用于杀死孢子的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了包含漆酶或显示漆酶活性的化合物、氧源、碘离子源和增强剂的杀孢子组合物。也公开了杀死或灭活孢子的方法和净化已经暴露于孢子的区域的方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及用于杀死或灭活微生物孢子的酶方法。
技术介绍
已知孢子形成于好氧的芽孢杆菌、厌氧的梭状芽孢杆菌、经选择的八叠球菌和一些放线菌。孢子类似于某些植物种子，因为它们不进行任何代谢反应。在这点上，它们尤其适于抵抗严峻的环境胁迫，并且已知它们在长时间暴露于热、干燥、辐射和有毒化学物质后仍能存活。这些特性使得孢子在像活组织或接触活组织的物体的环境中尤其难杀死，而活组织会受到极端条件的不利影响。真菌、病毒和病原菌的营养细胞在70℃数分钟内被灭菌；许多孢子在100℃被灭菌。然而，一些腐生菌的孢子能在煮沸数小时后仍存活。目前加热是确保孢子灭菌的最常用方法。一个特别难的问题涉及对蜡状芽孢杆菌这样的细菌性产孢子微生物的杀微生物处理。蜡状芽孢杆菌种群的微生物包括蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。这些微生物共享许多表型特性，具有高度的染色体序列相似性，且是已知的肠毒素产生者。虽然对所有产孢子的微生物进行杀微生物处理存在困难，因为它们形成孢子，但是蜡状芽孢杆菌是最难处理的之一，因为蜡状芽孢杆菌已被确认为对用作净化环境表面的杀菌化学物质具有增强的抗性。蜡状芽孢杆菌是非常确实的肠毒素产生者和食物传染病原体。该生物体通常被诊断为引起胃肠紊乱的原因并已被提出为几种食物传染病发作的致因。该生物体在自然界中普遍存在，因而在动物饲料和草料中存在。由于该生物体具有快速形成孢子的能力，该生物体在环境中容易存活并能在母牛的肠道中存活。该生物体能通过粪便和土壤污染鲜奶，且蜡状芽孢杆菌易于在巴氏消毒处理后存活。本专利技术提供用于杀死或灭活孢子的改良酶方法。专利技术概述第一个方面，本专利技术提供杀孢子组合物，该组合物包含漆酶或显示漆酶活性的化合物、氧源、碘离子源和增强剂。第二个方面，提供用于杀死或灭活孢子的方法，该方法包含用本专利技术的杀孢子组合物与孢子接触。第三个方面，提供净化已暴露于孢子的区域的方法，该方法包含用本专利技术的组合物与孢子接触。第四个方面，提供包含本专利技术组合物的容器，其中组合物的组分被包装在一个或多个分隔室或分隔层中。第五个方面，提供包含本专利技术组合物的现成可用的杀孢子配方。在实施方案中，碘化物源可以是一种或多种碘化物的盐，比如碘化钠或碘化钾或它们的混合物。在其它实施方案中，本专利技术的杀孢子组合物还包含表面活性剂。专利技术详述漆酶和显示漆酶活性的化合物显示漆酶活性的化合物可以是包括于生物化学和分子生物学国际联合会命名委员会(the Nomenclature Committee of the International Union ofBiochemistry and Molecular Biology，IUBMB))提出的EC 1.10.3.2酶类的任一种漆酶，或者是显示漆酶活性的任何由漆酶衍生的片段，或表现相似活性的化合物，比如邻苯二酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。优选的漆酶和/或显示漆酶活性的化合物是微生物源的酶。酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。来源于真菌的合适的例子包括来自曲霉属(Aspergillus)，链孢霉属(Neurospora)如粗糙脉孢菌(N.crassa)，柄孢壳属(Podospora)，葡萄孢属(Botrytis)，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香茹属(Lentinus)，侧耳属(Pleurotus)，栓菌属(Trametes)如T.villosa和变色栓菌(T.versicolor)，丝核菌属(Rhizoctonia)如立枯丝核菌(R.solani)，鬼伞属(Coprins)如灰盖鬼伞(C.cinereu)、毛头鬼伞(C.comatus)、费赖斯鬼伞(C.friesii)和褶纹鬼伞(C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)如黄盖小脆柄菇(P.condelleana)，斑褶菇属(Panaeolus)如蝶形斑褶菇(P.papilionaceus)，毁丝霉属(Myceliophthora)如嗜热毁丝霉(M.thermophila)，柱顶孢属(Scytalidium)如嗜热柱顶孢(S.thermophilum)，多孔菌属(Polyporus)如筛孔多孔菌(P.pinsitus)，射脉菌属(Phlebia)如射脉菌(P.radita)(WO 92/01046)，或革盖菌属(Coriolus)如毛革盖菌(C.hirsutus)(JP 2-238885)菌株的漆酶。来源于细菌的合适的例子包括来自芽孢杆菌属菌株的漆酶。优选来自鬼伞属、毁丝霉属、多孔菌属、柱顶孢属或丝核菌属的漆酶；特别是来自灰盖鬼伞、嗜热毁丝霉、筛孔多孔菌、嗜热柱顶孢或立枯丝核菌的漆酶。漆酶或漆酶相关酶还可以是可通过下列方法产生的酶，该方法包括在允许漆酶表达的条件下于培养基中培养用重组DNA载体转化的宿主细胞，该重组DNA载体携带编码所述漆酶的DNA序列以及允许编码漆酶的DNA序列表达的DNA序列编码功能，以及从培养基中回收漆酶。漆酶活性(LACU)的测定漆酶活性(尤其适用于多孔菌属漆酶)可通过在有氧条件下通过氧化丁香醛连氮而测定。产生的紫色在530纳米比色测定。分析条件是19mM丁香醛连氮，23mM醋酸缓冲液，pH 5.5，30℃，反应时间1分钟。1个漆酶单位(LACU)是在这些条件下每分钟催化1.0毫摩尔丁香醛连氮转化所需的酶量。漆酶活性(LAMU)的测定漆酶活性可在有氧条件下通过氧化丁香醛连氮而测定。产生的紫色在530纳米测定。分析条件是19mM丁香醛连氮，23mMTris/马来酸缓冲液，pH 7.5，30℃，反应时间1分钟。1个漆酶单位(LAMU)是在这些条件下每分钟催化1.0毫摩尔丁香醛连氮转化所需的酶量。氧源漆酶或显示漆酶活性的化合物所需的氧源可以是来源于大气的氧气或来源于用作原位产生氧的前体。来源于大气的氧气通常以充足的量存在。如果需要更多的氧气，可加入额外的氧气，如作为压缩空气或作为纯的压缩氧气。碘离子源根据本专利技术，与漆酶反应所需的碘离子源可通过许多不同的途径获得，例如通过添加一种或多种碘化物的盐。在一种优选实施方案中，碘化物的盐是碘化钠或碘化钾或它们的混合物。碘离子源的浓度一般相当于0.01mM至1000mM，优选从0.05mM至500mM，和更优选从0.1mM至100mM的碘离子浓度。增强剂增强剂可选自包含＞N-OH组分的脂肪族的、脂环族的、杂环的或芳香族的化合物。在本专利技术的一个优选实施方案中，增强剂是通式I的化合物 其中R1、R2、R3、R4分别选自于氢、卤素、羟基、甲酰基、羧基以及它们的盐和酯、氨基、硝基、C1-12-烷基、C1-6-烷氧基、羰基(C1-12-烷基)、芳基特别是苯基、磺基、氨基磺酰基、氨基甲酰基、膦酰基、膦酰氧基以及它们的盐和酯，其中R1、R2、R3、R4可用R5取代，其中R5代表氢、卤素、羟基、甲酰基、羧基以及它们的盐和酯、氨基、硝基、C1-12-烷基、C1-6-烷氧基、羰基(C1-12-烷基)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
杀孢子组合物，其包含漆酶或显示漆酶活性的化合物、氧源、碘离子源和增强剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】DK 2002-4-25 PA200200625;DK 2002-8-30 PA2002012781.杀孢子组合物，其包含漆酶或显示漆酶活性的化合物、氧源、碘离子源和增强剂。2.权利要求1的组合物，其中碘离子源是一种或多种碘化物的盐。3.权利要求1的组合物，其还包含表面活性剂。4.用于杀死或灭活孢子的酶方法，其包括将孢子与漆酶或显示漆酶活性的化合物、氧源、碘离子源和增强剂接触。5.权利要求4的方法，其中碘离子源是一种或多种碘化物的盐。6.权利要求4的方法，其还包括将孢子与表面活性剂接触。7.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：S丹尼尔森，BE克里斯腾森，P施奈德，
申请(专利权)人：诺和酶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]