本发明专利技术提供一种评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法，其特征在于包括：获取粘膜分泌液，包括未用药物和外源物处理和用药物和外源物处理的组别；测定所获取的粘膜分泌液中的可溶选择素的含量；因此药物和外源物的安全性由所测定的可溶选择素的含量来判定。本发明专利技术还提供一种用于评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的试剂盒，其特征在于包括：多孔试剂板，其中每孔包被抗选择素的抗体；因此当粘膜分泌液与包被抗选择素的抗体作用时，粘膜分泌液中的可溶选择素的含量被测定；因此药物和外源物的安全性由所测定的可溶选择素的含量来判定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药理和毒理检测领域，具体涉及一种评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法及其应用。
技术介绍
体内粘膜在人和动物体内分布极广(如呼吸道，女性生殖道，直肠道)，是抵御病原体(如细菌和病毒)感染的天然屏障。但是很多外用药物在它们的应用中可作用于体内粘膜，引起粘膜炎症反应，从而破坏体内粘膜的完整性，引起严重后果。另外，在挥发性过多的环境(如工厂)或空气污染严重的地方，这些外源物同样会引起粘膜炎症反应，从而破坏体内粘膜的完整性，令体内粘膜丧失屏障功能。因此对这些可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的评价是非常重要的。有效地，适用于体内粘膜(如阴道)的杀微生物剂不仅可以治疗，也可以预防微生物(如细菌和病毒)的感染。在没有有效的疫苗的情况下，杀微生物剂的作用显得尤为重要。例如HIV，其流行形势仍然十分严峻，半数及以上感染者为女性，在艾滋疫苗的研制反复受挫的情况下，有效的杀微生物剂可以为女性自主预防HIV性传播提供有效的预防措施。另外，女性生殖道粘膜局部应用的药物越来越多，如用于预防包括艾滋病在内的各种性传播疾病的化合物、生物制剂及疫苗、用于治疗真菌性或细菌性阴道炎的栓剂或凝胶及用于避孕的避孕药、避孕帽等。然而，这些在应用中可作用于体内粘膜的药物的安全性是至关重要的。如一些具有杀HIV病毒的制剂可以诱导宫颈阴道粘膜炎症，破坏阴道粘膜的完整性，这样反而会促进HI V感染，成为杀微生物剂临床应用的难题。因此适用于体内粘膜的杀微生物剂的安全使用必须能够保障体内粘膜的完整性，不诱导粘膜的炎症反应，也不能影响粘膜的固有免疫反应；体内粘膜安全性评价是杀微生物剂的研发工作中不可或缺的一部分。当前安全性评价研究的关键就在于寻找生殖道粘膜炎症的生物标记物，该标记物应该具有灵敏、实用性强等科学特征。生物标记物(biomarker)是指正常生理过程、疾病进程、药物的治疗效果及毒副作用的生物学判定指标，该指标能够进行客观的测量或检测。良好的生物标记物可以为药物的开发节省大量研究经费，并缩短进入市场的周期。当前的研究方向主要集中在I L-l，TNF-a，IL-6，IL_8等炎性细胞因子及MIP-2， MCP-I等趋化因子方面，然而，这些炎性细胞因子/趋化因子具有多种功能，他们的促炎活性很可能被内源性的抗病毒物质所拮抗，还不能客观、准确的指示粘膜炎症的发生，而且这些促炎因子的灵敏度并不高。综上所述，目前可作用于体内粘膜的药物的动物安全评价模型缺乏科学、合理、灵敏的体内粘膜炎症的生物标记物，这已经成为了药物研发工作的一大阻碍，还需要研究者们进行更加努力的探索，以确定成熟的，能真正客观、全面评价药物致体内粘膜炎症的生物标记物。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法及其应用。本专利技术的专利技术人在研究中认识到炎症反应不仅分泌炎性细胞因子/趋化因子，同时白细胞穿越血管内皮细胞渗出到炎症部位。白细胞向血管外迁移是一个连续发生的多步骤事件，是白细胞表面的多种粘附分子与血管内皮细胞表面的相应配体协同作用的结果。 在众多的粘附分子中，选择素(selectin)介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附，在炎症及炎症性疾病中发挥重要作用。选择素家族包括E-选择素(⑶62E)、L-选择素(⑶62L)、 P-选择素(CD62P)3个成员，E、L、P分别代表最初发现此3种选择素的血管内皮细胞、白细胞和血小板，后来研究发现，P-选择素还表达在血管内皮细胞上。选择素的胞外区近膜端有一个构象依赖型的酶切位点，可被酶解为可溶性的选择素，释放到血液和组织液中。选择素分子的配体是某些寡糖基团，其中最重要的就是P-选择素糖蛋白配体l(P-kleCtin Glycoprotein Ligand-I, PSGL-1)，该分子以二聚体形势表达在白细胞上，可结合任一种选择素。选择素通过结合PSGL-1，介导白细胞直接、或借助活化的血小板及已粘附的白细胞作为桥梁，粘附到血管内皮细胞上(图1)。本专利技术的专利技术人在研究中发现在炎症反应过程中有大量可溶性选择素产生。经过大量和详细的研究发现可溶性选择素是一类全新的生物标记物，可以作为评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的生物标记物。本专利技术的目的是通过以下内容实现的。本专利技术提供一种评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法，其特征在于包括获取粘膜分泌液，包括未用药物和外源物处理和用药物和外源物处理的组别； 测定所获取的粘膜分泌液中的可溶选择素的含量；因此药物和外源物的安全性由所测定的可溶选择素的含量来判定。本专利技术还提供一种用于评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的试剂盒，其特征在于包括多孔试剂板，其中每孔包被抗选择素的抗体；因此当粘膜分泌液与包被抗选择素的抗体作用时，粘膜分泌液中的可溶选择素的含量被测定；因此可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性由所测定的可溶选择素的含量来判定。本专利技术提供的评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法和试剂盒和目前已知的同类方法相比有至少如下两个优点(1)具有更强的操作性。炎性细胞因子/趋化因子的表达是短暂的，这样对取样的时间点有非常严格的限制。而选择素的表达维持比较长的时间段，取样的时间段没有太大的限制，增强了操作性。(2)具有适用于不同药物和外源物的普遍性。不同的药物和外源物引起不同的炎性细胞因子/趋化因子的表达，因此不同的药物和外源物的安全性的评价需要找出合适的炎性细胞因子/趋化因子来作为生物标记物，这是费时和费力的。而不同的药物和外源物都能引起选择素的表达，让本方法和试剂盒具有普遍性。下面结合附图和具体实施方式进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不局限于这些实施方式，任何在本专利技术基本精神上的改进或替代，仍属于本专利技术权利要求书中所要求保护的范围。附图说明图1是选择素介导白细胞与血管内皮细胞粘附的3种机制的示意图。A，白细胞表面的PSGL-I结合内皮细胞上的E-选择素和/或P-选择素直接粘附在内皮细胞上；B，白细胞通过粘附在内皮细胞上的血小板作为桥梁粘附在内皮细胞上。C，已经粘附在内皮细胞上的白细胞介导其他白细胞的二次聚集。图2是单次给药的实验方案。图3是多次给药的实验方案。图4显示宫颈阴道粘膜分泌液中可溶性L-选择素和P-选择素的表达和分泌与杀微生物剂诱导的宫颈阴道粘膜炎症的反应进程呈高度一致性。经4% N9/PBS或PBS单次给药刺激后小鼠的宫颈阴道粘膜分泌液中促炎因子MCP-I和IL-6、可溶性选择素表达水平及巨噬细胞浸润的动态学变化，一个时间点代表一组小鼠，5只/组，显示的是平均值士标准差(*，与相应时间点对照组相比，P < 0.05)。巨噬细胞的浸润可以代表炎症的发生，其时间段为给药后4-Mh。图5显示宫颈阴道粘膜分泌液中可溶性L-选择素和P-选择素的表达和分泌在指示杀微生物剂诱导的宫颈阴道粘膜炎症上具有普遍性。经4% N9/PBS,4% SDS/PBS,4% BZK/PBS,4% CMC/PBS或PBS刺激后小鼠的宫颈阴道粘膜分泌液中促炎因子MCP-I和IL-6、 可溶性L-选择素及P-选择素的表达水平，显示的是平均值士标准差(*，与PBS组相比，ρ < 0. 05 ；**，与 PBS 组相比，ρ &l本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．评价可作用于体内粘膜的药物和外源物的安全性的方法，其特征在于包括：获取粘膜分泌液，包括未用药物和外源物处理和用药物和外源物处理的组别；测定所获取的粘膜分泌液中的可溶选择素的含量；因此药物和外源物的安全性由所测定的可溶选择素的含量来判定。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：鄢慧民，钟茂华，何本霞，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83
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