一种构建群体遗传资源库的方法技术

本发明专利技术属于群体遗传资源库的构建领域，提供了一种科学地构建群体遗传资源库的方法，具体涉及贵州省17个世居少数民族遗传资源库的构建方案。该遗传资源库包括信息数据库、血浆样本库、总RNA备用库和DNA样本库。该遗传资源库具有以下特点：1、样本量大、结构多样化，能满足不同研究策略对样本的要求。2、资料齐全、可供持续研究：对每位对象都详细记录人口学、遗传病学和流行病学资料，并进行了临床体检、乙肝血清学检测以及各项血液生化与免疫检查，建立了系统的信息数据库。3、规范化的采集、保存和管理制度。4、建立了规范的从宣传动员，调查采样，临床体检，DNA提取等一套完整的遗传资源和标本收集的方法以及数据入库、实验室管理办法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于群体遗传资源库的构建领域，具体涉及一种构建贵州省17个世居少数民族遗传资源库的方法。
技术介绍
随着人类基因组计划的完成和全基因组关联研究工作的进展，全面深入的了解个体和群体间基因组的变异或多态性已成为可能，并在研究复杂疾病相关基因、群体遗传学、人类学、起源及进化等多方面中日益显示出重要性。人类遗传资源不仅是开展人类基因组生物多样性、了解人类的起源和进化的基础材料，也是研究人类遗传性疾病和许多重大疾病的物质基础。中国是一个人口大国，中华民族不仅占世界人口总数的22％，而且是一个多民族国家，除汉族外，还有55个已识别的少数民族，是人类遗传资源最丰富的国家。贵州省是一个多民族省份，有49个民族成份，世居少数民族17个，其中苗族人口占全国苗族总人口的49.8％；布依族人口占全国布依族总人口的97.3％；侗族人口占全国侗族总人口的55.7％；仡佬族人口占全国仡佬族总人口的98.2％；水族人口占全国水族总人口的90.86％，贵州少数民族成份居全国第五位，少数民族人口居全国第三位，构成了极其珍贵的遗传资源，尤其是一些偏远地区的民族人口由于地理位置的限制，基因的外向流动较慢，形成了特殊的遗传资源隔离群体和遗传疾病的大家族。这类民族具有遗传背景相对单一的特点，从而完整地保留了某些少见的遗传性状和疾病基因，是基因研究中不可多得的资源。随着经济、交通、信息的快速发展，生活方式的改变，这些资源正面临着流失和混杂的危险，为了保护这些珍贵的地方民族遗传资源，更好的开展群体遗传学和疾病相关基因等研究，建立了贵州世居少数民族遗传资源基因库迫在眉睫。虽然目前国内已有研究机构建立了各类的群体遗传资源库，但这些资源库均不同程度地存在每个群体样本量少、样本采集缺乏系统性、科学性等情况。本专利技术所提及的贵州省世居少数民族遗传资源库则具有样本量大、结构多样化的特点，每个民族样本量大于500份，有的民族甚至超过1000份，资源库样本总量10018份，能满足不同研究策略对样本的要求，更好的为后续多类实验研究提供基础资源。本专利技术所提供的构建群体遗传资源库的方法科学有效：调查问卷设计系统、详实；样本采集方法安全、可靠；临床体检及各类生化、免疫检查系统而具有针对性；样本保存和管理规范、合理。本专利技术提供的方法所构建出的遗传资源库能满足多类实验研究及持续研究，为后续疾病相关基因、群体遗传学等方面的研究提供更详实、科学的研究材料。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种科学地构建群体遗传资源库的方法，提供贵州省17个世居少数民族遗传资源库的构建方案。本专利技术人已建成一个具有相当规模、资料齐全、规范化管理的贵州17个世居少数-->民族遗传资源库，其中包括信息数据库、血浆样本库、总RNA备用库和DNA样本库。本专利技术人共采集贵州省世居17个少数民族隔离人群和汉族隔离人群血液样本共10018份，完成了样品的基因组DNA提取，并初步建立了贵州少数民族体质流行病学数据库，保存了10018份贵州17个世居少数民族人群相应的DNA、血浆和临床数据的遗传资源。该遗传资源库具有以下特点：1、样本量大、结构多样化，能满足不同研究策略对样本的要求：确保所采集的每个民族都有较大的样本量，且结合临床资料以及体检结果基本能满足后续与多种疾病的相关研究。2、资料齐全、可供持续研究：对每位对象都详细记录人口学、遗传病学和流行病学资料，并进行了临床体检、乙肝血清学检测以及各项血液生化与免疫检查，建立了系统的信息数据库。3、规范化的采集、保存和管理制度。4、建立了规范的从宣传动员，调查采样，临床体检，DNA提取等一套完整的遗传资源和标本收集的方法以及数据入库、实验室管理办法。本专利技术的技术方案：一种构建群体遗传资源库的方法。构建遗传资源库具体步骤如下：(1)、准备采集对象居住所在地信息总表、问卷调查表、体检登记表、样本采集耗材、临床体检器材以及临床生化检测仪器，工作人员分组。(2)、研究人员调查并填写采集对象居住所在地信息总表，同时组织被采样人群到相应地点接受问卷调查并签订遗传资源调查知情同意书：被采样人在正常、清醒的精神状态下，仔细阅读知情同意书，同意后签字；或在有证人的情况下，将知情同意书的内容念给被采样人听，被采样人同意后亲自签字或按手印；同时由登记组研究人员对问卷表及知情同意书编号，填写被采样人基本资料及问卷调查结果，并采集头发及指甲。(3)、体检组研究人员对被采样人群进行遗传学体征信息收集以及健康体检：对被采样对象进行详细体检，并填写体检登记表，体检结束后，对有疑难病症的被采样人进行诊疗。(4)、采血组研究人员对被采样人群进行采血、采血管编号并登记相关内容：每个被采样对象分别用EDTA.Na2抗凝管与枸橼酸钠抗凝管采血，各管均抽取静脉血3m1。(5)、误餐费发放及收表组研究人员进行体检登记表的检查、补充及回收，误餐费的发放。(6)、实验处理组研究人员及时取EDTA.Na2抗凝管血液样本适量加入RNA保护剂适量，-80℃低温保存，以备后续总RNA提取。(7)、实验处理组研究人员离心分离EDTA.Na2抗凝管血液样本中的血浆与血细胞，并对已分离的血液中血细胞部分进行基因组DNA的提取及定量。(8)、血液筛查组研究人员对已分离的EDTA.Na2抗凝管血液样本中血浆部分进行各类临床生化与免疫指标检测(如乙肝血清学筛查、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶筛查、β-地中海贫血筛查、风湿因子、甲胎蛋白检测、各种酶活性检测等)；同时及时对枸橼酸钠抗凝管血液样本进行血型鉴定和血常规检测。(9)、实验处理组研究人员对枸橼酸钠抗凝管中血液样本进行基因组DNA的提取及定量。(10)、建立贵州17个世居少数民族遗传资源DNA样本库：将实验处理组研究人员抽提的样本基因组DNA核对编号后放入-80℃超低温冰箱保存。-->(11)、建立贵州17个世居少数民族遗传资源血浆样本库：将EDTA.Na2抗凝管血液样本中的血浆部分核对编号后放入-80℃超低温冰箱保存。(12)、建立贵州省17个世居少数民族遗传资源总RNA备用库：将实验处理组研究人员加入了RNA保护剂的EDTA.Na2抗凝管血液样本置于-80℃超低温冰箱保存，以备后续研究需要时的总RNA提取，进行mRNA表达研究。(13)、建立贵州17个世居少数民族遗传资源信息数据库：遗传资源原始书面资料编号装订后存档，信息资料存入电脑，用数据库软件建立系统详实的信息数据库，同时刻录光盘保存，并由专职研究人员负责数据库的记录管理工作。(14)、制定“贵州17个世居少数民族遗传资源库构建指南”以及“贵州17个世居少数民族遗传资源库规范化管理和样本的保存、领用守则”：建立规范的从宣传动员，调查采样，临床体检，DNA提取等一套完整的遗传资源和标本收集的方法以及数据入库、实验室管理办法。前述步骤(1)中工作人员分组分为登记组、体检组、采血组、误餐费发放及收表组、血液筛查组、实验处理组。采集对象居住所在地信息总表内容包括对采集对象居住所在地自然地理信息、经济地理信息、医学地理信息和社会文化信息的调查。步骤(2)中调查问卷主要为人口学、遗传病学、流行病学内容，包括家系、现病史、过往病史的调查等；采集的头发及指甲分袋保存以备后用。步骤(3)中步骤(3)中遗传学体征信息收集项目包括：指距本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种构建群体遗传资源库的方法，涉及贵州省１７个世居少数民族遗传资源库的构建，其特征在于：构建遗传资源库包括以下步骤：（１）、准备采集对象居住所在地信息总表、问卷调查表、体检登记表、样本采集耗材、临床体检器材以及临床生化检测仪器，工作人员分组；（２）、研究人员调查并填写准备采集对象居住所在地信息总表，同时组织被采样人群到相应地点接受问卷调查并签订遗传资源调查知情同意书；（３）、体检组研究人员对被采样人群进行遗传学体征信息收集以及健康体检；（４）、采血组研究人员对被采样人群进行采血、采血管编号并登记相关内容；（５）、误餐费发放及收表组研究人员进行体检登记表的检查、补充及回收，误餐费的发放；（６）、实验处理组研究人员及时取适量ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝管血液样本，加入适量ＲＮＡ保护剂后－８０℃保存，以备后续总ＲＮＡ的提取；（７）、实验处理组研究人员离心分离ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝管血液样本中的血浆与血细胞，并对已分离的血液中血细胞部分进行基因组ＤＮＡ的提取及定量；（８）、血液筛查组研究人员对已分离的ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝管血液样本中血浆部分进行各类临床生化与免疫指标检测；同时对枸橼酸钠抗凝管血液样本进行血型鉴定和血常规检测；（９）、实验处理组研究人员对枸橼酸钠抗凝管中血液样本进行基因组ＤＮＡ的提取及定量；（１０）、建立贵州省１７个世居少数民族遗传资源ＤＮＡ样本库：将实验处理组研究人员抽提的样本基因组ＤＮＡ核对编号后放入－８０℃超低温冰箱保存。（１１）、建立贵州省１７个世居少数民族遗传资源血浆样本库：将ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝管血液样本中的血浆部分核对编号后放入－８０℃超低温冰箱保存。（１２）、建立贵州省１７个世居少数民族遗传资源总ＲＮＡ备用库：将实验处理组研究人员加入了ＲＮＡ保护剂的ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝管血液样本置于－８０℃超低温冰箱保存，以备后续研究需要时的总ＲＮＡ提取，进行ｍＲＮＡ表达研究；（１３）、建立贵州省１７个世居少数民族遗传资源信息数据库：遗传资源原始书面资料编号装订后存档，信息资料存入电脑，用Ａｃｃｅｓｓ软件建立系统详实的信息数据库，同时刻录光盘保存，并由专职研究人员负责数据库的记录管理工作。（１４）、制定“贵州１７个世居少数民族遗传资源库构建指南”以及“贵州１７个世居少数民族遗传资源库规范化管理和样本的保存、领用守则”：建立规范的从宣传动员，调查采样，临床体检，ＤＮＡ提取等一套完整的遗传资源和标本收集的方法以及数据入库、实验室管理办法。...

【技术特征摘要】
1.一种构建群体遗传资源库的方法，涉及贵州省17个世居少数民族遗传资源库的构建，其特征在于：构建遗传资源库包括以下步骤：(1)、准备采集对象居住所在地信息总表、问卷调查表、体检登记表、样本采集耗材、临床体检器材以及临床生化检测仪器，工作人员分组；(2)、研究人员调查并填写准备采集对象居住所在地信息总表，同时组织被采样人群到相应地点接受问卷调查并签订遗传资源调查知情同意书；(3)、体检组研究人员对被采样人群进行遗传学体征信息收集以及健康体检；(4)、采血组研究人员对被采样人群进行采血、采血管编号并登记相关内容；(5)、误餐费发放及收表组研究人员进行体检登记表的检查、补充及回收，误餐费的发放；(6)、实验处理组研究人员及时取适量EDTA.Na2抗凝管血液样本，加入适量RNA保护剂后-80℃保存，以备后续总RNA的提取；(7)、实验处理组研究人员离心分离EDTA.Na2抗凝管血液样本中的血浆与血细胞，并对已分离的血液中血细胞部分进行基因组DNA的提取及定量；(8)、血液筛查组研究人员对已分离的EDTA.Na2抗凝管血液样本中血浆部分进行各类临床生化与免疫指标检测；同时对枸橼酸钠抗凝管血液样本进行血型鉴定和血常规检测；(9)、实验处理组研究人员对枸橼酸钠抗凝管中血液样本进行基因组DNA的提取及定量；(10)、建立贵州省17个世居少数民族遗传资源DNA样本库：将实验处理组研究人员抽提的样本基因组DNA核对编号后放入-80℃超低温冰箱保存。(11)、建立贵州省17个世居少数民族遗传资源血浆样本库：将EDTA.Na2抗凝管血液样本中的血浆部分核对编号后放入-80℃超低温冰箱保存。(12)、建立贵州省17个世居少数民族遗传资源总RNA备用库：将实验处理组研究人员加入了RNA保护剂的EDTA.Na2抗凝管血液样本置于-80℃超低温冰箱保存，以备后续研究需要时的总RNA提取，进行mRNA表达研究；(13)、建立贵州省17个世居少数民族遗传资源信息数据库：遗传资源原始书面资料编号装订后存档，信息资料存入电脑，用Access软件建立系统详实的信息数据库，同时刻录光盘保存，并由专职研究人员负责数据库的记录管理工作。(14)、制定“贵州17个世居少数民族遗传资源库构建指南”以及“贵州17个世居少数民族遗传资源库规范化管理和样本的保存、领用守则”：建立规范的从宣传动员，调查采样，临床体检，DNA提取等一套完整的遗传资源和标本收集的方法以及数据入库、实验室管理办法。2.根据权利要求1所述构建贵州省17个世居少数民族遗传资源库的方法，其特征在于：步骤(1)中工作人员分组分为登记组、体检组、采血组、误餐费发放及收表组、血液筛查组、实验处理组。采集对象居住所在地信息总表内容包括对采集对象居住所在地自然地理信息、经济地理信息、医学地理信息和社会文化信息的调查。3.根据权利要求1所述构建贵州省17个世居少数民族遗传资源库的方法，其特征在于：步骤(2)中调查问卷内容为人口学、遗传病学、流行病学内容，包括家系、现病史、过往病史的调查等；采集的头发及指甲分袋保存以备后用。4.根据权利要求1所述构建贵州省17个世居少数民族遗传资源库的方法，其特征在于：步骤(3)中遗传学体征信息收集项目包括：指距、坐高、骨盆宽、耳屏点高、头长、额最小宽、下颌角间宽、...

【专利技术属性】
技术研发人员：单可人，官志忠，李毅，吴昌学，何燕，
申请(专利权)人：贵阳医学院，
类型：发明
国别省市：52