本发明专利技术公开了与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的玉米蛋白及其编码基因与应用。本发明专利技术所提供的与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的蛋白,是如下(a)或(b)的蛋白质;(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的由(a)衍生的蛋白质。半定量RT-PCR检测发现在玉米叶片上瞬时沉默ZmTrm2促进了甘蔗花叶病毒的系统侵染，在普通烟上表达ZmTrm2可以抑制烟草脉带花叶病毒的复制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的玉米蛋白及其编码基因与应用。
技术介绍
在过去的十年中，植物病毒和寄住之间的分子间相互作用取得了很大的进展。但是病毒侵染是如何在生化和生理水平上影响植物的细胞，组织乃至整株在植物病毒学的研究中还是个缺口。病毒是如何利用它自身的少数几个蛋白来侵染植物并引起症状的还有很多方面有待研究。病毒在植物体内引起的症状是植物在细胞水平上生理和结构发生的变化结合植物本身的生长发育的减缓而产生的。通过重组DNA技术的应用从而研究病毒的基因产物在症状产生过程中的作用使得我们逐步了解病毒侵染植物的这个过程。目前的研究手段主要有以下几个1病毒突变的方式来确定与症状表达相关的基因产物和遗传位点，应用这个方法研究病毒的例子很多，但是通过病毒突变的方式研究的结果更倾向于对病毒的研究，而不是对症状产生的生化机制的研究；II通过转基因的方式在寄主植物中异源表达病毒基因，通过转基因的方式可以把单个病毒基因产物的影响和病毒复制的影响区分开。 组成型表达花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus, CaMV)的VI基因会诱导转基因植物产生严重的褪绿症状，与花椰菜花叶病毒侵染后的症状非常相似，通过差异分析发现转VI基因的拟南芥和花椰菜花叶病毒侵染的拟南芥的几个基因在表达方式的变化上是一致的，有报道病毒的移动蛋白对寄主植物有重要影响，这些方法为阐明病毒基因产物在症状产生和病毒防卫反应中的作用提供了新的信息，但是还是有相当多的一些控制病毒病的因子没有被发现，通过高通量的方法研究转录水平的变化可以更全面的研究病毒侵染后寄主的变化。专利
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供与马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒侵染有关的玉米蛋白及其编码基因。本专利技术所提供的与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的玉米蛋白，名称为ZmTrm2，来源于玉米(Zea mays L.)，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/ 或缺失和/或添加且与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的由(a)衍生的蛋白质。所述与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的玉米蛋白的编码基因也属于本专利技术的保护范围。所述与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的玉米蛋白的编码基因为如下1)-3)中任一所述的基因1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)在严格条件下与1)所示的DNA分子杂交且编码所述蛋白的基因；3)与1)或2)的基因具有90%以上的同源性且编码所述蛋白的基因。含有所述编码基因的表达盒、重组载体、转基因细胞系或重组菌。上述严格条件可为用6XSSC，0. 5% SDS的溶液，在65°C下杂交，然后用2XSSC， 0. 1 % SDS 和 1 X SSC, 0. 1 % SDS 各洗膜一次。序列表中的序列2由516个碱基组成，其开放阅读框架(ORF)为自5'末端第1 位-第513位碱基，编码氨基酸序列是序列表中序列1所示的蛋白。所述重组载体是在载体PVX或载体BMVpF3-5/13’A/G的多克隆位点间插入所述编码基因得到的重组载体。扩增所述编码基因全长或其任一片段的引物对也属于本专利技术的保护范围，所述引物对中，一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示。本专利技术的另一个目的是提供序列表中序列1所示的蛋白在抑制植物病毒复制或防治植物病毒病害中的应用。序列表中序列1所示的蛋白的编码基因在抑制植物病毒复制或防治植物病毒病害中的应用也属于本专利技术的保护范围；所述蛋白的编码基因为如下1)-3)中任一所述的基因1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)在严格条件下与1)所示的DNA分子杂交且编码所述蛋白的基因；3)与1)或2)的基因具有90%以上的同源性且编码所述蛋白的基因。含有序列表中序列1所示蛋白的编码基因的重组表达载体在抑制植物病毒复制或防治植物病毒病害中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述重组表达载体为在载体PVX的多克隆位点插入序列表中序列1所示蛋白的编码基因得到的重组表达载体；所述抑制植物病毒复制为抑制植物病毒在植物体中的复制；所述植物病毒为马铃薯Y病毒属病毒；所述病毒病害是由马铃薯Y病毒属病毒引起的病害；所述马铃薯Y病毒属病毒为烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein bandingmosaic virus, TVBMV)或甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV)；所述植物为双子叶植物或单子叶植物；所述单子叶植物为玉米；所述双子叶植物为烟草。本专利技术通过半定量RT-PCR技术考察了 ZmTrm2在玉米的根、茎、叶、雄蕊、雌蕊、 种子中的分布，结果发现它能够在各个组织和器官中分布，通过共聚焦显微镜观察发现 ZmTrm2存在于叶肉细胞的叶绿体中。半定量RT-PCR检测发现在玉米叶片上瞬时沉默 ZmTrm2促进了甘蔗花叶病毒的系统侵染，在普通烟上表达ZmTrm2可以抑制烟草脉带花叶病毒的复制。附图说明图1为半定量RT-PCR检测ZmTrm2的组织分布。图2为激光共聚焦显微镜观察ZmTrm2的细胞内亚定位。图3为半定量RT-PCR检测甘蔗花叶病毒的积累水平。图4为半定量RT-PCR检测烟草脉带花叶病毒的积累水平。具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、ZmTrm2的获得一、玉米抑制性消减杂交文库的构建1、玉米总RNA的提取1)取0. Ig新鲜的玉米叶片，加液氮研磨成粉末状，移入一灭菌的1.5ml离心管中， 然后加入Iml的Tri-Reagent，剧烈振荡摇勻或将Iml的Tri-Reagent加入到_80°C冻存的 1 X 106原生质体中，剧烈振荡:3min ；冰上放置5min。2)勻浆用IEC台式冷冻离心机于4°C、12，OOOg条件下离心IOmin以除去不溶的成分，将上清转入一新的1. 5ml离心管中。3)在室温下静置5min，加0. 2ml氯仿，剧烈震荡15sec，然后在室温下静置 2-5min,再于 4°C、12，000 X g 的条件下离心 15min。4)将上层水相转移到新的1. 5ml离心管中，加0. 5ml异丙醇，混合(上下颠倒)， 使样品在室温下静置15min，4°C、12，000 X g离心lOmin，则RNA会在管的侧壁和底部形成沉淀。5)弃上清，加入75 %的乙醇洗涤沉淀，然后4°C、7，500 X g离心5min (如RNA沉淀悬浮起来，则用12，OOOXg)，弃乙醇。6) RNA在室温下干燥IOmin或在冷冻离心浓缩机上浓缩5min，加入30 μ 1 DEPC处理的超纯水溶解沉淀，-70°C保存备用。2、从植物总RNA中分离mRNA1)首先对总RNA定量，把定量的总RNA加入1. 5ml的离心管中。注意不要超过试剂盒所要求的量。2)力口 250 μ 1 OBB buffer 禾口 15 μ 1 Oligotex suspension，并且充分混合。3)把混合后的样品放到70°C的水浴锅中温浴3分钟(破坏RNA的二级结构)。4)取出样品在室温下放置10分钟(让poly (A)和本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种蛋白，是如下（ａ）或（ｂ）的蛋白质：（ａ）由序列表中序列１所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（ｂ）将序列表中序列１的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和／或缺失和／或添加且与马铃薯Ｙ病毒属病毒侵染有关的由（ａ）衍生的蛋白质。
【技术特征摘要】
1.一种蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与马铃薯Y病毒属病毒侵染有关的由(a)衍生的蛋白质。2.权利要求1所述蛋白的编码基因。3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述蛋白的编码基因为如下1)-3) 中任一所述的基因1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)在严格条件下与1)所示的DNA分子杂交且编码所述蛋白的基因；3)与1)或2)的基因具有90%以上的同源性且编码所述蛋白的基因。4.含有权利要求2或3所述编码基因的表达盒、重组载体、转基因细胞系或重组菌。5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于所述重组载体是在载体PVX或载体 BMVpF3-5/13’ A/G的多克隆位点间插入所述编码基因得到的重组载体。6.扩增权利要求2或3所述编码基因全长或其任一片段的引物对，所述引物对中，一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中...
【专利技术属性】
技术研发人员：范在丰，施艳，曹言勇，周涛，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11
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