检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂及其应用。该显色剂为分别含有重量比例为0.1％～10％的对二甲氨基苯甲醛和0.1％～2％的盐酸或硫酸等无机酸的乙醇溶液。检测时，以沸点≤100℃的三聚氰胺有机良溶剂充分溶解的含有三聚氰胺的被测样品试液，在硅胶薄层色谱板上点样，以常规方式经展开剂展开后，挥除展开剂，以该显色剂显色后，在紫外光或自然光下检视薄层色谱板上的显色斑点，由点样量计算被测样品中的三聚氰胺含量是否超过限量。该方法的三聚氰胺斑点清晰，检测灵敏度高，三聚氰胺的最低检出量可达到0.5mg·kg-1，适用于对包括乳制品在内的人和/或动物食品中三聚氰胺含量的检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂及其在检测三聚氰胺残留量中的应用。
技术介绍
三聚氰胺(Melamine)是一种三嗪类含氮杂环化合物，简称三胺，又称作蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺等，是一种白色粉末，可溶解于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶、乙醇等有机溶剂及水，不溶于乙醚、苯和四氯化碳等。三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工原料和重要中间体，但并非是人或动物的食品中允许使用的添加剂成分。近年来，在包括乳制品在内的多种食品及畜禽饲料等人和/或动物的食用品中，不断出现了以添加三聚氰胺冒充蛋白质的事件，危害了人和/或动物的身体健康，引发了食品安全性的社会公共问题。为防止食品中存在的三聚氰胺，国家标准《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》 (GB/T 22388-2008)中提出了采用高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MQ和气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MQ等方法，检查原料乳与乳制品中的三聚氰胺。这些方法专属性强，灵敏度高，但所用仪器设备昂贵，对实验人员的专业技术要求高，不适合对大量样品的筛查，难以在基层检测机构中推广使用。中国专利公开号CN101458M0A中提出了一种薄层色谱法(TLC)检测三聚氰胺残留量的方法，以正丁醇-乙酸乙酯-水为硅胶薄层板的展开剂，以二苯卡巴腙和氯化汞的乙醇溶液为显色剂，检测食品中的三聚氰胺残留量。但该方法未提供其检测限。Melanie Broszat等以mister，s blue和淀粉碘试剂为显色剂检查牛奶中的三聚氰胺(A new method for quantification of melamine in milk by absorption diode-array thin-layer chromatography. Journal of Planar Chromatography, 2008, 21 (6) :469), ^ ^ illj PS 30mg · L—1，灵敏度不够高，不能满足食品中微量三聚氰胺的检测要求。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术首先提供一种用于检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法的显色剂，本专利技术进一步还提出了以该显色剂为基础的检测三聚氰胺残留量的薄层色谱方法， 以及该薄层色谱方法在检测人或动物食品/饲料中三聚氰胺含量中的应用。本专利技术所说的检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂，为分别含有重量比例为 0. 10%的对二甲氨基苯甲醛(PDAB)JPO. 2%无机酸的乙醇溶液。其中所说的无机酸为常用的浓盐酸(36. 5w% )或浓硫酸(98w% )，也可以使用以该浓盐酸或浓度硫酸作为所说显色剂乙醇溶液中无机酸含量比例计算基准的其它浓度的盐酸或硫酸。上述显色剂的优选形式是显色剂中的对二甲氨基苯甲醛的重量含量为0. 3% ；更好的是对二甲氨基苯甲醛的重量含量为 3%。在此基础上，进一步的优选是所说显色剂中的无机酸采用重量含量为0.2% 0. 5%的盐酸，更好的是采用重量含量为0. 3%的盐酸。以采用上述显色剂的薄层色谱法进行三聚氰胺残留量的检测时，可先以沸点 ^ 100°c的三聚氰胺有机良溶剂充分溶解的含有三聚氰胺的被测样品试液，在硅胶薄层色谱板上点样，经展开剂展开，然后挥除展开剂，再以上述的显色剂显色后，即可在紫外光或自然光下检视薄层色谱板上的显色斑点，由点样量计算被测样品中的三聚氰胺含量是否超过限量。所说的展开剂，可以采用包括上述中国专利公开号CN101458M0A等目前已有报道和/或使用形式的展开剂。所说制备被测样品试液时的三聚氰胺有机良溶剂，虽然可包括前述的诸多溶剂种类，但在本专利技术方法中宜选择其中既有利于三聚氰胺的溶解，又沸点较低(< 100°c )而容易挥发的三聚氰胺有机良溶剂，以便试液溶剂在薄层色谱板上点样后能较快或迅速的挥发。因此，较好的溶剂选择可以为乙醇、甲醇、乙腈、丙酮，或含水重量比分别< 20%的含水乙醇、含水甲醇、含水乙腈或含水丙酮等均可以使用。其中更为优选的是毒性最小的乙醇或浓度>80%的含水乙醇。虽然三聚氰胺在水中易溶，但因水份在薄层点样时不易挥除，在保证溶解的前提下，宜尽量减少溶剂中的含水比例。但如果三聚氰胺的浓度较大，甚至用80% 乙醇等尚不能完全溶解时，也可适当增加溶剂中水的比例，或先以少量热水将三聚氰胺完全溶解后，再加入乙腈、乙醇、丙酮等有机溶剂。点样后的薄层色谱板一般可在室温下饱和并展开。试验显示，展开时的温度变化一般对展开效果并无显著影响。根据三聚氰胺的化学性质，对经展开剂展开后的薄层色谱板，本专利技术人分别考察和试验了包括对二甲氨基苯甲醛(PDAB)试液、碘化铋钾试液、稀铁氰化钾试液、10%磷钼酸乙醇溶液、茚三酮试液、三氯化铁试液等不同显色剂的显色效果。结果显示，PDAB可以使三聚氰胺斑点在紫外光照射下显示出明显的蓝色荧光，且灵敏度高，显色效果理想。一般情况下，显色剂中对二甲氨基苯甲醛的重量含量在0. 10%范围内都是允许的；更好的含量选择范围是1^-3 ^进一步的试验显示，酸性的显色剂对于显色是有利的。所说的酸性可以选择加入常用的盐酸、硫酸等无机酸方式实现，一般的含量比例可为0. 2w%，更好的含量范围是 0.5w%。最佳范围是的盐酸。试验显示，使用不同种类酸酸化的显色剂，薄层色谱板上三聚氰胺斑点可以分别在不同的显色检视环境下显示出理想的显色效果。例如，采用盐酸酸化的显色剂，在薄层色谱板上的三聚氰胺斑点在紫外光下可以高灵敏地显示出蓝色的荧光斑点(试验条件下的检测限为0.5 μ g)；使用硫酸酸化时，则其在紫外光下的显色灵敏度较低，但在自然光下可显示出黄色的斑点(试验条件下的检测限为 2 μ g)。由于在紫外光下能以高灵敏的方式显示蓝色的荧光，并且在盐酸浓度为0. 2% 0. 5%范围内的荧光都较强，且强度相当，因此可优选以浓度为0. 3%的盐酸进行酸化，并在紫外光灯下进行显色观察。所说的用于观察检视三聚氰胺蓝色荧光斑点的紫外光，一般可以选择通常使用的 365nm或254nm波长的紫外光灯。试验表明，三聚氰胺斑点在365nm下的荧光强度可强于在254nm波长下，故检测波长可优选为365nm的紫外光灯。目前常用的薄层检测紫外仪通常都已配置有254nm和365nm两种波长的紫外灯，因此可根据实际需要选择在其中的任一波长下进行观察检视。进一步的试验显示，对上述薄层色谱板上三聚氰胺斑点的显色，特别宜使经展开5剂展开后的薄层色谱板在50°C 120°C的加热条件下，充分挥除展开剂(除去使用含氨成分展开剂时残留的氨水)，以减少和/或避免其产生背景干扰。以所说加热方式挥除薄层色谱板的展开剂后，立即趁热用所说的显色剂润湿，可有利于提高显色的灵敏度。例如，经展开剂展开后的薄层色谱板，在50°C 120°C条件下加热IOmin挥尽展开剂后，趁热立即以上述方式用盐酸酸性显色剂润湿后显色，均出现蓝色荧光斑点，温度降低，检测的灵敏度会相应降低。例如当温度降至ire时，检测限会相应降低为20 μ g0用所说的显色剂对薄层色谱板的润湿方式，可以选择但不限于包括常用的浸渍、 喷雾等方式实现。试验显示，薄层色谱板用显色剂的润湿程度和/均勻程度，本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂，为分别含有重量比例为０．１％～１０％的对二甲氨基苯甲醛和０．１％～２％无机酸的乙醇溶液，所说的无机酸为盐酸或硫酸。
【技术特征摘要】
1.检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂，为分别含有重量比例为0. 10%的对二甲氨基苯甲醛和0. 2%无机酸的乙醇溶液，所说的无机酸为盐酸或硫酸。2.如权利要求1所述的显色剂，其特征是所说显色剂中的对二甲氨基苯甲醛的重量含量为0. 3%。3.如权利要求2所述的显色剂，其特征是所说显色剂中的对二甲氨基苯甲醛的重量含量为 3%。4.如权利要求1至3之一所述的显色剂，其特征是所说显色剂中的无机酸是重量含量为0.2% 0.5%的盐酸。5.如权利要求4所述的显色剂，其特征是所说显色剂中的无机酸是重量含量为0.3% 的盐酸。6.以权利要求1至5的显色剂检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法，其特征是以沸点 ^ 100°c的三聚氰胺有机良溶剂充分溶解的含有三聚氰胺的被测样品试液，在硅胶薄层色谱板上点样，经展开剂展开后，挥除展开剂，以权利要求1至5之一的显色剂显色后，在紫外光或自然光下检视薄层色谱板上的显色斑点，由点样量计算被测样品中的三聚氰胺含量是否超过限量。7.如权利要求6所述的薄层色谱法，其特征是所说的三聚氰胺有机良溶剂为乙醇、甲醇、乙腈、丙酮，或含水重量比分别< 20%的含水乙醇、含水甲醇、含水乙腈或含水丙酮。8.如权利要求6所述的薄层色谱法，其特征是所说的展开剂体积份数组成为丙酮 4 10份，氯仿0 2份，氨水0. 1 10份。9.如权利要求8所述的薄层色谱法，其特征是所说的展开剂体积份数组成为丙酮 4 10份，氯仿0. 5 2份，氨水0. 1 10份。10.如权利要求9所述的薄层色谱法，其特征是所说的展开剂体积份数组成为丙酮 4 9份，氯仿0. 5 2份，氨水0. 5 4份。11.如权利要求10所述的薄层色谱法，其特征是所说的展开剂体积份数组成为丙酮7 份，氯仿0.5份，氨水2份。12.如权利要求6至11之一所述的薄层色谱法，其特征是经所说展开剂展开后的薄层色谱板在50°C 120°C的加热条件下挥除展开剂。13.如权利要求12所述的薄层色谱法，其特征是以所说加热方式挥除薄层色谱板中的展开剂后，立即趁热用所说的显色剂润湿。14.如权利要求6至11之一所述的薄层色谱法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：晁若冰，王雪彦，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：90
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