两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制制造技术

技术编号:6685318 阅读:394 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开的两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制,其中1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列;2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子,且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成;3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后,分别连接到pLL3.7慢病毒干扰载体上,构建了2个慢病毒RNA干扰质粒(MSTN-shRNA);4)通过荧光定量PCR及Western?b1ot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达,在mRNA水平上抑制效率可达58%以上,而对MSTN蛋白的抑制可达80%以上;5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
1.两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制,其特征在于:1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列;2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子,该分子是由核苷酸组成的特定序列,且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成,其中一的上游序列为5‘-ATCTCTTGAATGTCTTATAGCATCTTTGCA-3’;下游序列为5‘-TCGAGAAAAAAGCAAAGATGCTATAAGACATCTCTTGAATGTCTTATAGCATCTTTGC A-3‘,其中二的上游序列5’-TGTACAAGGTATACTGGAATTTCAAGAGAATTCCAGTATACCTTGTACTTTTTTC-3’;下游序列5’-AAAAAAGTACAAGGTATACTGGAATTCTCTTGAAATTCCAGTATACCTTGTAC A-3’;3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后,分别连接到pLL 3.7慢病毒干扰载体上,构建了2个慢病毒干扰RNA质粒(MSTN-shRNA);4)通过定量荧光PCR及Western blot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达,在mRNA水平上抑制效率可达58%以上,而对MSTN蛋白的抑制可达80%以上;5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:刘明军刘晨曦李文蓉张雪梅唐森
申请(专利权)人:新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心
类型:发明
国别省市:65

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