本发明专利技术涉及一种非吸水性膜侧向层析一步分析法及其试剂盒，该试剂盒的加样区、标记区、捕获区的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；标记区装载了已知物-第二标记物复合物、能与流经的样品中的待测物特异性结合的第一标记物；第一标记物的显色基团的显色结果与第二标记物的不同；捕获区的固相载体包括对照部分和测试部分；对照部分包被固定了能够特异性结合已知物-第二标记物的复合物的试剂，且结合后显色；测试部分包被固定了能够特异性结合待测物-第一标记物的复合物的试剂，且结合后显色。本发明专利技术的分析法及其试剂盒，与现有技术相比，检测快速、一步到位，并且大大提高了检测的灵敏度和准确度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于诊断分析
技术介绍
有关免疫分析法的具体操作方法以及商业化的试剂盒产品很多，试剂盒产品中待测样品的流动一般是在亲水性固相载体(吸水介质)中进行，在吸水介质的侧向层析的过程中定性或定量地检测待测物。吸水介质通常由层析材料构成，例如滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、无纺布等，吸水介质与样品中的流动相接触作用，然而将流动相里的组份分离的同时也会吸收其中的部分组分，被吸收的组分中也包括待测的组分，因而导致定性检测的灵敏度大大降低，同时，也导致容易出现阴性结果，需要二次检测筛除阴性结果，无法一次性得到准确的结果。
技术实现思路
本专利技术一方面提供了一种非吸水性膜侧向层析一步分析法，该分析法是在样品的侧向层析过程中对样品进行分析，其特征在于所述侧向层析过程的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；所述分析法包括标记步骤以及随后的捕获步骤，所述标记步骤包括对所述样品中的待测物进行特异性标记的步骤，在该步骤中待测物与第一标记物结合形成复合物，同时样品中混入已知物-第二标记物复合物；所述捕获步骤包括分别在不同的区域捕获所述待测物-第一标记物的复合物和已知物-第二标记物的复合物的步骤，且捕获的同时显色。本专利技术另一方面提供了一种非吸水性膜侧向层析一步分析试剂盒，其特征在于 该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动膜装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、吸收区，所述的加样区、标记区、捕获区的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；所述的吸收区能够吸引装置中的样品朝吸收区定向流动；所述的标记区装载了已知物-第二标记物复合物、能与流经的样品中的待测物特异性结合的第一标记物；所述第一标记物的显色基团的显色结果与所述第二标记物的不同；所述的捕获区的固相载体包括对照部分和测试部分；所述的对照部分包被固定了能够特异性结合所述已知物-第二标记物的复合物的试剂，且结合后显色；所述的测试部分包被固定了能够特异性结合所述待测物-第一标记物的复合物的试剂，且结合后显色。上述试剂盒在使用时，将样品加到样品区后，样品在吸收区的吸引下流向标记区， 在标记区待测物与其标记物相互结合，形成待测物-第一标记物复合物，同时样品中混入了标记区已装载的已知物-第二标记物复合物；样品进入捕获区后，在捕获区中的不同区域已知物-第二标记物复合物和待测物-第一标记物复合物分别被捕获，且显示不同的颜色；多余的样品被吸附带吸收。在捕获区读取结果时，一方面对照部分与测试部分的颜色比较有助于确定测试部分的颜色变化，更重要的是可以观察并筛去阴性结果，当对照部分显示预计的颜色时，测试部分的颜色就可以被认为是有效的，是准确的阳性结果；检测快速、一步到位。上述技术方案的试剂盒中，加样区、标记区、捕获区均采用经封闭处理制得的非亲水性固相载体，侧向层析的过程中，样品中的组分不会因被吸收而流失，大大提高了检测的灵敏度和准确度。同时，专利技术人经过大量的研究试验发现，只有采用这种经封闭处理获得的非亲水性固相载体，才能够实现上述的一步分析(获得准确结果)。优选的，所述的封闭剂为动物血清或者表面活性剂的溶液。优选的，所述的封闭剂为甲基化BSA溶液。优选的，所述的亲水性固相载体由无纺布材料组成。优选的，所述的对照部分包被固定了能够特异性结合所述已知物-第二标记物的复合物中的标记物部分的试剂；所述的测试部分包被固定了能够特异性结合所述待测物-第一标记物的复合物中的待测物部分的试剂。优选的，所述的测试部分包被固定的试剂为能够特异性结合所述待测物的抗体或抗体活性部分。优选的，所述与已知物和待测物特异性结合的标记物可以为有色微球、血红细胞、 胶体金或含染料的脂质体的形式。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述已知物的标记物为有色微球，已知物为亲和素或其衍生物；所述的对照部分包被固定的试剂为能够特异性结合已知物的生物素或生物素衍生物。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的待测物为绒毛膜促性腺激素(hCG)，所述捕获区的测试部分包被固定了兔抗hCG。采用本专利技术的非吸水性膜侧向层析一步分析方法及其试剂盒，与现有技术相比， 检测快速、一步到位，大大提高了检测的灵敏度和准确度。附图说明附图1为本专利技术的非吸水性膜侧向层析一步分析试剂盒的示意图。 具体实施例方式以下结合实施例来进一步阐述非吸水性膜侧向层析一步分析试剂盒。如图1所示，非吸水性膜侧向层析一步分析试剂盒的示意图。该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动膜装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、吸收区(所有区均固定在一整块固态底板上)。各个区的具体制备如下1、加样区的制备；加样区采用了经封闭处理的无纺布。将吸水性材料无纺布转化成非吸水性介质的具体步骤将lOmg/mL的甲基化BSA溶液刷在无纺布材料(布垫)的表面，室温放置5分钟后，放入-70°C冻干瓶中冷冻至少1小时。然后放入冷冻干燥机中冷冻过夜。将封闭处理好的布垫切割成IOmmX7. 5mm的长方形。至此，加样区制备完成。2、标记区的制备；对照部分标记物的制备取0. 5mL蓝色微球，按2. 5% (w/v)的浓度悬浮，然后用甘氨酸-盐缓冲液(GBQ洗2次。微球GBS溶液超声粉碎10分钟后，微离心3分钟。沉淀的微球用0. 5mL偶联溶液重新悬浮，溶液超声粉碎10分钟后，室温旋转过夜。偶联溶液是含0. 4mg/mL的链霉素和0. 2mg/mL的甲基化BSA的GBS溶液。微球溶液离心3分钟，弃上清，沉淀用0. 5mL 10mg/mL的甲基化BSA重悬浮，室温继续垂直旋转4小时，离心。弃上清，沉淀用微球储存液洗3次，溶液是50mM Tris溶液，pH 8，含lmg/mL甲基化BSA。将微球用储存液制成1 %的微球溶液。此溶液流经捕获区，与含生物素的对照部分反应。测试部分标记物的制备取0. 5mL红色微球，用ImL甘氨酸-盐缓冲液(GBS)洗2 次。微球GBS溶液超声粉碎10分钟后，微离心3分钟。沉淀的微球用0.5mL偶联溶液重新悬浮，超声粉碎10分钟后，室温旋转过夜。偶联溶液是含0. 8mg/mL的单克隆抗hCG抗体和 0. 2mg/mL的甲基化BSA的GBS溶液。微球溶液离心3分钟，弃上清，沉淀用0. 5mL 10mg/mL的甲基化BSA重悬浮，室温继续垂直旋转4小时，离心。弃上清，沉淀用微球储存液洗3次，溶液是50mM Tris溶液，pH 8，含lmg/mL甲基化BSA。将微球用储存液制成1 %的微球溶液。此溶液流经捕获区，与含生兔抗hCG的测试部分反应。标记区的制备用甲基化BSA溶液将测试微球和对照微球混合稀释，测试微球浓度为0.06%，对照微球浓度为0.02%。搅拌均勻。将混合溶液加到无纺布垫上。室温放置 5分钟后，放入-70°C冻干瓶中冷冻至少1小时。然后放入冷冻干燥机中冷冻过夜。将封闭处理好的布垫切割成IOmmX7. 5mm的长方形。至此，标记区制备完成。3、捕获区的制备；捕获区的材料使用硝酸纤维素膜，孔径8-12 μ m。测试区宽度是2cm，喷涂2mg/mL 兔抗hCG的Tris溶液，喷膜机参数设为压力阀472千帕，容器压力34千帕，流速15秒/滴， 图表速度500mm/分钟。在与测试区平行的0. 3cm处本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种非吸水性膜侧向层析一步分析法，该分析法是在样品的侧向层析过程中对样品进行分析，其特征在于：所述侧向层析过程的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；所述分析法包括标记步骤以及随后的捕获步骤，所述标记步骤包括对所述样品中的待测物进行特异性标记的步骤，在该步骤中待测物与第一标记物结合形成复合物，同时样品中混入已知物－第二标记物复合物；所述捕获步骤包括分别在不同的区域捕获所述待测物－第一标记物的复合物和已知物－第二标记物的复合物的步骤，且捕获的同时显色。
【技术特征摘要】
1.一种非吸水性膜侧向层析一步分析法，该分析法是在样品的侧向层析过程中对样品进行分析，其特征在于所述侧向层析过程的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；所述分析法包括标记步骤以及随后的捕获步骤，所述标记步骤包括对所述样品中的待测物进行特异性标记的步骤，在该步骤中待测物与第一标记物结合形成复合物，同时样品中混入已知物-第二标记物复合物；所述捕获步骤包括分别在不同的区域捕获所述待测物-第一标记物的复合物和已知物-第二标记物的复合物的步骤，且捕获的同时显色。2.一种非吸水性膜侧向层析一步分析试剂盒，其特征在于该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动膜装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、 吸收区，所述的加样区、标记区、捕获区的固相载体为非亲水性固相载体，其由亲水性固相载体经封闭处理而成；所述的吸收区能够吸引装置中的样品朝吸收区定向流动；所述的标记区装载了已知物-第二标记物复合物、能与流经的样品中的待测物特异性结合的第一标记物；所述第一标记物的显色基团的显色结果与所述第二标记物的不同；所述的捕获区的固相载体包括对照部分和测试部分；所述的对照部分包被固定了能够特异性结合所述已知物-第二标记物的复合物的试剂，且结合后显色；所述的测试部分包被固定...
【专利技术属性】
技术研发人员：李纪阳，
申请(专利权)人：苏州浩欧博生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：32
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