本发明专利技术属于生物工程领域，提供了一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因，其碱基序列如SEQ?ID?NO：1所示，或者其碱基序列与SEQ?ID?NO：3中从357-1069位的核苷酸具有66％以上的同源性。本发明专利技术还提供了上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质。本发明专利技术还提供了上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质在制备用于诊断囊型包虫病的诊断试剂中的应用。本发明专利技术的重组蛋白可以用于囊型包虫病患者的免疫诊断，用该重组蛋白包板，用ELISA方法检测囊型包虫病、泡型包虫病、囊尾蚴病、其它寄生虫病患者以及健康人血清，获得的敏感性和特异性分别为80.46％和90.28％。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于生物工程领域，尤其涉及一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因及其用途。
技术介绍
：包虫病(Hydatid Disease)又称为棘球蚴病(Echinococcosis)，是棘球绦虫的中绦期幼虫寄生于人体和动物所引起的疾病，它是一种严重危害人畜健康的人兽共患寄生虫病。棘球绦虫种类较多，能感染人类的棘球属绦虫有4种：细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，Eg)、多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，Em)、少节棘球绦虫(Echinococcus oligarthrus)和伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli)。这4种棘球绦虫可引起不同类型的棘球蚴病。我国存在两种棘球蚴病，即细粒棘球蚴病(echinococcosis granulosa)，又称囊型包虫病(cystic echinococcosis，CE)和多房棘球蚴病(echinococcosis multilocularis)，又称泡型包虫病(alveolar echinococcosis，AE)。包虫病是一个重要的世界性公共卫生问题，广泛流行于欧、亚、非和地中海区域沿岸国家，以及澳洲和南美。在我国，包虫病主要流行于西部的农牧区，其中新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川西部最为严重，是世界上包虫病的高流行区。此外，吉林、陕西、云南、贵州和河南等省局部地区也有小范围流行，我国流行区受威胁人口约7000万。卫生部《全国人体重要寄生虫病现状调查》报告显示，内蒙古、吉林、河南、四川、贵州、云南、陕西、甘肃、青海、宁夏、新疆、西藏等12省(区)包虫病患病率为1.084％，据此推算，目前流行区约有病人38万人。由于B超诊断结果有一定的漏检率，实际患病病人数可能达60万人以上。血清学检查发现人群的感染率平均为11.98％，感染人数约为700万人。包虫病不但给患者带来极大的痛苦和沉重的经济负担，且发病的高峰为20-50岁的青壮年，给社会带来极大的压力，系西部农牧区群众因病致贫，因病返贫的重要原因。此外，由于包虫病在牛羊的感染率相当高(可达90％)，每年因包虫病也给我国畜产品造成的经济损失达数十亿。因此包虫病不但严重危害人民的生命健康，而且严重影响社会和经济发展、边疆稳定。在政府的重视下，包虫病的防治工作正在全面开展，为满足包虫病诊断和现场流行病学调查的需要，研制合适的包虫病检测方法是当务之急。囊型包虫病的诊断主要依据流行病学史、临床表现、影像学检查、病原学检查和免疫学检测。目前对囊型包虫病的诊断极大地依赖影像学方法，如X光检查、B型超声检查、CT扫描、核磁共振等物理诊断方法。虽然影像学技术已广泛应用，且能对包块损害的部位、大小和物理性状等做出较为明确的判断，但不能进行早期诊断(影像学诊断出的囊型包虫病人大都已不太适合药物治疗)，且不易与一些囊肿、脓肿或肿块相鉴别。由于影像检查设备携带不便，加之昂贵，且对操作人员的技术要求较高，在疾病诊断与流行病学调查中(特别在边远地区连电力供应都受到限制)的应用受到限制。免疫学检测方法具有敏感特异的特点，且可用于早期诊断，在各种疾病诊断中得-->到广泛应用，在囊型包虫病诊断中的应用也受到高度重视，国内外对其研究也不断深入，而研究的重点在于获得合适的抗原以提高诊断产品的性能。棘球蚴病免疫诊断抗原的研究经历了粗抗原、纯化抗原和重组抗原三个阶段。总的来说，粗抗原的诊断敏感性高，但是特异性较低；纯化抗原在粗抗原的基础上提高了诊断的特异性，但是敏感性有所降低；而重组抗原的特异性较高，且易于标准化，但目前公认具诊断价值的重组Ag5和AgB与其他寄生虫的相关分子具有共同表位，存在交叉反应，且高比例的囊型包虫病患者血清学反应为阴性，不能满足诊断的需要。因此，进一步开展对细粒棘球绦虫抗原的筛选研究，寻找具有更高敏感性和特异性的抗原组分，提高对囊型包虫病的诊断效率，是当前棘球蚴病免疫诊断研究的一项重要内容。构建cDNA文库并对其进行免疫筛选是获得新抗原基因的一个重要方法。将某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体重组，并将其引入到相应的宿主细胞中(一般为E.coli)繁殖和扩增，理论上此群体就包含有该物种的全部mRNA信息，称该生物基因组的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同，所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。cDNA文库的构建主要包括mRNA的获得、cDNA第一链的合成、cDNA第二链的合成、双链cDNA的克隆和包装。cDNA文库的筛选方法主要有：1.核酸杂交是最常用，最可靠的方法之一，可大规模地分析文库的克隆子。所用的探针主要有：1)同源探针：至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列。常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆。2)部分同源探针：探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列相关但不相同。常用于克隆家族基因。3)总cDNA探针：通过反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通过总的或分级分离得到的poly(A)+mRNA进行末端标记而获得cDNA探针。4)cDNA扣除探针：从第一种mRNA制备cDNA探针，连续多次与20倍过量的第二种mRNA杂交；回收未杂交的cDNA探针，再与100倍过量的第一种mRNA杂交，使得原mRNA中的一些特异序列得到高度富集。主要用于探测cDNA文库中与调节水平有所差别的mRNA克隆。5)合成寡核苷酸探针。2.特异性免疫学检测在cDNA表达文库中，目的基因的表达产物能与特异性抗体发生免疫学反应，通过酶学的方法加以检测3.cDNA克隆的同胞检测-->将cDNA文库分成若干组含有10-100个克隆子的易于处理的亚cDNA文库，对每组亚cDNA文库进行检测，当鉴定出阳性库后再不断将其分成更细的库进行检测，直到获得阳性单克隆。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因及其用途，所述的这种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因及其用途要解决现有技术中诊断细粒棘球蚴病的效果不佳，不能进行早期诊断的技术问题。本专利技术提供了一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因(本专利技术命名为H4)，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示，或者其碱基序列与SEQ ID NO：3中从357-1069位的核苷酸具有66％以上的同源性。本专利技术还提供了上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质。进一步的，上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或者其部分序列与SEQ ID NO：4所示的4-350位氨基酸序列相同。本专利技术还提供了一种表达载体，含有上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因。本专利技术还提供了一种融合蛋白，它含有上述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因所编码的蛋白。本专利技术还提供了一种宿主细胞，由上述的表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因，其碱基序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示，或者其碱基序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３中从３５７－１０６９位的核苷酸具有６６％以上的同源性。
【技术特征摘要】
1.一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示，或者其碱基序列与SEQ ID NO.3中从357-1069位的核苷酸具有66％以上的同源性。2.权利要求1所述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质。3.如权利要求2所述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或者其部分序列与SEQ ID NO：4所示的4-350位氨基酸序列相同。4.一种表达载体，其特征在于：含有权利要求1所述的一种细粒棘球绦虫钙网织蛋白基因。5.一种融合蛋白，其特征在于：含有权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱慧慧，高春花，汪俊云，杨玥涛，石锋，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：31
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