本发明专利技术涉及合欢皮中抗肿瘤新生血管的有效部位的提取工艺，并通过L9(34)正交试验，以抗肿瘤新生血管有效部位干粉量，总皂苷含量为指标，选择一条最佳的工艺提取路线。最佳工艺路线为：70％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，水饱和正丁醇萃取4次，得到合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位。然后以此工艺路线为基础，进行三批中试放大实验，计算三批产物的干粉量，总皂苷含量，并做细胞活性检测，结果显示放大实验重现性好，工艺稳定，抗肿瘤新生血管有效组分活性稳定。
【技术实现步骤摘要】
合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位提取工艺路线的优化及中试放大技术领 域通过利用乙醇加热同流、水饱和正丁醇萃取从合欢皮中得到抗肿瘤新生血管有效部位。本专利技术涉及从中药合欢皮中提取抗肿瘤新生血管有效组分、优化最佳工艺路线以及中试放大。以正丁醇萃取后的干粉量和总皂苷含量为指标，采用L9(34)正交试验，考察溶媒浓度、提取时间、提取次数和萃取次数因素对提取效率的影响，从而确定合欢皮中抗肿瘤新生血管有效组分最佳提取的工艺条件，并且将所得的工艺参数进行工艺放大实验。
技术介绍
中药回流提取法是根据中药中有效成分溶于特定的溶媒，通过选择溶媒将其提取出来。这种方法已越来越多地被运用到中药提取中。回流提取可以将中药中的有效成分很好地提取出来，又可以尽量避免部分杂质的溶出。通过选择不同溶剂可以针对性的提取出所需组分，或者改变溶剂的浓度更多的提取出有效成分，减少杂质的溶出。采用乙醇回流提取时，可以减少溶剂的添加量，也可以回收乙醇，减少成本。萃取是利用化合物在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。利用萃取技术我们可以将中药中的有效组分从杂志中分离出来，达到纯化的目的。正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均勻分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法。 是一种高效率、快速、经济的实验设计方法，正交实验设计在很多领域的研究中已经得到广泛应用。本研究采用了四因素三水平的正交实验，以正丁醇萃取后的干粉量和合欢皮中有效组分总皂苷含量为考察指标，确定最优的提取工艺路线，确定最佳的工艺参数。中药、天然药物的中试研究是指在实验室完成系列工艺研究后，采用与生产基本相符的条件进行工艺放大研究的过程。中试研究是对实验室工艺合理性的验证与完善，是保证工艺达到生产稳定性、可操作性的必经环节，是药物研究工作的重要内容之一，直接关系到药品的安全、有效和质量可控[1、国家品药品监督管理局.中药、天然药物中试研究的技术指导原则，2005]。确定工艺路线后，每步化学合成反应或生物合成反应不会因小试、中试放大和大型生产条件不同而有明显变化，但各步最佳工艺条件，则随试验规模和设备等外部条件的不同而有可能需要调整。合欢皮是中国药典一部收录的一味常用中药，为豆科植物合欢Albizia julibrissin Durazz.的干燥树皮，具有解郁安神，活血消肿的功能，用于心神不安，忧郁失眠，肺痈疮肿，跌扑伤痛等症[2、国家药典委员会.中国药典第一部，中国医药科技出版社，北京，PP34.]。合欢属植物树皮、茎皮、叶、花、种子的主要的化学成分有三萜及其苷类化合物、黄酮及其苷类化合物、生物碱、有机酸、留醇类化合物、木脂素、鞣质及挥发性成分等。在前期的实验研究中，我们发现乙醇回流提取，正丁醇萃取得到的组分具有高效低毒的抑制血管的活性，并在进一步的实验中表明了该组分对HMEC-I细胞的IC50为4. 18ug/ml, LDH浓度为40ug/ml [3、刘玲燕，杜芳芳，冯磊，邱丽颖.合欢皮不同提取组分对HEMC细胞和 3B11细胞的作用研究[J].时珍国医国药.2011,22(3)]。在此基础上我们对此工艺进行了改进，以正丁醇萃取所得组分后的干粉量和总皂苷含量，采用L9(34)正交试验，考察溶媒浓度、提取时间、提取次数和萃取次数因素对提取效率的影响，从而确定合欢皮中抗肿瘤新生血管有效组分最佳提取的工艺条件。为了验证工艺的稳定性和重现性，我们又做了三次实验，每次取IOOg原料，按照最佳工艺路线操作，对正丁醇萃取部分进行称量并进行总皂苷含量测定，同时对正丁醇萃取相进行活性检测。结果表明了最佳工艺路线稳定，重现性好，且提取的有效组分具有很高的活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是选择一条最佳的合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位提取工艺路线， 得到一系列的实验参数，并根据所得参数，进行中试放大。本专利技术的技术方案所述合欢皮抗肿瘤新生血管有效组分提取方法，取合欢皮，粉碎，加乙醇溶液，加热回流，冷却过滤，旋转蒸发至干，去离子水复溶，真空干燥，得干粉，加水溶解，等体积水饱和正丁醇萃取，旋干，加水复溶，真空干燥，萃取干粉。所述正交实验因素和水平的选择，考察溶媒浓度、提取次数、提取时间、萃取次数四个因素，每个因素选择三个水平进行L9 (34)正交实验。所述的最佳工艺路线，将所得9份样品进行称量和含量测定，并对结果进行方差分析，确定最佳的一条工艺路线。所述中试放大，按照实验室所得工艺参数，进行中试放大，并且随外部条件的不同而做一些相应的调整，最终得出中试放大后一些结果。本专利技术的有益效果本专利技术以正丁醇萃取得到的干粉量和抗肿瘤新生血管有效组分中总皂苷的含量为指标，通过正交试验筛选一条最佳的合欢皮中抗肿瘤新生血管有效组分提取工艺路线， 并在所得的一系列工艺参数的基础上，进行中试放大，同时随外部条件的不同而做一些相应的调整，从而为正式生产提供数据。具体实施例方式实施例1 合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位的提取工艺50g合欢皮用500mL70%乙醇回流两次，每次lh，冷却后，过滤，旋转蒸发至干，去离子水复溶，真空干燥，得干粉，加水溶解，等体积水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇相。 旋转蒸发至干，加水复溶，真空干燥，得干粉，备用。实施例2 合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位中总皂苷含量的测定取上述制得干粉样品0. 2g于IOOmL圆底烧瓶中，加30mL 3mol/L硫酸，85°C水浴加热4h，过滤，将沉淀水洗至中性，再于烘箱中80°C烘干。用50mL石油醚回流提取3次，每次提取池，合并回流液，旋干，加甲醇溶解旋干，最后用甲醇定容至10mL，用HPLC进行检测，得出抗肿瘤新生血管有效组分中总皂苷含量。 在最佳提取工艺路线的基础上做三批验证实验，并进行皂苷含量测定，三批次的含量为本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．权利要求利用以乙醇回流、正丁醇萃取所得组分的干粉量和总皂苷含量为指标，通过正交试验，筛选合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位的最佳的提取工艺路线。
【技术特征摘要】
1.权利要求利用以乙醇回流、正丁醇萃取所得组分的干粉量和总皂苷含量为指标，通过正交试验，筛选合欢皮抗肿瘤新生血管有效部位的最佳的提取工艺路线。2.权利要求权利要求1中得到的抗肿瘤新生血管有效部位最佳工艺路线为通过70% 浓度乙醇回流2次每次1小时、等体积水饱和正丁醇萃取。3.权利要求以权利要求2获得的最佳提取工艺路线及工艺参数为基础，确定投药量为 Mkg，进行工艺路线的中试放大，并测定所得抗肿瘤新生血管有效部位干物质得率、总皂苷含量及活性稳定。4.根据权利要求1和权利要求2所述的提取工艺及工艺参数的改进和变动都属于本权利要求范围内。...
【专利技术属性】
技术研发人员：金坚，邱丽颖，冯磊，施建军，齐保华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32
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