一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片，属于生物工程领域，本发明专利技术一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片，由一个固相载体构成，所述的固相载体上固定有华支睾吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原。本发明专利技术还提供了一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片的制备方法。本发明专利技术的芯片灵敏度高、特异性强，操作简便，一次反应可以同时诊断3种人体吸虫病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，尤其涉及一种蛋白质芯片，具体来说是一种用于联合 诊断三种吸虫病的蛋白芯片。
技术介绍
生物芯片技术是九十年代中期兴起的一种新型生物学技术，它基于生物大分子 (核酸、蛋白质等)间相互作用的大规模并行分析方法，并结合微电子、微机械、化学、物理、 计算机等多领域的技术，将生命科学研究中所涉及的样品反应、检测、分析等过程连续化、 集成化、微型化，已成为当今生命科学研究领域发展最快的技术之一。生物芯片可以广泛应 用于农业、环境、食品、法庭、军事、科研等领域。不仅如此，由于生物芯片可同时检测多种疾 病相关基因或蛋白，从而对遗传病、肿瘤、传染性疾病进行辅助诊断，所以它还具有重要的 临床应用价值。生物芯片主要分为三大类核酸芯片、蛋白芯片和芯片实验室。蛋白芯片是检测蛋 白质之间相互作用的生物芯片。蛋白芯片可通过发现体内特定蛋白质的含量变化，准确地 对生理/病理变化作出判断。在临床诊断领域，蛋白芯片具有广泛的应用前景。随着人们生活水平的不断提高，对生鲜食品的不断追求，我国食源性寄生虫病例， 特别是华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病等，也在不断攀升。另，局部疫区的血吸虫病仍然很 严重，随着经济的发展，人口的流动也越来越大，血吸虫病人也渐渐分布在全国各地。因此， 对此这些吸虫病的诊断显得尤为重要。常规的对这几种吸虫的的诊断主要依靠临床症状、 流行病史、实验室检查等进行综合判断。但往往有时同一器官或同一症状，均可这3种吸虫 寄生引起，而在感染程度较轻时，不一定能从粪便中找到虫卵进行确诊鉴定。因此，研制一种可满足快速、高效及高通量检测要求的同时鉴别检测三种吸虫的 方法，对我们更好地控制此三种吸虫病具有巨大推动作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片，所述的这种用 于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片要解决现有技术中检测吸虫病只能耽搁检测，方法繁 琐、检测时间长的技术问题。本专利技术的这种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片，由一个固相载体构成，所述 的固相载体上固定有华支睾吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原，所述的华支睾吸 虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原呈矩阵式排列。具体的，所述的固相载体为硅片、载玻片或者尼龙膜。进一步的，所述的华支睾吸虫抗原为华支睾吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白 片段或重组表达抗原。进一步的，卫氏并殖吸虫抗原为卫氏并殖吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白片 段或重组表达抗原。进一步的，所述的血吸虫抗原为血吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白片段或重 组表达抗原。进一步的，所述的固相载体上还固定有阴性反应对照，所述的阴性反应对照物为 点样的缓冲液。进一步的，所述的点样的缓冲液为pH值在9. 0-10. 0之间的碳酸盐缓冲液，具体为 NaHCO3-Na2CO3 缓冲液。进一步的，所述的固相载体上还固定有阳性反应对照，所述的阳性反应对照物为 羊抗人IgG或者羊抗人IgM。进一步的，所述的固相载体上还固定有质量控制对照物，所述的质量控制对照物 荧光素标记的羊抗人IgG或者荧光素标记的羊抗人IgM。进一步的，所述的荧光素标记物为异硫氰酸荧光素或花青类。本专利技术还提供了上述蛋白芯片的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤1)将有华支睾吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原探针分别溶于pH值为 9. 0-10. 0的碳酸盐缓冲液中，然后用芯片自动点样系统将蛋白质点制在固相载体上，点样 密度为16-200点/cm2,点样量为0. I-IOng/点；2) 2-8 °C放置过夜固定；3)用封闭液将蛋白芯片的未点样部位封闭并冻干处理，2_8°C贮存备用。进一步的，所述的封闭液中含有TBS溶液和质量百分比为1-9%的蔗糖、质量百分 比为1-9%的牛血清白蛋白(BSA)、质量百分比为0.05-0. 2%的Tween 20、质量百分比为 0. 05-0. 3%的酪氨酸、质量百分比为0. 2-1% NaN3，其中TBS含有质量百分比为0. 8-0. 9% NaCl和质量百分比为1. 1-1. 5% Tris0本专利技术的原理是蛋白芯片是一种将大量的吸虫抗原蛋白分子有规律地固定在某 种固相介质上，利用蛋白质与蛋白质、酶和底物以及蛋白质与其他分子间的相互作用进行 检测分析的一项技术，是生物芯片的重要组成部分。该技术由芯片、样品处理系统和数据分析系统组成。首先将各种吸虫的蛋白质 (抗原)有序地固定于载玻片、尼龙膜等各种载体上成为检测用的芯片；待芯片固定好后， 用血清、抗体等待测样品在芯片上进行孵育，清洗掉未结合的样品；然后用标记了特定荧光 素的抗体或其他成分与芯片作用，经漂洗将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去， 再利用荧光扫描仪(芯片扫描仪)测定芯片上各点的荧光强度，从而达到检测的目的。本专利技术的有益效果是操作简便，每次反应约需1. 5_2h，仅需极少量抽一次血即 可准确地完成对华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和血吸虫病的检测，从而快速实现多指标 并行检测三种重要吸虫病，省去了传统ELISA需要多次检测才能获得多指标结果的麻烦。附图说明图1是本专利技术的一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白的芯片点阵结构示意图和 检测结果显示图像。其中，a表示芯片点阵，其中QC表示质量控制；NC表示阴性反应对照； PC表示阳性反应对照；1-3依次表示华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫和血吸虫抗原；b-d分别表 示检测的华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫和血吸虫病人阳性血清^表示检测的正常人血清；f 表示检测的蛔虫病人血清。具体实施例方式以下实施例结合附图对本专利技术作进一步的详细说明。对实施例所涉及仪器的说明芯片点样仪中国博奥生物有限公司，Personal Arrayer 16;芯片洗干仪中国博奥生物有限公司，Slider Washer 8 ；芯片扫描仪中国博奥生物有限公司，晶芯 LuxScan IOK ；实施例1以玻璃基片为固相载体经过氨基化处理和压穴处理后，利用Personal Arrayer 16芯片点样仪把20nL平均浓度为0. 5-1. Omg/mL的华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫和血吸虫 等纯化抗原点阵于该基片的同一反应腔室内，点样重复2次，点间的距离为0. 1-1. Omm,蛋 白质通过化学键连接于固相载体上；点样后，放置于湿盒中，以含BSA 5%的封闭液进行封 闭，晾干后放置于4°C冰箱保存即为蛋白芯片成品，点阵图如图Ia所示。进一步的，所述的华支睾吸虫抗原为华支睾吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白 片段或重组表达抗原。进一步的，卫氏并殖吸虫抗原为卫氏并殖吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白片 段或重组表达抗原。进一步的，所述的血吸虫抗原为血吸虫粗抗原、纯化后的天然抗原蛋白片段或重 组表达抗原。进一步的，所述的固相载体上还固定有阴性反应对照，所述的阴性反应对照物为 点样的缓冲液。进一步的，所述的点样的缓冲液为pH值在9. 0-10. 0之间的NaHCO3-Na2COdl冲液。进一步的，所述的固相载体上还固定有阳性反应对照，所述的阳性反应对照物为 羊抗人IgG或者羊抗人IgM。进一步的，所述的固相载体上还固定有质量控制对照物，所述的质量控制对照物 为荧光素标记的羊抗人IgG或者荧光素标记的羊抗人IgM。进一步的，所述的荧光素标记物为异本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于联合诊断三种吸虫病的蛋白芯片，由一个固相载体构成，其特征在于：所述的固相载体上固定有华支睾吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原，所述的华支睾吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原和血吸虫抗原呈矩阵式排列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈家旭，艾琳，陈木新，郭俭，陈韶红，蔡玉春，张永年，李浩，田利光，张玲玲，朱兴全，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：31