抗CD4抗体和抗融合肽的缀合物制造技术

本发明专利技术涉及缀合物，所述缀合物包含2个或多个抗融合肽和抗-CD4抗体(mAb?CD4)，特征是1-8个抗融合肽分别与所述抗-CD4抗体的重链和/或轻链的一个末端缀合，并涉及所述缀合物的药物用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD4抗体和抗融合肽的缀合物本专利技术涉及抗⑶4抗体和抗融合肽的缀合物，其中2至8个抗融合肽各自与抗⑶4 抗体的重链和/或轻链的一个末端缀合。抗融合肽的氨基酸水平可以不同、相似或相同。
技术介绍
人免疫缺陷病毒(HIV)对细胞的感染受感染细胞的膜与病毒膜融合过程的影响。 认为该过程的普遍方案如下病毒被膜糖蛋白复合体(gpl20/gp41)与位于感染细胞膜上 的细胞表面受体相互作用。gpl20结合例如⑶4受体和共受体(例如，CCR-5或CXCR-4) 的组合导致gpl20/gp41复合体构象的改变。该构象改变的结果是gp41蛋白能够插入到 靶细胞的膜内。所述插入是膜融合过程的开始。由于天然存在的多态性，已知gp41蛋白 的氨基酸序列在不同HIV株之间不同。但是可以识别相同的结构域结构，更精确的，融合 信号、两个七残基重复序列结构域(HR1、HR2)和跨膜结构域(N-至C-端方向)。提示， 融合(或致融(fusogenic))结构域参与了细胞膜的被插入和分解。HR区域由多个包 含7个氨基酸(“七残基(heptad))序列段(stretch)构成(参见例如，Shu, W.等人， Biochemistry38 (1999) 5378-5385)。除了七残基外，还存在一个或多个亮氨酸拉链-样基 序。上述组成是gp41蛋白卷曲螺旋结构形成以及源自这些结构域的肽的原因。卷曲螺旋 总体来说是由两个或多个相互作用的螺旋构成的寡聚体。具有从gp41的HRl或HR2结构 域推测的氨基酸序列的肽是有效的HIV摄入细胞内的体外和体内抑制剂(例如这样的肽， 参见例如 US 5，464，933、US 5，656，480、US 6，258，782、US 6，348，568 或 US 6，656，906)。 例如，T20(还已知为 DP178，Fuzeon , HR2 肽)、T651 (US 6，479，055)和 T2635 (W0 2004/029074)是HIV感染非常有效的抑制剂。已经尝试使用例如氨基酸置换或化学交联来 增加 HR2 衍生肽的功效(Sia，S. K.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99 (2002) 14664-14669 ； Otaka, Α.等人，Angew. Chem. Int. Ed. 41 (2002) 2937—2940)。肽与一些分子的缀合可以改变其药物动力学的性质，例如，可以增加此类肽缀 合物的血清半衰期。例如，报道了以下的缀合，聚乙二醇(PEG)和白介素_6(EP 0 442 724)，PEG和红细胞生成素(W0 01/02017)，包含内皮抑制素和免疫球蛋白的嵌合分子 (US 2005/008649)，基于融合蛋白的分泌抗体(US 2002/147311)，包含白蛋白的融合多肽 (US 2005/0100991 ；人血清白蛋白 US 5，876，969)，PEG 化多肽(US 2005/0114037)以及 干扰素融合体。现有技术还描述了包含多花白树毒蛋白和抗体(W0 94/26910)的免疫毒 素，修饰的转铁蛋白-抗体融合蛋白(US 2003/0226155)，抗体-细胞因子融合蛋白(US 2003/0049227)，和由具有免疫刺激性、膜转运或嗜同性活性的肽和抗体组成的融合蛋白 (US 2003/0103984)。在WO 2004/085505中，报道了由生物学活性化合物与大分子化学连 接组成的长效生物学活性缀合物。根据表面糖蛋白⑶4和⑶8的存在，将T-淋巴细胞分成CD4+-和OT8+-T-细胞。 CD4表面糖蛋白的络合作用可以起始例如，T-细胞增殖或淋巴因子的释放。CD4是55kDa 的膜糖蛋白，通过与抗原呈递细胞上的MHC II类抗原相互作用，在起始T细胞应答中发 挥中心作用，所述抗原呈递细胞将肽展示给T细胞上的抗原特异性受体。用ρ56ΙΛ—— T淋巴细胞活化涉及的酪氨酸激酶，通过在胞质结构域中的基序，将效应传递至细胞质(Brady, R. L.禾口 Barclay，Α. N. ，Curr. Top. Microbiol. Immunol. 205 (1996) 1-18 ；Rudd, C. Ε.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85(1988)5190-5194 ；ffeilette, Α.等 A, Eur. J. Immunol. 20 (1990) 1397-1400)。CD4表面受体是HI-病毒进入细胞必需的靶。在HIV感 染后，CD4+-淋巴细胞成为无功能的细胞。在US 2006/0121480中，报道了用于预防辅助T细胞和其他靶细胞被HIV感染的 方法，所述方法是通过将靶细胞暴露在至少一种附着抑制剂和至少一种融合抑制剂的协同 组合下。在WO 2004/103312中，报道了用作HIV融合抑制剂的肽。在WO 2001/43779中，报 道了抗⑶4分子和HIV-I融合抑制肽的缀合物。在WO 2004/108885中，报道了具有抗HIV 药物的FC嵌合蛋白。专利技术概述专利技术包括这样的缀合物，所述缀合物包含两个或多个抗融合肽和抗-⑶4抗体 (mAb CD4)，特征是2至8个抗融合肽分别与所述抗CD4抗体的重链和/或轻链的一个末端 缀合(仅如果当mAb⑶4包含8个末端时，即包含例如两条重链和两条轻链，才可能每个 mAb⑶4具有8个抗融合肽的数量；如果mAb⑶4包含较少数量的C-和N-端，例如scFv， 缀合物中最大可能的抗融合肽的相应数量也降低，即降低至少于8)。在一个实施方案中，抗-CD4抗体链的羧基端氨基酸与抗融合肽的氨基端氨基酸 缀合，或者抗融合肽的羧基端氨基酸与抗体链的氨基端氨基酸缀合，优选的通过具有或不 具有中间接头的肽键。在另一个实施方案中，缀合物的特征是如下通式 mAb CD4-[接头]m_ [抗融合肽]n其中，对于每种抗融合肽，m是独立的为0( S卩，在mAb⑶4和抗融合肽之间为肽键) 或者1 (即，在mAb⑶4和抗融合肽之间为接头)，n是从2至8的整数，在一个实施方案中， 是从2至8的偶数，优选的2或4。在一个实施方案中，mAb CD4的重链和/或轻链与抗融合肽的优选缀合物(“链缀 合物”)选自(从N-端至C-端方向)(1)[抗融合肽]-[接头]m_[重链]O)[重链]-[接头]m_ [抗融合肽](3)[抗融合肽]-[接头]m_ [重链]-[抗融合肽](4)[抗融合肽]-[接头]m_ [轻链](5)[轻链]-[接头]m_ [抗融合肽](6)[抗融合肽]-[接头]m_ [轻链]-[抗融合肽](7)[抗融合肽]-[接头]m_ [重链]-[接头]m_ [抗融合肽] (8)[抗融合肽]-[接头]m_ [轻链]-[接头]m_ [抗融合肽]其中，所述链缀合物(之中或之间)的接头可以是相同或不同的，其中m是整数1 或0，在所述链缀合物(之中或之间)，m可以是独立的相同或不同的。肽或mAb CD4链的 左侧意指N-端，右侧意指C-端。因此，在(1)中，抗融合肽的C-端通过肽键或接头与mAb ⑶4的重链N-端相连。在另一个实施方案中，链缀合物被装配成包含mAb CD4(例如，由两条轻链和两条 重链组成，包括恒定的Fc结本文档来自技高网...

【技术保护点】
缀合物，其包含２个或多个抗融合肽，以及抗－ＣＤ４抗体，特征是２－８个抗融合肽各自与所述抗－ＣＤ４抗体的重链和／或轻链的一个末端缀合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2007.07.20 EP 07014335.91.缀合物，其包含2个或多个抗融合肽，以及抗-CD4抗体，特征是2-8个抗融合肽各自 与所述抗-CD4抗体的重链和/或轻链的一个末端缀合。2.根据权利要求1的缀合物，特征是抗-CD4抗体链的羧基端氨基酸与抗融合肽的氨基 端氨基酸缀合，或者抗融合肽的羧基端氨基酸与抗体链的氨基端氨基酸缀合，优选的通过 具有或不具有中间接头的肽键。3.根据权利要求1的缀合物，特征是缀合物具有通式 mAb CD4-[接头]m_[抗融合肽]n其中，对于每种抗融合肽而言，m是独立的为0或者1， 其中，η是从2至8的整数。4.根据权利要求3的缀合物，特征是η是2或4。5.根据权利要求1的缀合物，特征是缀合物包含mAbCD4的重链和/或轻链以及抗融 合肽(“链缀合物”)，选自(从N-端至C-端方向)(1)[抗融合肽]-[接头]m_[重链](2)[重链]-[接头]m_[抗融合肽](3)[抗融合肽]-[接头]m_[重链]-[抗融合肽](4)[抗融合肽]-[接头]m_[轻链](5)[轻链]-[接头]m_[抗融合肽](6)[抗融合肽]-[接头]m_[轻链]-[抗融合肽](7)[抗融合肽]-[接头]m_[重链]_[接头]m_[抗融合肽](8)[抗融合肽]-[接头]m_[轻链]_[接头]m_[抗融合肽]其中，在所述链缀合物中，接头可以是相同或不同的，其中m是整数1或0，在所述链缀 合物中，m可以是独立的相同或不同的。6.根据权利要求5的缀合物，其包括 2x[mAb CD4轻链]和2x链缀合物(2)， 2x[mAb CD4轻链]和2x链缀合物(3)， 2x [mAb CD4重链]和h链缀合物(4)，或 2x[mAb CD4轻链]和2x链缀合物(7)。7.根据权利要求1或4的缀合物，特征是所述可变的重链结构域由免疫球蛋白构架和 CDR3区组成，所述CDR3区选自SEQ ID NO :29、30或31的重链CDR3序列。。8.根据权利要求7的缀合物，特征是缀合物包含可变的重链结构域，所述结构域由免 疫球蛋白构架和CDR3区、CDR2区和CDRl区组成，所述CDR3区选自SEQ ID N0:29、30或31 的CDR3序列，所述CDR2区选自SEQ ID NO 26、27或28的CDR2序列，所述CDRl区选自SEQ IDNO 23、24 或 25 的 CDRl 序列。9.根据权利要求1或4的缀合物，特征是其包含SEQID NO 8或10的重链可变结构域。10.根据权利要求1或4的缀合物，特征是其包含可变的轻链结构域，所述结构域由免 疫球蛋白构架和⑶Rl区、⑶R2区和⑶R3区组成，所述⑶Rl区选自SEQ ID NO 13、14、15 或 16，所述 CDR2 区选自 SEQ IDNO 17、18 或 19，所述 CDR3 区选自 SEQ ID N0:20、21 或 22。11.根据权利要求1或4的缀合物，特征是其包含SEQID NO 7的⑶R作为重链⑶R，和 SEQ ID NO 1 的 CDR 作为轻链 CDR，SEQ IDNO 8 的 CDR 作为重链 CDR，和 SEQ ID NO 2 的⑶R作为轻链⑶R，SEQ ID NO 10的CDR作为重链⑶R，和SEQ ID NO 4的CDR作为轻链 CDR，SEQ ID NO 11 的 CDR 作为重链 CDR JPSEQ ID NO :5 的 CDR 作为轻链 CDR，或者 SEQ ID NO 12的CDR作为重链CDR,和SEQ IDNO 6的CDR作为轻链CDR012.根据权利要求1或4的缀合物，特征是包括可变的重链和轻链结构域，独立的选自a)氨基酸序列SEQID NO 7定义的重链可变结构域，和氨基酸序列SEQ ID NO :1定义 的轻链可变结构域；b)氨基酸序列SEQID NO :8定义的重链可变结构域，和氨基酸序列SEQ ID NO :2定义 的轻链可变结构域；c)氨基酸序列SEQID NO ...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·费舍尔，E·科佩茨基，S·里斯，S·桑库拉特里，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH