一株高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株制造技术

一株高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株，它涉及一株门多萨假单胞菌菌株。本发明专利技术提供了一株门多萨假单胞菌菌株，可高效降解氟磺胺草醚，为二苯醚类除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基础。本发明专利技术高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株为门多萨假单胞菌FB8，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC?No.4409。本发明专利技术门多萨假单胞菌FB8能够高效降解氟磺胺草醚，对含有氟磺胺草醚残留的土壤具有修复作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株门多萨假单胞菌菌株。
技术介绍
氟磺胺草醚(通用名称：fomesafen，商品名称：虎威)，是由英国捷利康公司开发的二苯醚类触杀除草剂，用于大豆、果树、橡胶园等作物地阔叶杂草的防除，由于其良好的除草效果而得到广泛应用。氟磺胺草醚在全国使用量及使用面积较大，其在大豆苗前、苗后使用可很快使杂草被叶部吸收，破坏其的光合作用，致杂草迅速枯萎而死。但这种除草剂在土壤中会持续作用很长一段时间，残存于土壤中的药物因其较大的植物毒性会对轮作产生破坏作用。微生物降解方法是土壤中二苯醚类除草剂的主要分解方式。目前氟磺胺草醚的降解也有所研究，GST(谷胱甘肽转移酶)介导的巯基共轭对氟磺胺草醚的去毒作用在黄豆的应用中已非常成熟。但是，有关氟磺胺草醚的微生物降解，目前很少有资料报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一株门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)菌株，可高效降解氟磺胺草醚，为二苯醚类除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基础。本专利技术高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株为门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC No.4409；本专利技术门多萨假单胞菌FB8为革兰氏阴性菌，短杆状，细胞大小为(0.59μm～0.62μm)×(1.15μm～1.66μm)，无芽孢、有鞭毛(如图1和图2所示)，有菌膜；在LB固体培养基上培养，菌落呈圆形，颜色为乳白色。本专利技术的门多萨假单胞菌FB8伏普试验呈阳性，淀粉水解试验呈阴性，明胶液化试验呈阴性，七叶灵水解试验呈阴性，硫化氢产生试验呈阴性，脲酶试验呈阴性，氧化酶试验呈阳性，甲基红试验呈阴性。本专利技术的门多萨假单胞菌FB8能够利用乳糖为碳源，不能利用水杨苷、山梨醇和蔗糖为碳源；在含有氨苄霉素、阿莫斯林、链霉素和头孢哌酮钠的环境下可以生长，在含有四环素、卡那霉素、状观霉素、氯霉素、头孢曲松钠和头孢噻肟钠的环境下不能生长。本专利技术的门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)通过16S rDNA基因 序列比对分析，与假单胞菌属(Pseudomonas)的16S rDNA序列的亲缘关系最为接近，保守区相似性为100％，通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定门多萨假单胞菌FB8属于假单胞菌属(Pseudomonas)，为门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)菌株。本专利技术的门多萨假单胞菌FB8可在添加了氟磺胺草醚的LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基和无机盐基础培养基上生长，其中最适培养基为添加了氟磺胺草醚的LB培养基，培-->养基中氟磺胺草醚的最佳终浓度为500mg/L。门多萨假单胞菌FB8的最适生长温度为37℃，最适合生长环境的pH为6～8。本专利技术门多萨假单胞菌FB8能够高效降解氟磺胺草醚，门多萨假单胞菌FB8在含500mg/L的氟磺胺草醚液体无机盐培养基中，反应96h，对氟磺胺草醚的降解率达到86.75％；本专利技术门多萨假单胞菌FB8对含有氟磺胺草醚残留的土壤具有修复作用。本专利技术的门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)属于假单胞菌属(Pseudomonas)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC No.4409。附图说明图1为本专利技术门多萨假单胞菌FB8的扫描电镜照片；图2为门多萨假单胞菌FB8的透射电镜照片；图3为通过门多萨假单胞菌FB8和相近菌株的16S rDNA基因序列进行同源性比对构建的系统发育树图。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株为门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC No.4409。本实施方式门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)为革兰氏阴性菌，短杆状，细胞大小为(0.59μm～0.62μm)×(1.15μm～1.66μm)，无芽孢、有鞭毛，有菌膜；在LB培养基上培养，菌落呈圆形，颜色为乳白色。参照《伯杰细菌鉴定手册》第八版和《常见细菌系统鉴定手册》对门多萨假单胞菌 FB8(Pseudomonas mendocina FB8)进行生理生化鉴定：门多萨假单胞菌FB8伏普试验呈阳性，淀粉水解试验呈阴性，明胶液化试验呈阴性，七叶灵水解试验呈阴性，硫化氢产生试验呈阴性，脲酶试验呈阴性，氧化酶试验呈阳性，甲基红试验呈阴性。本实施方式门多萨假单胞菌FB8可在添加了氟磺胺草醚的LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基和无机盐基础培养基上生长，其中最适培养基为添加了氟磺胺草醚的LB培养基，培养基中氟磺胺草醚的最佳终浓度为500mg/L。其中无机盐基础培养基(1000mL)由1.0g的NaCl、1.0g的NH4NO3、1.5g的K2HPO4、0.5g的KH2PO4和0.1g、MgSO4·7H2O和余量的蒸馏水组成。无机盐基础培养基加热充分溶解后与121℃高压灭菌15min，冷却至50～60℃后向其中加入氟磺胺草醚至终浓度为500mg/L。本实施方式门多萨假单胞菌FB8的最适生长温度为37℃，最适合生长环境的pH为6～8。具体实施方式二：本实施方式门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB8)-->由中国黑龙江省讷河市受除草剂污染的土壤中筛选得到。筛选按以下步骤进行：取5g黑龙江省讷河市受除草剂污染的土壤于三角瓶中，加入50mL生理盐水，振荡30s，用8层纱布过滤，取过1mL滤液加入到含100mg/L氟磺胺草醚的无机盐基础培养基中，于30℃、180r/min下培养，每隔7天提高氟磺胺草醚浓度100mg/L，直至氟磺胺草醚的浓度为500mg/L，得富集培养液；取富集培养液100μL均匀涂布于氟磺胺草醚浓度为500mg/L的固体无机盐培养基上培养，30℃培养24h后挑取生长较好的菌落进行纯化，即可得到门多萨假单胞菌FB8。对筛选得到的门多萨假单胞菌FB8进行分子鉴定，按以下步骤进行：用热破壁法提取菌株的总DNA，采用细菌的16S rDNA通用引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。然后利用胶回收试剂盒(购自于大连宝生物工程有限公司)回收纯化PCR产物，之后进行克隆、转化，筛选阳性克隆子菌落，经扩大培养后委托上海生工生物技术有限公司测序。门多萨假单胞菌FB8的16SrDNA序列长度为1511bp，其序列提交至GenBank获得的登录号为HQ701687，测序结果与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，然后用软件DNAMAN的Observed Diverge本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一株高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株，其特征在于高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株为门多萨假单胞菌ＦＢ８（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｍｅｎｄｏｃｉｎａ　ＦＢ８），保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路１号院３号，保藏日期为２０１０年１２月０６日，保藏号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．４４０９。

【技术特征摘要】
1.一株高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株，其特征在于高效降解氟磺胺草醚的门多萨假单胞菌菌株为门多萨假单胞菌FB8(Pseudomonas mendocina FB...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨峰山，刘春光，刘亮，于慧颖，刘丽萍，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93