一种土荆皮乙酸的提纯方法技术

一种土荆皮乙酸的提纯方法，其特征是通过醇水溶液提取、大孔吸附树脂柱分离、树脂脱色、溶剂结晶和重结晶制得土荆皮乙酸。该方法分离快速、脱色效果好、产品稳定，是一种可行、高效、具有工业化生产前景的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于制药领域，具体涉及。
技术介绍
土荆皮(Pesudolaricis cortex)系松科植物金钱松(Pseudolarix amabilis (Nelson) Rehd.)的干燥根皮或近根树皮。具有杀虫、疗癣、止痒的功效，广泛用于疥癣瘙痒。金钱松的化学成分主要有二萜类、三萜类、木脂类、倍半萜类等化合物。土荆皮的抗真菌有效成分为土荆皮酸，为一混合物，以土荆皮乙酸含量最高。土荆皮乙酸(pseudolaric acid B, PAB)，分子式是C23H28O8,是土荆皮中一种二萜类化合物。现代药理研究表明，土荆皮乙酸具有抗肿瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌、可激活过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)等作用。宗志红等发现其具有明显的细胞毒作用， 通过PII/AKT途径激活Caspase-3诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖。王伟成等研究发现土荆皮乙酸对大鼠、仓鼠、兔及狗，经ig，im, sc给药都具有明显的抗生育作用，通过给妊娠大鼠ig 土荆皮乙酸，应用氢清除率技术，测得子宫肌层及内膜层血流量皆较正常对照组为低，证明PAB使早孕大鼠子宫血流量减少是造成胚胎死亡的重要原因。谭文福等的实验表明PAB通过抑制VEGF促内皮细胞生存信号转导通路中的KDR、AKT及ERK的磷酸化逆转 VEGF促内皮细胞生存、诱导内皮细胞凋亡为PAB抑制血管生成的作用机制之一。PAB具有广泛的抗肿瘤活性，不仅阻断VEGF途径，还可以促进HIF的降解，这就抑制了与肿瘤血管生成相关的关键途径。PAB也可以通过PPAR配体途径抑制血管生成，同时PAB还具有促进肿瘤细胞凋亡，抑制细胞骨架及抑制端粒酶活性等药理作用，因此，PAB可以避免单一抑制血管药物的不足。天然产物中寻找新的抗癌有效成分是目前新药开发的主要途径，PAB作为一种对活体无明显毒性的天然产物，对其药理机制进行深入研究，有望促进PAB成为新型的抗肿瘤药物。目前主要采用乙醇或苯对土荆皮乙酸进行粗提取，尚无高含量土荆皮乙酸的提取纯化方面的研究报道，因此提供一种可行、易操作、高纯度、制备量大的提取纯化方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该方法操作简单、可工业化生产。本专利技术的的技术方案包括以下步骤将土荆皮作为原料，用含水醇溶液提取，收集提取液，膜浓缩后加水分散，上大孔吸附树脂柱分离，先用去离子水洗脱至无色，再以醇梯度洗脱，洗脱液再上脱色树脂脱色， 下注液再经膜浓缩，浓缩液用二氯甲烷结晶，得到土荆皮乙酸粗晶，再用二氯甲烷-乙醚重结晶制得高纯度土荆皮乙酸晶体。所述含水醇溶液为体积百分比为80-95%的甲醇或乙醇水溶液，提取2-3次，料液比为1 4-8。所述膜浓缩超滤膜为截留分子量3000-7000的中空纤维超滤膜，纳滤膜为截留分子量200-300的中空纤维纳滤膜。所述大孔吸附树脂是ADS-15或ADS-F8。 所述洗脱用乙醇体积浓度为30 % -80 %。所述脱色树脂为D941、JT-004大孔吸附树脂。本专利技术的积极效果在于1、本专利技术采用甲醇或乙醇作为提取溶剂从土荆皮中提取土荆皮乙酸，溶解性能好，毒性小；2、本专利技术充分利用大孔吸附树脂对土荆皮乙酸的吸附力与对多糖、挥发油等杂质的吸附力的不同，真正达到土荆皮乙酸与杂质的高效分离；3、膜分离浓缩在常温下进行，减少了土荆皮乙酸的损失；4、本专利技术组合采用亲水性有机溶剂结晶和重结晶，获得高纯度土荆皮乙酸。具体实施例方式实施例1 将土荆皮粉碎，取2kg投入试验用超声提取罐中，用16L80%乙醇溶液超声提取1 小时，抽滤提取液，再依次加入10L、6L80%乙醇提取2次，每次提取1小时，合并三次提取液，滤液加入截留分子量4000的中空纤维超滤膜系统超滤，透过液再加入截留分子量200 的中空纤维纳滤膜系统纳滤，得浓缩液；浓缩液加水分散，上ADS-15大孔吸附树脂柱吸附， 吸附结束后用去离子水洗脱杂质，再用30^^60^^80%乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液经D941脱色树脂柱，下注液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤， 收集浓缩液；浓缩液用二氯甲烷溶解，结晶，粗晶再用二氯甲烷-乙醚重结晶2次，低温干燥得到3. 44g 土荆皮乙酸，含量95. 4%。实施例2:将土荆皮粉碎，取5kg投入试验用超声提取罐中，用35L85 %乙醇溶液超声提取2 小时，抽滤提取液，再依次加入25L、20L85%乙醇提取2次，每次提取0. 5小时，合并三次提取液，滤液加入截留分子量7000的中空纤维超滤膜系统超滤，透过液再加入截留分子量 200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，得浓缩液；浓缩液加水分散，上ADS-F8大孔吸附树脂柱吸附，吸附结束后用去离子水洗脱杂质，再用30^^60^^80%乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液经D941脱色树脂柱，下注液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，收集浓缩液；浓缩液用二氯甲烷溶解，结晶，粗晶再用二氯甲烷-乙醚重结晶3次，低温干燥得到8. 3g 土荆皮乙酸，含量96. 5%。实施例3:将土荆皮粉碎，取IOkg投入试验用提取罐中，用60L80%甲醇溶液回流提取1.5 小时，抽滤提取液，再加入40L80%甲醇提取1小时，合并两次提取液，滤液加入截留分子量 5000的中空纤维超滤膜系统超滤，透过液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，得浓缩液；浓缩液加水分散上ADS-15大孔吸附树脂柱吸附，吸附结束后用去离子水洗脱杂质，再用30^^60^^80%乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液经JT-004脱色树脂柱，下注液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，收集浓缩液；浓缩液用二氯甲烷溶解，结晶，粗晶再用二氯甲烷-乙醚重结晶2次，低温干燥得到17. Ig 土荆皮乙酸，含量95.8%。实施例4 将土荆皮粉碎，取IOkg投入试验用超声提取罐中，用80L95 %乙醇溶液超声提取1 小时，抽滤提取液，再加入50L95%乙醇提取1小时，合并两次提取液，滤液加入截留分子量 3000的中空纤维超滤膜系统超滤，透过液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，得浓缩液；浓缩液加水分散，上ADS-F8大孔吸附树脂柱吸附，吸附结束后用去离子水洗脱杂质，再用30%、60%、80%乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液经D941脱色树脂柱，下注液再加入截留分子量200的中空纤维纳滤膜系统纳滤，收集浓缩液；浓缩液用二氯甲烷溶解，结晶，粗晶再用二氯甲烷-乙醚重结晶3次，低温干燥得到16. 4g 土荆皮乙酸， 含量97. 2%。实施例5 将土荆皮粉碎，取20kg投入超声提取罐中，用150L90%甲醇溶液超声提取1. 5小时，抽滤提取液，再依次加入110L、85L90%甲醇提取2次，每次提取1小时，合并三次提取液，滤液加入截留分子量6000的中空纤维超滤膜系统超滤，透过液再加入截留分子量300 的中空纤维纳滤膜系统纳滤，得浓缩液；浓缩液加水分散，上ADS-15大孔吸附树脂柱吸附， 吸附结束后用去离子水洗脱杂质，再用30^^60^^80%乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液经JT-004脱色树脂柱，下注液再加入截留分子量300的中空纤维纳滤膜系统纳滤，收集浓缩液；浓缩液用二氯甲烷溶解，结本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种土荆皮乙酸的提纯方法，其特征在于：它是将土荆皮作为原料，用含水醇溶液提取，收集提取液，膜浓缩后加水分散，上大孔吸附树脂柱分离，先用去离子水洗脱至无色，再以醇梯度洗脱，洗脱液上脱色树脂脱色，下注液再经膜浓缩，浓缩液用二氯甲烷结晶，得到土荆皮乙酸粗晶，用二氯甲烷－乙醚重结晶制得高纯度土荆皮乙酸晶体。

【技术特征摘要】
1.一种土荆皮乙酸的提纯方法，其特征在于它是将土荆皮作为原料，用含水醇溶液提取，收集提取液，膜浓缩后加水分散，上大孔吸附树脂柱分离，先用去离子水洗脱至无色， 再以醇梯度洗脱，洗脱液上脱色树脂脱色，下注液再经膜浓缩，浓缩液用二氯甲烷结晶，得到土荆皮乙酸粗晶，用二氯甲烷-乙醚重结晶制得高纯度土荆皮乙酸晶体。2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述含水醇溶液为体积百分比为 80-95%的甲醇或乙醇水溶液，提取2-3次，料液比为1 4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，郭琴，杨成东，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：84