一种化合物在制备抗艾滋病药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及化工领域，涉及一种具有抗ＨＩＶ活性的小分子化合物，其制备方法及应用。ＣｙＰＡ能够与人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）的Ｇａｇ多聚蛋白结合。使用ＲＮＡｉ技术沉默ＣｙｐＡ或者抑制ＣｙｐＡ的活性，均能干扰ＨＩＶ－１病毒的复制。本发明专利技术的小分子化合物是ＣｙＰＡ抑制剂，具有抗ＨＩＶ－１病毒的功能，而且本发明专利技术的小分子化合物是针对细胞靶点设计的，不易形成耐药性，适合ＡＩＤＳ患者终身用药的需求。因此，本发明专利技术的小分子化合物可以作为新的抗艾滋病药物进行开发，为治疗和治愈艾滋病提供了一种新的途径和手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化工领域及医药领域，涉及一种化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。
技术介绍
亲环素Cycliphilins (CyPs)是普遍分布的细胞内蛋白，在植物、细菌和哺乳 动物中均存在，具有高度保守性，最初是作为环孢素A的细胞受体被发现的。环 孢素A (CyclosporinA， CsA)是从真菌代谢产物中分离得到的含11个氨基酸的 环状多肽，作为免疫抑制剂药物在临床上常用于治疗器官移植后所产生的排斥反 应及自身免疫系统疾病。目前已发现和克隆的CyPs有130多种异构体，它们构成了 Cyclophilins家族。CyPs具有肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase) 活性，催化蛋白质折叠过程，尤其是富含脯氨酸的蛋白质折叠，并且起着分子伴 侣〈乍用。与此同时，CyPs也广泛参与相关的生物学过程如细胞凋亡 和细胞间信号传导等。有许多研究显示，CyPA能够与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的Gag多聚蛋白 (Gagpolyprotein)结合。这种结合使得CypA能够被特异地包装到HIV-1病毒体 中，而不被包装到其它逆转录病毒中。 在HIV-1型病毒自组装过程中，CyPA作为特定的组成部分进入病毒，在HIV-1感染细胞的早期阶段发挥作用。 CypA与 Gag的互作位点目前已经被确定在Gag的N端CA结构域(该结构域在HIV-1成 熟后经过切割成为p24外壳蛋白)，CypA的脯氨酸异构酶活性能够协助病毒完成 感染细胞后的脱衣壳过程。使用 RNAi技术沉默CypA的表达,或者使用CsA及其衍生物来抑制CypA的活性，均能干扰 HIV-1病毒的复制。然而，到目前为止，尚未有人报道具有抗HIV病毒的CypA抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。本专利技术提供了一种结构如人//的分子在制备抗艾滋病药物中的应用；其中，R,=苯基；4 —喷啶基；2,6-二甲 基-4-苯基；2-吡啶基；4，6_二甲基-2-吡啶基或者2，6-二甲基-4-嘧啶基；R2= 4 一羟基苯甲基；4一乙氧基苯甲基；3-甲氧基吡啶-2-基或者4-甲氧苯基。本专利技术 还包括对上述化合物进行常规替代所得到的化合物，本专利技术统称为FD6。本专利技术中，R,可以是2，6-二甲基-4-嘧啶基。本专利技术中，R2可以是4-甲氧苯基。本专利技术的一个实施例中，R,是2,6-二甲基-4-嘧啶基，R2是4-甲氧苯基。这 样所述的化合物即为N-(4-U(2，6-二甲基-4-嘧啶基)氨讽基)苯基)-2-(4-甲氧苯基)-4- 喹 啉 甲 酰 胺 (N-(4-{sulfonyl}phenyl)-2-(4-met hoxyphenyl)-4-quinolinecarboxamide)， 分子量为539.61， 结构式为N、即鉴于抑制CypA活性的物质可能干扰HIV-1病毒的复制，本专利技术针对CypA 的活性位点设计了若干小分子抑制剂。由于是针对细胞靶点设计的药物，而细胞 靶点相对于病毒靶点来说突变速率相对较慢，因此不易形成耐药性，适合AIDS 患者终身用药的需求。首先，本专利技术对CypA小分子抑制剂进行了虚拟筛选。Cyclophilin A (CypA， PPIA)基因在人类基因组数据库中己经被登录，其录入号为NMJ)21130。在PDB蛋白结构数据库中，检索到了人类CypA蛋白的X光 衍射晶体结构(PDB代码1CWA)。这个结构是CypA与其天然抑制剂环孢菌素 A (CsA)的复合物晶体结构。从这个结构中，确定了CypA的活性位点，并且确 定了活性位点中，能够被CsA所抑制的若干关键氨基酸位点。根据这些结构信息， 本专利技术针对CypA活性位点，对若干小分子数据库进行了筛选。用于筛选的小分 子数据库主要包括SPECS和CNPD,最后筛选到了本专利技术的FD6。整个计算过程 是在中科院上海药物所64CPU-SGI ORIGN3800计算机和上海超算中心392CPU-神威I超级计算机上进行的。其次，本专利技术利用BIAcore分子互作仪验证虚拟筛选结果BIAcore分子互作仪是基于表面等离子共振技术来实现跟踪生物分子间的相 互作用，无需任何标记物，因此最大限度的保证了实验结果的真实性。实验时， 将目的生物分子(CypA蛋白)固定在传感芯片表面，然后将小分子化合物溶于溶 剂并且流过芯片表面。监测器能实时跟踪检测溶液中的分子与芯片表面目的生物 分子结合、解离整个过程的变化。通过BIAcore的结合数据，我们最终确定了 12 个能够与CypA发生结合的小分子化合物，并且计算出了这些小分子化合物与 CypA结合的平衡—解离常数KD。本专利技术的N-(4-U(2,6-二甲基-4-嘧啶基)氨]砜基》 苯基)-2-(4-甲氧苯基)-4-喹啉甲酰胺其平衡解离常数^(1^)为^=7.19±0.19><10-6 Chi2=0.335。其中，Chf是BIAcore统计软件中用于检测实验误差的一个数据。再次，本专利技术利用酶活实验证明小分子化合物对CypA酶活抑制的能力，从 而寻找出CypA的抑制剂。测定CyP活性的方法很多，但以a -胰凝乳蛋白酶活性测定法(a -chymotrypsin-coupled enzymic assay)最常用。其原理是含脯氨酸的寡肽底物，如 N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe对硝基苯胺(N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe p-nitroanilide) 在溶液中其顺式、反式结构处于平衡，CyP能催化该底物发生顺反异构作用，即 催化脯氨酸由顺式变为反式；当其处于反式结构时，C端p-nitroanilide被a-胰凝 乳蛋白酶裂解，释放出色素基团对硝基苯胺，在390nm连续测定吸光值的变化即 可得知CyP的PPIase活性。我们以不加小分子抑制剂的反应作为对照反应，测定各个小分子配体在不同 浓度下对酶活反应的抑制率，从而计算出各个小分子配体的IC5o值。本专利技术的N-(4-{砜基}苯基)-2-(4-甲氧苯基)-4-喹啉甲酰胺其酶活 抑制ICso值(pM)为11.78士1.38。最后，本专利技术还测定了 CypA小分子抑制剂对HIV—1病毒复制的影响 化合物抗HIV-1病毒增值测试简单的说，就是利用双抗夹心法测定每个孔 内p24蛋白产生的量。以空白对照孔的光吸收值为参照，计算各个化合物抑制 HIV-1病毒p2斗蛋白产生的ICso值。结果>4-(4-{砜基} 苯基)-2-(4-甲氧苯基)-4-喹啉甲酰胺抑制1 ^1病毒卩24蛋白产生的1(:5()值(11§/1111) 为55.54±3.29。可见，N-(4-U(2，6-二甲基-4-嘧啶基)氨]砜基》苯基)-2-(4-甲氧苯基) -4_喹啉甲酰胺具有抑制HIV—1病毒复制的能力，可以作为新的抗艾滋病药物进 行开发。本专利技术的小分子化合物可以采用各种常规的制备方法制备。例如，采用人工 化学合成的方法。利用本专利技术小分子化合物，通过各种常规筛选方法，可筛选出与FD6发生相 互作用的物质，如受体、抑制剂或拮抗剂等。本专利技术及其抑制剂、拮抗剂等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同 的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体 介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结构如＊＊＊的分子的应用，其特征是在制备抗艾滋病药物中的应用；其中，Ｒ↓［１］＝苯基；４－嘧啶基；２，６－二甲基－４－苯基；２－吡啶基；４，６－二甲基－２－吡啶基或者２，６－二甲基－４－嘧啶基；Ｒ↓［２］＝４－羟基苯甲基 ；４－乙氧基苯甲基；３－甲氧基吡啶－２－基或者４－甲氧苯基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，陈帅，赵雪梅，蒋华良，胡海荣，唐丽莎，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]