枸骨根茎提取物制备方法及制剂以及在制备心血管药物中的应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种枸骨根茎提取物及其制备方法、其制剂的制备方法与其在制备冠状动脉性心脏病治疗药物中的应用，该提取物中皂苷类活性组分具有显著的冠状动脉性心脏病治疗活性，可以用来制备冠状动脉性心脏病治疗药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体涉及一种枸骨根活性组分的制备方法及其制剂的制备方法与其在制备制备心血管药物中的应用，该活性组分具有显著的扩张冠状动脉及抗心肌缺血再灌注损伤活性，可以用来制备冠状动脉性心脏病的药物。
技术介绍
枸骨根茎药材取自冬青科枸骨属植物枸骨根茎ahizome of Ilex cornuta (Lindl.))的干燥根和茎，根味苦，性凉，无毒，功能补肝肾，健腰膝，除风湿，凉血清热。主治肝肾不足，腰膝疾弱，关节疼痛，头风，牙痛。近年来国内外学者从枸骨属植物中分离鉴定出几种黄酮及其苷类和几十种五环三萜皂苷成分，这些皂苷主要为齐墩果烷型和乌苏烷型两种。陈小夏等通过缺血再灌注损伤模型，离体血管条，血液流变学实验，发现枸骨根茎的水提液能增加离体鼠心脏的冠脉流量，提高心脏的耐缺氧能力，对垂体后叶素引起的大鼠急性心肌缺血有保护作用，还能增加脑血流量。还有文献报道本属植物中所含的活性成分ilexoside具有较好的抗血小板凝集活性，降压作用，降脂和抗菌消炎作用。经过反复研究发现枸骨根茎中治疗冠状动脉性心脏病的活性组分主要由10种皂苷类成分和3种黄酮类成分组成，我们经过了系统研究，准备开发以该活性组分为主要成分的治疗冠状动脉性心脏病药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种枸骨根茎活性组分的制备方法及其制剂的制备方法，还提供枸骨根茎活性组分在制备冠状动脉性心脏病药物中的新用途。枸骨根茎活性组分的制备方法，其中将枸骨根茎药材，切断或粉碎成粗粉，用 6-12倍量水或乙醇加热回流提取2-3次，每次l_3h，过滤，合并滤液；上述滤液减压浓缩， 析胶，滤过，滤液上大孔吸附树脂柱，收集50-80%乙醇洗脱液，脱色，回收溶剂，干燥，即得枸骨根茎活性组分，枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分中皂苷类成分含量为70%以上。本专利技术中皂苷类成分含量的测定方法 “ 1、乌苏酸对照品溶液的制备精密称取乌苏酸对照品5mg于50mL容量瓶中，以甲醇溶解，定容，配成0. lmg/mL的标准品溶液，冷藏保存备用。2、乌苏酸最大吸收波长的确定精密吸取对照品溶液lml，2份(一份做空白，一份做显色)，加入标号的干燥的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇，显色组加入5ml的高氯酸， 摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在200 700nm波长范围内进行扫描。结果供试品溶液与对照品溶液在310nm波长处有最大吸收，故确定测定波长为 310nmo3、标准曲线的绘制精密移取对照品溶液0. 3,0. 6,0. 9，1. 2，1. 5,1.8 mL各2份(一份做空白，一份做显色)，转移至IOmL的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇， 显色组加入5ml的高氯酸，摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在 200-500nm波长扫描，在310nm波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，乌苏酸对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，以吸收度A对浓度C作最小二乘法回归，得标准曲线方程为 C=O. 021A+0. 016，R2=0. 999 (n=3)，线性范围为6. 2 31. 0 μ g/mL，质量浓度与吸收度值的线性关系良好。4、样品中皂苷类成分含量测定方法取枸骨根茎药材适量，粉碎，称取药材34. 90g,用10倍量70%乙醇(即350ml )，提取2 次，每次1. 5小时，所得溶液用中速滤纸过滤，浓缩至IOOml以下，转移至IOOml的容量瓶， 定容至刻度，即得0. 349g/ml的枸骨根茎提取物；移取枸骨根茎提取液1ml，转移至250ml 的容量瓶中，定容至刻度，即得1. 396mg/ml的枸骨根茎供试品溶液。精密吸取供试品溶液 lml，2份(一份做空白，一份做显色)，加入标号的干燥的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇，显色组加入5ml的高氯酸，摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在200-500nm波长扫描，在310nm处测定其吸收度。由标准曲线求得枸骨根茎有效组分样品中总皂苷浓度并计算含量。” 上述引号中的检测方法简称为枸骨皂苷检测法。在本专利技术下文中将多次引用枸骨皂苷检测法。本专利技术所述枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分，其提取方法为枸骨根茎活性组分的制备方法，将枸骨根茎药材粉碎成粗粉，用0-95%乙醇浸泡 0. 5-2h,612倍量加热回流提取2-3次，每次l_3h，过滤，合并滤液；上述滤液于50-70°C 减压浓缩至0. 5-1. Og生药材/mL，0-4°C冷藏过夜，析胶，滤过，有机溶剂萃取，回收有机溶剂，残留物用适量水溶解，滤过，滤液上大孔吸附树脂柱，上样后依次用6-12倍量蒸馏水、 20-40%乙醇洗脱，50-80%乙醇洗脱，洗脱流速为1. 0-2. Oml/min,收集50-80%乙醇洗脱液；上述乙醇洗脱液于50-70°C减压浓缩至无乙醇味，浓缩液0-4°C冷藏过夜，滤过，滤液中加入生药量3-10%的聚酰胺，搅拌0. 5-4h，静置4-12h，滤过，滤液中再加入活性炭，搅拌 0. 5-4h，静置4-12h，滤过，滤液用喷雾干燥法进行干燥，收集喷干粉，即得枸骨根茎活性组分。其中大孔树脂可以选择各种型号的皂苷类吸附树脂，包括D4020型、NKA-9型、AB-8型、 ZTC型、DlOl型及ADS-F8型，优选DlOl型和DlOlC型大孔树脂。本专利技术枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分可以用于制备冠状动脉性心脏病治疗或用于冠状动脉性心脏病辅助治疗的药物，该活性组分可以作为活性成分与药物载体配制成药剂学上的各种制剂，枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分在制剂中的分散状态可以是液体，也可以是固体，该制剂的给药途径可以是口服、注射和局部给药。枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分中化学成分的HPLC标定1、混合对照品溶液的制备将10种皂苷类成分对照品，精密称定各约10 20mg，分别置于5 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液，精密量取各储备液2mL，分别置于25 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇勻，作为每种对照品溶液；精密量取各储备液2mL， 置于同一个25mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇勻，作为10种对照品溶液。2、供试品溶液的制备取枸骨根茎冠状动脉性心脏病治疗活性组分粉末约50mg， 精密称定，置于50mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，滤过，取续滤液IOmL作为供试品溶液。3、色谱条件色谱柱Diamonsil C18 色谱柱 6 mm X250 mm, 5μπι);流动相甲醇-水梯度洗脱(甲醇0 min为40%，90 min为90%，120 min为90%) ；UV检测波长 203 nm，流速1. 0 mL/min ；柱温35°C ；进样量 20ml ； ELSD 检测器:SHIMADZU ELSD-LT II 型本文档来自技高网...

【技术保护点】
度；由标准曲线求得枸骨根茎有效组分样品中总皂苷浓度并计算含量。ｌ的甲醇，显色组加入５ｍｌ的高氯酸，摇匀，显色组于７０摄氏度水浴中反应１５ｍｉｎ，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却１５ｍｉｎ，随行试剂为空白，于岛津ＵＶ－２５５０紫外分光光度计，在２００－５００ｎｍ波长扫描，在３１０ｎｍ处测定其吸收取枸骨根茎提取液１ｍｌ，转移至２５０ｍｌ的容量瓶中，定容至刻度，即得１．３９６ｍｇ／ｍｌ的枸骨根茎供试品溶液；精密吸取供试品溶液１ｍｌ，２份（一份做空白，一份做显色），加入标号的干燥的具塞试管中，于６０摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入５ｍ法取枸骨根茎药材适量，粉碎，称取药材３４．９０ｇ，用１０倍量７０％乙醇（即３５０ｍｌ），提取２次，每次１．５小时，所得溶液用中速滤纸过滤，浓缩至１００ｍｌ以下，转移至１００ｍｌ的容量瓶，定容至刻度，即得０．３４９ｇ／ｍｌ的枸骨根茎提取物；移横坐标，绘制标准曲线，以吸收度Ａ对浓度Ｃ作最小二乘法回归，得标准曲线方程为：Ｃ＝０．０２１Ａ＋０．０１６，　Ｒ２＝０．９９９（ｎ＝３），线性范围为６．２～３１．０　μｇ／ｍＬ，质量浓度与吸收度值的线性关系良好；Ｄ、样品中皂苷类成分含量测定方色组于７０摄氏度水浴中反应１５ｍｉｎ，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却１５ｍｉｎ，随行试剂为空白，于岛津ＵＶ－２５５０紫外分光光度计，在２００－５００ｎｍ波长扫描，在３１０ｎｍ波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，　乌苏酸对照品浓度为；Ｃ、标准曲线的绘制精密移取对照品溶液０．３，０．６，０．９，１．２，１．５，１．８　ｍＬ各２份（一份做空白，一份做显色），转移至１０ｍＬ的具塞试管中，于６０摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入５ｍｌ的甲醇，显色组加入５ｍｌ的高氯酸，摇匀，显应１５ｍｉｎ，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却１５ｍｉｎ，随行试剂为空白，于岛津ＵＶ－２５５０紫外分光光度计，在２００～７００ｎｍ波长范围内进行扫描；结果供试品溶液与对照品溶液在３１０ｎｍ波长处有最大吸收，故确定测定波长为３１０ｎｍ冷藏保存备用；Ｂ、乌苏酸最大吸收波长的确定精密吸取对照品溶液１ｍｌ，２份（一份做空白，一份做显色），加入标号的干燥的具塞试管中，于６０摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入５ｍｌ的甲醇，显色组加入５ｍｌ的高氯酸，摇匀，显色组于７０摄氏度水浴中反１．枸骨根茎提取物及其制备方法，其特征在于提取物中皂苷类成分含量为７０％以上；提取物中皂苷类成分含量的测定方法如下：Ａ、乌苏酸对照品溶液的制备精密称取乌苏酸对照品５ｍｇ于５０ｍＬ容量瓶中，以甲醇溶解，定容，配成０．１ｍｇ／ｍＬ的标准品溶液，...

【技术特征摘要】
1.枸骨根茎提取物及其制备方法，其特征在于提取物中皂苷类成分含量为70%以上；提取物中皂苷类成分含量的测定方法如下A、乌苏酸对照品溶液的制备精密称取乌苏酸对照品5mg于50mL容量瓶中，以甲醇溶解，定容，配成0. lmg/mL的标准品溶液，冷藏保存备用；B、乌苏酸最大吸收波长的确定精密吸取对照品溶液lml，2份(一份做空白，一份做显色)，加入标号的干燥的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇，显色组加入5ml的高氯酸， 摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在200 700nm波长范围内进行扫描；结果供试品溶液与对照品溶液在310nm波长处有最大吸收，故确定测定波长为 3IOnm ；C、标准曲线的绘制精密移取对照品溶液0. 3,0. 6,0. 9，1. 2，1. 5,1.8 mL各2份(一份做空白，一份做显色)，转移至IOmL的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇， 显色组加入5ml的高氯酸，摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在 200-500nm波长扫描，在310nm波长处测定吸收度；以吸收度为纵坐标，乌苏酸对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，以吸收度A对浓度C作最小二乘法回归，得标准曲线方程为 C=O. 021A+0. 016，R2=0. 999 (n=3)，线性范围为6. 2 31. 0 μ g/mL，质量浓度与吸收度值的线性关系良好；D、样品中皂苷类成分含量测定方法取枸骨根茎药材适量，粉碎，称取药材34. 90g，用10倍量70%乙醇(即350ml)，提取2 次，每次1. 5小时，所得溶液用中速滤纸过滤，浓缩至IOOml以下，转移至IOOml的容量瓶， 定容至刻度，即得0. 349g/ml的枸骨根茎提取物；移取枸骨根茎提取液1ml，转移至250ml 的容量瓶中，定容至刻度，即得1. 396mg/ml的枸骨根茎供试品溶液；精密吸取供试品溶液 Iml，2份(一份做空白，一份做显色)，加入标号的干燥的具塞试管中，于60摄氏度真空干燥箱中挥干，空白组加入5ml的甲醇，显色组加入5ml的高氯酸，摇勻，显色组于70摄氏度水浴中反应15min，并时时振摇，反应完全后立即置冰水浴中冷却15min，随行试剂为空白，于岛津UV-2550紫外分光光度计，在200-500nm波长扫描，在310nm处测定其吸收度；由标准曲线求得枸骨根茎有效组分样品中总皂苷浓度并计算含量。2.根据权利要求1所述的枸骨根茎提取物，其特征在于用于冠状动脉性心脏病治疗。3.根据权利要求1所述的提取物，其制备方法为将枸骨根茎药材，切断或粉碎成粗粉， 用6-12倍量水或乙醇加热回流提取2-3次，每次l_3h，过滤，合并滤液；上述滤液减压浓缩，析胶，滤过，滤液上大孔吸附树脂柱，收集50-80%乙醇洗脱液，脱色，回收溶剂，干燥，即得枸骨根茎提取物，提取物中皂苷类成分含量为70%以上，提取物中皂苷类成分含量的测定方法如下A、乌苏酸对照品溶液的制备精密称取乌苏酸对照品5mg于50mL容量瓶中...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨世林，许琼明，简晖，刘艳丽，冯育林，李笑然，陈兰英，罗颖颖，
申请(专利权)人：江西本草天工科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：36