一种天门冬酰胺酶注射液、其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种天门冬酰胺酶注射液、其制备方法及其在制备用于治疗白血病等血液系统肿瘤的药物中的应用。该制剂由天门冬酰胺酶、药用辅料和水组成。单位制剂中天门冬酰胺酶的含量可以是５－２００ｍｇ，单位制剂体积可以是１－２００ｍｌ。辅料可以选用但不仅限于甘露醇或者聚乙二醇等碳水化合物、各种环糊精、半胱氨酸等２０种人体氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸盐或者醋酸盐等缓冲盐类等等。该制剂的制备方法包括配液、除菌、分装、压塞和包装等步骤。该注射液具有稳定性好、制备方便的特点，能很好保持天门冬酰胺酶的结构和活性，在制备用于治疗白血病等血液系统肿瘤的药物中应用前景广泛。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物及其制剂领域。专利技术的核心在于提供了一种天门冬酰胺酶的新制剂、其制备方法及其在制备用于治疗白血病等血液系统肿瘤的药物中的应用。L-天门冬酰胺酶II(以下称为“天门冬酰胺酶”)是一种酰胺基水解酶。其活性形式为一个同源四聚体，每个亚基由326个氨基酸组成。可以专一地催化L-门冬酰胺降解为L-门冬氨酸和氨。反应式如下1922年Clementi发现豚鼠血清中存在天门冬酰胺酶，1953年Kidd发现在豚鼠血清中有抑癌作用的物质，其活性成分是蛋白质，1961年Broome确证了该抗癌物质为门冬酰胺酶。实验研究表明天门冬酰胺酶广泛存在于动物组织、微生物、植物和部分啮齿类动物的血清中，但在人体各种组织器官中的分布未见报道。某些肿瘤细胞缺乏门冬酰胺合成酶，因此不能自身合成生长必需的门冬酰胺，其生长需要依赖宿主正常细胞合成的门冬酰胺。天门冬酰胺酶可以将血清中的门冬酰胺水解为门冬氨酸和氨。使用天门冬酰胺酶可使血中门冬酰胺急剧缺失，肿瘤细胞既不能依赖宿主取得足够的门冬酰胺，也不能自身合成，导致其蛋白质合成过程中氨基酸的缺乏，增殖受抑制，肿瘤细胞大量破坏而不能生长、存活。门冬酰胺酶的抗肿瘤活性得到医学界的广泛认可。特别是来源于大肠杆菌的天门冬酰胺酶。大肠杆菌能产生两种门冬酰胺酶即L-ASPsI和L-ASPsII，分别由其染色体上基因ansA和ansB编码。其中只有L-ASPsII具有抗肿瘤活性。天门冬酰胺酶在临床上适用于治疗急性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、何杰金病及非何杰金病淋巴瘤、黑色素瘤等。尤其是对儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)的诱导缓解期疗效最好。目前临床使用的门冬酰胺酶主要有三种来源两种是末经修饰的源于细菌的天然酶。一种是经过化学修饰的。天然酶来源于大肠杆菌和欧文氏菌。源于欧文氏菌的产品主要在加拿大和欧洲使用。第三种即PEG化门冬酰胺酶是用化学方法将PEG与酶分子偶联。FDA证实使用天然酶治疗急性淋巴细胞性白血病过敏的患者可以用PEG化门冬酰胺酶继续治疗。用微生物特别是大肠杆菌来生产门冬酰胺酶已有广泛的研究。国外早已有该酶制剂上市。在我国，二十世纪70年代曾有天津生化制药厂生产，但后因菌种退化，产量降低而停产。目前只有常州千红制药有限公司和广州瑞星两家公司在生产。其产量远不能满足国内需求。国内临床上使用的门冬酰胺酶主要从日本和美国进口，价格昂贵。综上所述，天然菌来源的门冬酰胺酶具有疗效确切，使用安全，毒副作用相对较低，生产成本低，产品纯度高等优点，是一种成功的癌症治疗药物。目前生产天门冬酰胺酶的工艺很多，但制剂研究很少。国内外市场上只有冻干制剂一种。天门冬酰胺酶是大分子蛋白质，传统的做法仅仅是进行冻干保存。近年来制剂研究工艺和各种辅料的发展，出现了众多新的工艺，丰富了蛋白质多肽类药物的剂型。本公司研究人员从大分子蛋白质稳定性的角度出发，筛选了多种处方，解决了天门冬酰胺酶在水溶液中的稳定性问题，最终研制出稳定的天门冬酰胺酶注射液，为临床用药提供了方便。本专利技术设计思路、研究内容和技术方案本专利技术主要内容包括制剂工艺的研制、稳定性考察和药理学研究三个部分。其中，天门冬酰胺酶在注射液中的稳定性是需要重点解决的问题。根据人用注射液研究的要求，该溶液型制剂应该是澄明、安全、无害、稳定性好的溶液。溶剂可以是水性也可以是非水性的，水性溶剂最常用的是注射用水。根据活性药物的特点，可以选择各种药用辅料，如渗透压调节剂、增溶剂、抗氧化剂、助溶剂、pH值调节剂等等。结合天门冬酰胺酶的特点，我们主要考虑应用了以下辅料渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧化剂和防腐剂。可选的渗透压调节剂可以是但不仅限于氯化钠等无机盐类化合物；可选的pH值调节剂可以是但不仅限于磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液等；可选的增溶剂或者助溶剂可以是但不仅限于甘氨酸等20种人体氨基酸及其盐(如半胱氨酸、亮氨酸、蛋氨酸等)、各种环糊精、甘油(或者山梨醇、聚乙二醇、丙二醇)等碳水化合物、各种环糊精、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆等等；可选的抗氧化剂可以是但不仅限于乙二胺四乙酸及其盐、抗坏血酸、柠檬酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、蛋氨酸等等；可选用的防腐剂可以是但不仅限于肉桂醇、甲酸等等。经过大量的正交试验表明，上述辅料对天门冬酰胺酶有很好的稳定效果。其中，优选的pH值调节剂是磷酸缓冲液、优选的增溶剂是环糊精类化合物，优选的渗透压调节剂是氯化钠，优选的抗氧化剂是EDTA二钠和L-半胱氨酸。在处方中天门冬酰胺酶和辅料用量组成方面，单位制剂中天门冬酰胺酶可以是5-200mg，例如5、10、20、40、100、200mg。单位制剂的体积可以是1-200ml。一个优选的处方方案是5-100mg天门冬酰胺酶、1-50mmol/L的L-半胱氨酸、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠。在此基础上更优选的方案是10-80mg天门冬酰胺酶、2-30mmol/L的L-半胱氨酸、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠。最优选的方案是20mg天门冬酰胺酶、5mmol/L的L-半胱氨酸、20mmol/L磷酸缓冲液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠，制备成规格为20mg∶5ml/支的制剂。另一个优选的处方方案是5-100mg天门冬酰胺酶、1-50mmol/L的L-半胱氨酸、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠、0.1-10％羟丙基β环糊精。在此基础上，更优选的组分方案是10-80mg天门冬酰胺酶、2-30mmol/L的L-半胱氨酸、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠、0.5-5％羟丙基β环糊精。最优选的组分方案是20mg天门冬酰胺酶、5mmol/L的L-半胱氨酸、20mmol/L磷酸缓冲液、1mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠、2％羟丙基β环糊精，制剂规格是20mg∶5ml/支。上述制剂处方可以通过如下工艺进行配制(1)在100级层流下按投料量称取所需的氯化钠、12水磷酸氢二钠、2水磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠等上述辅料，装入适宜的容器中，加计算量灭菌注射用水溶解立即使用。(2)将处方量天门冬酰胺酶加入缓冲液，溶解后摇匀，超滤柱超滤除热原，再用高压蒸汽灭菌过的滤器(0.22μm、0.45μm双层滤膜)过滤除菌，封口，准备分装。(3)分装前先用灭菌注射用水调整剂量，剂量调整合格后，换药液分装。全加塞后，将药瓶送入上瓶轨道，进行压盖。(4)启动轧盖机，药瓶随转盘进入轨道，铝盖经轨道加至药瓶上，并被机头锁紧。轧盖后铝盖应严密、边缘整齐。上述处方中提到的天门冬酰胺酶可以是大肠杆菌来源(L-天门冬酰胺酶I或者II)，也可以是欧文氏菌来源的L-天门冬酰胺酶。在我国已经有常州千红等多个厂家提供这种产品，而处方中的制剂辅料也是商品化的物质，可以方便得到。至此，我们的专利技术完成了制剂制备工艺的设计和研究，开本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种天门冬酰胺酶注射液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐明波，杨仲凡，吴彦卓，雷建军，王晓山，王俊玲，连治国，梁果义，蔡祥胜，王磊，
申请(专利权)人：北京双鹭药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]