本发明专利技术提供一种miRNA-155在制备抗动脉粥样硬化炎症药物中的应用。本发明专利技术通过实验证明，无论在体外细胞水平还是体内动脉粥样模型小鼠水平，都证实了miRNA-155对动脉粥样硬化炎症具有明显的抑制作用，由于miRNA-155是位于基因上游的调控分子，并且同时有多种生物学功能，因此miRNA-155很有可能成为动脉粥样硬化治疗的全新靶点。本发明专利技术的药物能有效的防治核酸在生物体内降解，并能高效的作用目的组织，所述药物还可以与目前已知的其他治疗动脉粥样硬化炎症的药物如他汀类调脂药等制成复方制剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及微小分子RNA-155在制备抗动脉粥样硬化药物中的用途。
技术介绍
目前一致公认动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是多基因，多因素的疾病，其发病机制与炎症反应，氧化应激，细胞凋亡以及血流动力学改变等有关，是一个极为复杂的病理过程。AS斑块的不稳定将导致严重心血管事件，免疫炎症反应在AS发生尤其是斑块的稳定性中起着关键作用。斑块不稳定也受多因素的影响，某一种蛋白或者分子异常往往无法反映整个病理过程，以往单纯针对某个靶基因/蛋白或者某个转导通路进行干预的传统方法存在很大局限性，因此了解AS免疫细胞生物学功能的多靶位基因表达机制，将是我们更深入认识AS形成的病理生理机制、寻找调控AS靶点的关键，microRNA的出现为这一目标的实现提供了极大的可能。MicroRNAs (miRNAs)是一组长约22个核苷酸、保守的非编码小RNA，通过转录后水平调控基因的表达从而在生物过程中发挥重要的作用。MiRNA表达水平的改变能够调节许多心血管疾病发生相关的重要生物学过程，如心脏发育，心肌肥厚，心律失常，血管发生等，系统评价某种确定表型AS相关miRNA表达谱的变化将有利于我们更深入的理解AS发生发展和转归的机制。miRNA-155是近几年来发现在免疫炎症中有重要调控作用的经典 microRNA，并有许多研究证实了其与免疫炎症相关的靶基因。现阶段，针对动脉粥样硬化、冠心病的预防和治疗主要集中在抑制动脉粥样硬化炎症反应、调整血脂、抑制血小板聚集、去除/减少致动脉粥样硬化进展的多种危险因素等措施，根据专利技术人对本领域的研究和检索，目前microRNA对动脉粥样硬化治疗方面的研究几乎近于空白。因而，根据microRNA的作用机制提示进行一系列研究来明确miRNA-155在改善动脉粥样硬化炎症反应，实现对冠心病的防治很有必要，并期待通过本专利技术人的一系列验证使miRNA-155有望成为一种改善动脉粥样硬化、治疗冠心病的新型核酸药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种微小分子RNA-155 (miRNA-155)在制备抗动脉粥样硬化炎症药物中的应用，所述miRNA-155的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示 UUAAUGCUAAUC⑶GAUAGGG⑶。本专利技术所述的miRNA-155作为原料药用于制备预防和治疗动脉粥样硬化炎症的核酸药物，该药物能有效的防治核酸在生物体内降解，并能高效的作用目的组织，本专利技术所述的miRNA-155还可以与目前已知的其他治疗动脉粥样硬化炎症的药物，如他汀类调脂药等制成复方制剂，用于治疗动脉粥样硬化炎症。本专利技术通过各种实验证明，无论在体外细胞水平还是体内动脉粥样模型小鼠水平，都证实了 miRNA-155对动脉粥样硬化炎症具有明显的抑制作用，由于miRNA-155是位3于基因上游的调控分子，并且同时有多种生物学功能，因此miRNA-155很有可能成为动脉粥样硬化治疗的全新靶点。本专利技术开辟了 miRNA-155作为一种核酸药物的新用途，也为动脉粥样硬化炎症的治疗提供了一种新的途径。附图说明图 1 miRNA-155 对 THP-I 细胞 MAI3K 信号通路(p38, JNK, ERK1/2)作用。图2 miRNA-155体内激动剂agomir-155对APOE动脉粥样硬化模型小鼠血清，血管以及外周血单个核细胞炎症因子TNF-a蛋白水平影响。图3是miRNA-155体内激动剂agomir-155对APOE动脉粥样硬化模型小鼠血清， 血管以及外周血单核细胞炎症因子IL-6蛋白水平影响。图4 miRNA-155体内激动剂agomir-155对APOE动脉粥样硬化模型小鼠血清，血管以及外周血单个核细胞炎症因子TNF-a分子水平影响。图5是miRNA-155体内激动剂agomir-155对APOE动脉粥样硬化模型小鼠血清， 血管以及外周血单核细胞炎症因子IL-6分子水平影响。具体实施例方式本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1 miR-155转染THP-I细胞后细胞生物学功能变化本申请用于体外细胞实验转染用的miRNA-155 (SEQ ID NO:2)模拟物/抑制剂均购买于美国ABI公司，用于体内动物实验的agomir-155 (SEQ ID NO:3)购买于广州锐博生物技术有限公司，均为商业化产品。1、miR-155模拟物/抑制剂转染后，用oxLDL刺激48小时，Real-time PCR及 Northern blot检测各组细胞相应miR-155表达改变的效果，分组如下空白对照组、单独oxLDL刺激组、转染模拟物阴性对照组，转染抑制剂阴性对照组，转染miR-155模拟物组，转染miR-155抑制剂组； 2、ELISA检测炎症因子变化TNF- α、11-6分泌(表1) 表1 miRNA-155对THP-I细胞炎症因子分泌影响IL-6(ng/ml)TNF-α (ng/L)空白对照1. 04±0. 0670. 6 ±5. 06模拟物对照0. 93±0. 5275. 3±4. 06miR-155模拟物0. 56±0. 04**34. 34 ±1. 32**抑制剂对照0. 96±0. 0574. 06 ±0. 88miR-155抑制剂1. 68±0. 12·110. 51±3. 58##3、检测MAI3K信号转导通路的改变实验分组(同上)。Westernblot检测炎症通路中信号分子P38，JNK，ERK蛋白水平(参见图1)。 实施例2 miR -155在动脉粥样硬化模型动物水平治疗潜力研究 1、实验动物(雄性ApoE-/-小鼠，12周龄)的分组及agomir/antagomir-155干预 1. 1胆固醇修饰的agomir/antagomir-155转染效率的筛选 1)鉴定agomir/antagomir-155体外对细胞的转染效率将Cy3标记的胆固醇修饰的而RNA类似参照物与DC细胞共培养，设置浓度梯度为 IOOnmol, 200nmol和400nmol，荧光显微镜观察胆固醇修饰的miRNA阴性对照在没有转染辅4助试剂的情况下的入胞效率；2)鉴定agomir/antagomir在体对目的组织的转染效率将Cy5标记的胆固醇修饰的而RNA类似参照物用纳米脂质体包裹，设置注射剂量为 2. 5nmol,5nmol, IOnmol, 15nmol,隔天注射，一周后做目的血管免疫组化切片，荧光显微镜观察胆固醇修饰miRNA阴性对照转染效率，筛选出转染效率最高的浓度组。1. 2 agomir -155静脉注射ApoE小鼠体内 实验分组空白对照组注射PBS， 阴性对照组注射agomir-neg，Agomir处理组注射Agomir最佳浓度，隔天注射，连续一周。2、AS病理进程及相关全身炎症指标检测一周后处死小鼠，常规取材，行斑块面积(稳定斑块和不稳定斑块)，纤维帽厚度检测，脂质核心面积大小测量。同时按照常规生化检测要求取血并准备各组小鼠血浆样本，应用全自动生化分析仪测定血脂等相关指标检测。3、斑块局部指标检测小鼠干预1周后，取心脏到主动脉根部标本，取2 - 3cm，进行石蜡切片，切片进行苏木精染色和免疫组化研究，测定斑块局部炎症因子VCAM1，ICAM1, IL本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种微小分子ＲＮＡ－１５５在制备抗动脉粥样硬化炎症药物中的应用，所述ｍｉＲＮＡ－１５５的核苷酸序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示：ＵＵＡＡＵＧＣＵＡＡＵＣＧＵＧＡＵＡＧＧＧＧＵ。
【技术特征摘要】
1.一种微小分子RNA-155在制备抗动脉粥样硬化炎症药物中的应用，所述miRNA-155 的核苷酸序列如 SEQ ID NO:1 所示UUAAUGCUAAUC⑶GAUAGGGGU。2.根据权利要求1所述的一种微小分子RNA-155在制备抗动脉粥样硬化炎症药物中的应用，其特征在于，所制备的药物还含有其他治疗动脉粥...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱建华，陈婷，严卉，杨林，郑筱叶，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86
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