一种干扰素长效注射微球制剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，是一种干扰素（ＩＦＮ）的长效注射微球制剂的制备方法。本发明专利技术中的ＩＦＮ微球由干扰素、生物可降解基质和添加剂组成。本发明专利技术的制备方法其优点在于，提高了干扰素在制备工艺和释放过程中的稳定性，方法简便，易于操作，重现性好。所制备的缓释微球可在体外缓释达４周以上，释放符合近似零级模式。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，是一种干扰素(interferon，IFN)长效注射微球制剂的制备方法。
技术介绍
干扰素是正常机体细胞产生的一种具有抗病毒、抗肿瘤和调节机体免疫功能的蛋白质。在临床上对于许多恶性肿瘤和病毒性疾病疗效确切。为使干扰素在体内血药浓度平稳，减少病人的用药次数，提高干扰素的治疗效果，往往使用生物可降解聚合物作为基质制备成长效剂型以控制药物释放。例如将蛋白质类药物制成微球制剂。复乳法是制备IFN微球制剂的方法之一，文献报道(Sanchez A， M，Gonzalez L，et al.Biodegradable micro- and nanoparticles as long-term deliveryvehicles for interferon-alpha.Eur J Pharm Sci，2003，18221)用该方法制备了IFN-α微球，制备方法如下一、配方与配比主要成分 含量(w/v)IFN-α 0.01％聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA) 89.99％人血清白蛋白(HSA) 1％伯洛沙姆188(F-68) 9％二、操作步骤 1 制备油相将生物可降解基质材料按处方量溶于有机溶剂二氯甲烷，即成油相。2 制备内水相将IFN-α和HSA和F-68溶液按处方量混匀，即成内水相。3 制备初乳将上述内水相加入油相混合超声即成初乳。4 制备微球初乳在海藻酸钠溶液中分散制备复乳，复乳经溶剂挥发、固化形成微球。该微球制备工艺较简单，体外释药可维持一个月左右。然而由于所使用的保护剂HSA分子量大，在微球中所占比例大，导致微球载药量低，药物在微球中所占的质量百分比仅为0.01％左右。且若用血制品人血白蛋白有可能造成病毒性疾病的传染。US6379701B1中提到了另一种制备IFN微球制剂的方法，称作低温喷雾提取法。具体制备方法如下一、配方及配比优选处方为主要成分 质量锌离子稳定化的干扰素(锌离子、干扰素摩尔比为2∶1) 40mgPLGA 410mg碳酸氢钠 10mg碳酸锌50mg二、操作步骤1制备IFN-α-Zn2+复合物将IFN-α溶于pH7.2的碳酸氢钠缓冲液，加适量醋酸锌(ZnAc)溶液，使IFN-α和Zn2+在溶液中的摩尔比为1∶2，再加入适量醋酸(HAc)溶液将溶液pH调为7.1，即形成IFN-α-Zn2+复合物。2制备IFN-α-Zn2+复合物微粉将上述含IFN-α-Zn2+复合物的溶液经低温喷雾干燥法制成微粉。3制备IFN-α微球将PLGA按处方量溶于有机溶剂二氯甲烷，加入处方量上述微粉形成混悬液，再用喷雾冷冻提取法在液氮中分散形成微球，然后在-80℃低温冰箱中用无水乙醇缓慢萃取有机溶剂使微球固化，萃取过程约需3天。该微球体内释药可维持一个星期左右。本方法制备工艺复杂，制备时间长，需专门设备，行两次喷雾。但将锌离子和IFN-α制备成复合物后，不仅提高了IFN-α的稳定性，而且提高了微球制剂的载药量。
技术实现思路
本专利技术提供一种制备工艺简单、载药量大、释药平稳且持续时间长的IFN长效注射微球制剂及其制备方法，其可在体外持续释药达4周以上。本专利技术的制备方法如下一、配方与配比主要成分含量锌离子稳定化的干扰素(锌离子、干扰素摩尔比为2∶1)1～50mgPLGA50～500mg释放调节剂(碳酸锌或伯洛沙姆188) 0～50mg 二、操作步骤1.制备油相将生物可降解基质材料溶于有机溶剂，即成油相。所说的生物可降解基质材料选自聚乳酸(PLA)，聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己内酯、聚碳酸酯、聚腈基丙烯酸酯、聚醚酯等。优选PLGA，其中乳酸(LA)和羟基乙酸(GA)的比例为1∶1，平均分子量为5000～70000道尔顿，特异性粘度为0.1～0.6dl/g。所说的有机溶剂选自二氯甲烷或乙腈。2.制备IFN和锌离子复合物微粉IFN原液经超滤脱盐后换用10mM pH7.2的NaHCO3缓冲液，在其中加2mMZnAc，调节Zn2+和IFN的摩尔比为2∶1，并使IFN终浓度为1mg/ml左右，用1％HAc调pH至7.1，即可产生Zn2+和IFN复合物沉淀。再加入10倍量PEG6000，溶解混匀后冷冻干燥，得冻干粉。冻干粉用有机溶剂二氯甲烷或乙腈溶解，离心去上清，重复三次以去除PEG6000，即得IFN和锌离子复合物微粉。3.制备IFN微球将IFN和锌离子复合物微粉加入油相，涡旋或超声分散后，逐滴加入连续相棉子油或水中，搅拌乳化。当选用棉子油为连续相时，使用的乳化剂为0.1％～2％的卵磷脂，室温搅拌2～6小时，然后加入适量石油醚200～1000rpm继续搅拌10～40分钟，使微球固化，再离心，石油醚洗涤，冷冻干燥即得本专利技术微球。当选用水溶液为连续相时，使用的乳化剂为0.5％～5％聚乙烯醇(PVA)，以600～1800rpm高速搅拌乳化1～5分钟，得新生微球，再加5～10倍体积量蒸馏水稀释，以300～600rpm继续搅拌使有机溶剂挥发并固化微球，离心，蒸馏水洗涤，冷冻干燥即得本专利技术微球。还可在微球处方中加入适量释放调节剂碳酸锌和伯洛沙姆188(0～10％)，调节微球中IFN的释放速度。本专利技术的IFN长效注射微球外观圆整，粒径均匀，混悬性好，包封率达85％以上，经体外释放实验，缓释达4周以上，释放符合近似零级模式。附图说明图1为实施例1制备的IFN微球体外累积释放～时间曲线图。图2为实施例2制备的IFN微球体外累积释放～时间曲线图。图3为实施例3制备的IFN微球体外累积释放～时间曲线图。图4为实施例4制备的IFN微球体外累积释放～时间曲线图。具体实施例方式实施例1以乙腈为连续相制备IFN微球制剂(1)Zn2+和IFN-α-2b复合物的制备IFN-α-2b(0.5mg/ml，上海万兴生物制药有限公司，批号20030401，下同)原液2ml经超滤脱盐后换用10Mm pH7.2的NaHCO3缓冲液800μl配成溶液，加2mM ZnAc 52μl，使IFN-α-2b和Zn2+摩尔比为2∶1，IFN-α-2b终浓度为1mg/ml左右，用1％HAc调pH为7.1，立即产生Zn2+和IFN-α-2b复合物沉淀。(2)制备Zn2+和IFN-α-2b复合物微粉在上述Zn2+和IFN-α-2b复合物的溶液中加入10mg PEG6000，溶解混匀后冷冻干燥，得冻干粉。冻干粉用有机溶剂乙腈溶解，离心去上清，重复三次以去除PEG6000，即得Zn2+和IFN-α-2b复合物微粉。(3)微球的制备PLGA(LA∶GA＝50∶50，特异性粘度为0.19dl/g，美国BirminghamPolymers公司)100mg溶于500μl乙腈溶液中成油相，将IFN-α-2b与Zn2+复合物的微粉加入油相中按常规水浴超声混悬，加入30ml棉子油(含0.05％卵磷脂作为乳化剂，w/v)中，600rpm搅拌乳化2小时，然后加入轻质石油醚(沸点60-90℃)，继续搅拌15分钟使微球固化完全，离心、石油醚洗涤、冷冻干燥即得本专利技术微球。实施例2以乙腈为连续相碳酸锌为释放调节剂制备IFN微球制剂Zn2+和IFN-α-2b复合物微粉的制备方法同实施例1(1)、(2)两步，并将碳酸锌经气流粉碎控制粒径小于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干扰素长效注射微球制剂的制备方法，配方与配比如下：锌离子稳定化的干扰素（锌离子、干扰素摩尔比为２∶１）１～５０ｍｇＰＬＧＡ５０～５００ｍｇ释放调节剂（碳酸锌或伯洛沙姆１８８）０～５０ｍｇ具体操 作步骤为：（１）制备油相将生物可降解基质材料溶于有机溶剂，即成油相，所说的生物可降解基质材料选自聚乳酸（ＰＬＡ）、聚乳酸－羟基乙酸嵌段共聚物（ＰＬＧＡ）、聚乙醇酸（ＰＧＡ）、聚己内酯、聚碳酸酯、聚腈基丙烯酸酯、聚醚酯等。其中 ＰＬＧＡ的乳酸（ＬＡ）和羟基乙酸（ＧＡ）的比例为１∶１，平均分子量为５０００～７００００道尔顿，特异性粘度为０．１～０．６ｄｌ／ｇ；所说的有机溶剂选自二氯甲烷或乙腈；（２）制备ＩＦＮ和锌离子复合物微粉ＩＦＮ原液经超滤脱盐后换 用１０ｍＭｐＨ７．２的ＮａＨＣＯ↓［３］缓冲液，在其中加２ｍＭＺｎＡｃ，调节Ｚｎ↑［２＋］和ＩＦＮ的摩尔比为２∶１，并使ＩＦＮ终浓度为１ｍｇ／ｍｌ左右，用１％ＨＡｃ调ｐＨ至７．１，即可产生Ｚｎ↑［２＋］和ＩＦＮ复合物沉淀，再加入１０ 倍量ＰＥＧ６０００，溶解混匀后冷冻干燥，得冻干粉，冻干粉用有机溶剂二氯甲烷或乙腈溶解，离心去上清，以去除ＰＥＧ６０００，即得ＩＦＮ和锌离子复合物微粉；（３）制备ＩＦＮ微球将ＩＦＮ和锌离子复合物微粉加入油相，涡旋或超声分散后， 逐滴加入连续相棉子油或水中，搅拌乳化，当选用棉子油为连续相时，使用的乳化剂为０．１％～２％的卵磷脂，室温搅拌２～６小时，然后加入适量石油醚２００～１０００ｒｐｍ继续搅拌１０～４０分钟，使微球固化，再离心，石油醚洗涤，冷冻干燥即得本专利技术微球；当选用水溶液为连续相时，使用的乳化剂为０．５％～５％聚乙烯醇（ＰＶＡ），以６００～１８００ｒｐｍ高速搅拌乳化１～５分钟，得新生微球，再加５～１０倍体积量蒸馏水稀释，以３００～６００ｒｐｍ继续搅拌使有机溶剂挥发并固化微球，离心，蒸馏水洗涤，冷冻干燥即得本专利技术微球。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钟延强，吴诚，鲁莹，尹东锋，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]