筛选潜在抗阿留申病水貂的方法技术

本发明专利技术涉及一种筛选潜在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于具体步骤如下：每年10-12月份，对后备育种群貂逐一编号，趾尖采取貂血样或取尿样；用改进的蛋白酶K-SDS酚法提取病毒核酸，用核酸助沉剂提高阿留申病毒DNA的得率；阿留申病毒与肠炎细小病毒联合PCR鉴别诊断阿留申病，同一貂血样进行阿留申病毒PCR与血清阿留申病毒抗体对流免疫电泳(CIEP)联合检测，每种方法重复检测两次，区分阿留申病毒及血清ADV抗体均为阴性的未感染貂，貂血清中阿留申病毒抗体阳性而阿留申病毒阴性的曾感染病毒的康复貂，阿留申病毒阳性的感染貂；或直接用PCR检测可区分阿留申病毒阳性貂、阿留申病毒阴性貂，可从貂群中淘汰阿留申病毒阳性的感染貂,保留阿留申病毒阴性的潜在抗阿留申病水貂—曾感染病毒的康复貂和未感染病毒貂，有效淘汰净化阿留申病貂，有利于增强貂群抗阿留申病，有效扩大育种群数量；为从抗病育种途径防制阿留申病打下基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．筛选潜在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于具体步骤如下：１．１每年１０－１２月份前后，对后备留种群的貂逐一编号，趾尖采貂血样或取貂尿样；１．２用改进的蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ酚法提取血样或尿样病毒核酸，用核酸助沉剂（Ａｃｒｙｌ　Ｃａｒｒｉｅｒ）提高阿留申病毒ｓｓＤＮＡ的得率；１．３阿留申病毒与肠炎细小病毒联合ＰＣＲ鉴别诊断所用引物：ｐａｒ４７０：ｐａｒＦ　５’ｔｇｃａｃａａａｔｔｇｔａａｃａｃｃｔｔｇｇｔｃ　３’，ｐａｒＲ　５’ｃａｃｃｔｇｔｔｃｔｔａｇｔａａｇｔｇｔａｃｔｇｇ　３’；ａｄｖ５３７：ａｄｖＦ　５’ｃａｔａｔａｃｔｃｃａｇｃｔｇｃｇｃｃｇｔｔｇ　３’，ａｄｖＲ　５’ｃｃｔｇｃｔｇｇｔａｔｔａｔｃｃａｔｔｃａｇｇａ　３’；ＰＣＲ试验条件：３０ｕｌ体系引物终浓度ｐａｒ４７０　０．１５ｕＭ，ａｄｖ５３７　０．２５ｕＭ，Ｍｇ２＋　２．０ｍＭ，　ｄＮＴＰ　　２００　ｕＭ，Ｔａｑ酶　１Ｕ；反应参数：９４℃　２ｍｉｎ３０ｓｅｃ；９４℃　３２ｓｅｃ，５３℃　３０ｓｅｃ，７２　℃　４０ｓｅｃ，３２ｃｙｃｌｅｓ；７０℃　４ｍｉｎ　１０℃　１ｍｉｎ；该ＰＣＲ方法可检出最低病毒量低于０．３ＴＣＩＤ５０；用于准确鉴别血液中是否存在阿留申病毒；１．４同一貂血样进行阿留申病毒ＰＣＲ检测与血清阿留申病毒抗体对流免疫电泳（ＣＩＥＰ）检测，每种方法重复检测两次，两种方法联合检测确定貂血液阿留申病毒及血清ＡＤＶ抗体情况；或直接用ＰＣＲ检测，区分貂血液是否携带阿留申病毒。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邵西群，杨福合，闫喜军，刑秀梅，章秀婷，柴秀丽，刘琳玲，鲁晓萍，荣敏，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：82