本发明专利技术公开了一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法，是通过自然筛选和富集微生物，利用微生物生长代谢产生的热量；在厌氧环境下发酵产生酒精，对酵母细胞进行有效剌激，在发酵基质温度为46-52℃、酒精浓度为2%~12%(v/v)时剌激酵母细胞产生具较强活性的LYCD。该LYCD，其具有医药、保健和美容价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体来就涉及一种产生活性酵母细胞衍生物的方法。
技术介绍
酵母细胞有很强的应激反应能力，当它受到物理、化学等应激时，很快就会合成许多具有自我保护和修复性的一类物质，这些物质具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质，称为活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD)，有重要的医用和美容价值。LYCD的主要活性成份包括大量的应激蛋白、多肽和氨基酸。LYCD是一种特别有效、安全的活性成分，具有减轻伤害的作用。国内外已有许多以酵母及其衍生物为原料的化妆品问世；LYCD具有刺激血管形成和加速伤口愈合的作用， 是一种治疗痔疮极为有效的药用成分；LYCD还是一种良好的治疗烫伤和机械损伤的药品添加剂，对牛皮癣等皮肤病也有良好的疗效。最近的研究发现，LYCD对由紫外线引起的DNA 损伤具有修复作用，对鼓膜具有再生功能。当前LYCD的应用范围正在不断扩大。如美国己从药用级的活性酵母细胞衍生物制得浓缩产品BiofactorsTM，用于去皱膏、疤痕净及婴儿护肤用品等产品的生产。自然固态堆积发酵是原料通过糊化、适当冷却，加入高温大曲、翻拌均勻，收堆，在自然开放的条件下堆积发酵。目前还未见到用自然固态堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物方面的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能产生具有较强活性的LYCD，其具有医药、保健和美容价值的自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法。本专利技术的，包括以下步骤(1)发酵基质糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵；用曲量大小、 原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节，可重复多次发酵；(2)在发酵基质温度为46-52°C、酒精浓度为21 12%(v/v)时终止发酵；(3)2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心， 液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物，IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。上述的，其中发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料。上述的，其中发酵时间为3 7天。本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知自然堆积发酵充分网罗、富集生产环境中的大量微生物。在自然气候条件下，在堆积发酵过程中，酵母数量不断增加，同时产生能量，使发酵基质温度逐渐增高；在厌氧发酵条件下发酵产生酒精，当发酵基质温度为46-52°C、酒精浓度为29Tl2%(v/v)时可剌激酵母细胞产生具有较强活性的LY⑶，具有医药、保健和美容价值。 附图说明图1为不同应激温度对产生LY⑶的影响； 图2不同酒精浓度刺激对产生LYCD的影响。具体实施例方式以下通过试验例和具体实施方式来进一步说明本专利技术的有益效果。试验例LYCD的制备发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料，固态发酵。糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵。用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行调节。可重复多次发酵。发酵时间3 7天。在发酵基质温度为46-52°C、酒精浓度为21 12%(ν/ν)时终止发酵，2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心，液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物， IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。LYCD的活性测定采用紫外分光光度法测定LYCD的活性，量取一定量的活性测定菌株的培养液，加入一定量的LYCD，30°C水浴振荡培养lh，测定反应前后菌体培养液 0D256nm值的变化，以此来反映LY⑶活性的大小。从图1中可以看出，当刺激温度为46、8°C时，OD值逐渐的增大，即LY⑶的活性逐渐增强，在47、8°C时出现最大值，当温度为48飞2°C时，OD值逐渐的减小，即LY⑶的活性逐渐的下降。作用温度为46 52°C时，可产生LY⑶。由图2可知，当酒精浓度在(Γ8%(ν/ν)时，随酒精浓度的增加，LY⑶的活性呈现逐渐增大的趋势，当酒精浓度为4%(ν/ν)时，OD值明显增大，到酒精浓度为8%(ν/ν)时，OD值最大，当酒精浓度为89^1 时，随着酒精浓度的增加，LYCD的活性呈现逐渐下降的趋势。可见菌体在不同的酒精浓度下，产生的应激能力也不同，在一定的酒精浓度范围内，菌体自身的应激能力不断的增大，当超过一定的界限，应激能力却逐渐下降。因此，确定酒精刺激浓度为2% 12%(v/v)时可产LYCD。自然堆积发酵是茅台酒重要的生产工艺之一，高温堆积发酵环境，使微生物在消长过程中相互作用，以达到富集微生物特别是酿酒酵母的目的。堆积酒醅中的酵母菌总数是不堆积酒醅中的14倍。酵母细胞在增殖和代谢过程中，产生大量的热量和酒精，使发酵基质温度和酒精含量逐渐增高。发酵糟醅经过46-52°C的高温堆积发酵，大量有益微生物得到了繁殖，促进微生物产生大量的香味成份或活性物质。实施例1 ，包括以下步骤 (1)发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料，固态发酵。糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵。用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节。可重复多次发酵；(2)发酵时间3 7天，在发酵基质温度为52°C、酒精浓度为12%(v/v)时终止发酵；(3)2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心， 液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物，IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。实施例2 ，包括以下步骤(1)发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料，固态发酵。糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵。用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节。可重复多次发酵；(2)发酵时间3 7天，在发酵基质温度为48°C、酒精浓度为m(ν/ν)时终止发酵；(3)2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心， 液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物，IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。 实施例3:，包括以下步骤(1)发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料，固态发酵。糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵。用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节。可重复多次发酵；(2)发酵时间3 7天，在发酵基质温度为46°C、酒精浓度为4%(ν/ν)时终止发酵；(3)2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心， 液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物，IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。权利要求1.，包括以下步骤(1)发酵基质糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均勻，收堆，堆积发酵；用曲量大小、 原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节，可重复多次发酵；(2)在发酵基质温度为46-52°C、酒精ν/ν浓度为21 1 时终止发酵；(3)2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养池后，离心， 液氮冷冻破壁，用4°C的无菌水转移破碎物，IOOOOg离心，上清液即为LY⑶。2.如权利要求1所述的，其中发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，或配用其他原料。3.如权利要求1或2所述的，其中 发本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法，包括以下步骤：（１）发酵基质糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均匀，收堆，堆积发酵；用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节，可重复多次发酵；（２）在发酵基质温度为４６－５２℃、酒精ｖ／ｖ浓度为２％～１２％时终止发酵；（３）２０００ｇ离心２０ｍｉｎ收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养２ｈ后，离心，液氮冷冻破壁，用４℃的无菌水转移破碎物，１００００ｇ离心，上清液即为ＬＹＣＤ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭坤亮，季克良，
申请(专利权)人：中国贵州茅台酒厂有限责任公司，
类型：发明
国别省市：52
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