培养基在发酵前先在105 130°C下灭菌20 40分钟。另一方面，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌液体制剂，该液体制剂包含根据上述制备方法制备的枯草芽孢杆菌发酵液；优选地，该液体制剂包含的枯草芽孢杆菌活菌数彡 lX1010CFU/mL。又一方面，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌粉体制剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤(1)向上述制备方法制备的枯草芽孢杆菌发酵液中加入10% 70% (g/mL)的硫酸铵水溶液和助滤剂，进行过滤；(2)将滤饼在进风温度为120 180°C、进料速度为50 200转/分、出口温度为 70 90°C的闪蒸干燥机中进行闪蒸。在上述粉体制剂的制备方法中，优选地，过滤为向上述制备方法制备的枯草芽孢杆菌发酵液中加入10% 70% (g/mL)的硫酸铵水溶液和助滤剂，搅拌10 60分钟后静置10 120分钟，然后进入板框过滤机进行过滤，过滤温度为30 60°C，过滤压力为2 5kg/cm2。在上述粉体制剂的制备方法中，优选地，助滤剂选自碳酸钙、珍珠岩和硅藻土中的一种或几种；优选地，按照重量百分比计算，所述枯草芽孢杆菌发酵液包含助滤剂 6%。本专利技术还提供了上述粉体制剂的制备方法制备的枯草芽孢杆菌粉体制剂；优选地，该粉体制剂包含的枯草芽孢杆菌活菌数> ι χ 10"CFU/g。在一方面，本专利技术提供了一种饲料添加剂，该饲料添加剂包含上述枯草芽孢杆菌液体制剂或枯草芽孢杆菌粉体制剂。在本专利技术的一个具体实施方案中，枯草芽孢杆菌液体制剂以及粉体制剂的制备方法包括如下步骤(1)枯草芽孢杆菌一级斜面培养采用常规方法将枯草芽孢杆菌接种于一级斜面培养基上，于观 45°C下培养15 36小时，得到一级枯草芽孢杆菌单菌落；所述一级斜面培养基为按下述比例和成分配制的混合物牛肉浸膏5. 0 15. Og,大豆蛋白胨5. 0 15. Og,酵母膏5. 0 15. Og,氯化钠5. 0 15. Og,葡萄糖3. 0 10. Og,琼脂20 30g,蒸馏水 IOOOmL, pH 为 7. 0 7. 5 ；(2)枯草芽孢杆菌二级液体培养采用常规方法将步骤(1)培养的一级枯草芽孢杆菌单菌落接种于二级培养液中，装液量为20 200mL/500mL，在观 45°C、100 300转 /分的条件下培养15 36小时，得到二级枯草芽孢杆菌种子液；所述二本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，该制备方法包括以下步骤：以０．５％～５％（重量比）的接种量将枯草芽孢杆菌种子液接入发酵培养基，在压力为０．０２～０．１５ＭＰａ、搅拌转速为１００～３００转／分、通风比为１∶０．３～１．５（体积比）的条件下发酵２０～４０小时；其中，按重量百分比计算，所述发酵培养基包含一种或几种选自豆饼粉０．１％～３％、尿素０．１％～２％、硫酸铵０．０５％～０．３％、磷酸氢二铵０．０５％～０．３％、大豆蛋白胨０．０５％～０．３％、酵母膏１％～３％、鱼粉０．１％～１．２％、豆粕粉０．１％～５％、棉粕０．０１％～０．１％和豆粕水解液０．１％～５％的氮源；一种或几种选自大米粉０．０５％～２．１％、面粉０．１％～３．５％、葡萄糖０．０５％～１．０％、乳糖０．１％～０．８％、淀粉０．０５％～０．５％、蔗糖０．０５％～０．５％、玉米粉０．１％～１．５％、玉米淀粉０．１％～１．５％和麸皮０．０５％～０．５％的碳源；以及碳酸钙０．０５％～０．８％，磷酸氢二钾０．０１％～０．０６％，硫酸镁０．０１％～０．４０％，硫酸锰０．０１％～０．０６％，氯化钠０．０５％～０．５％，氯化钾０．０５％～０．３％，磷酸二氢钾０．００５％～０．０７％和碳酸氢钠０．００５％～０．０３％，ｐＨ为７．０～７．５。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴培均，姚琨，杨忠广，李富伟，李兆勇，
申请(专利权)人：北京科为博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11