一种纳米囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤１：取１００ｍｇ甲氨蝶呤加入到０．２５Ｍ ＮａＯＨ溶液２ｍｌ中，制得５０ｍｇ／ｍｌ的甲氨蝶呤碱性溶液；将１００～２００ｍｇＰＬＧＡ溶于５ｍｌ二氯甲烷中，搅拌后充分溶解制成浓度为２ ０～４０ｍｇ／ｍｌ的ＰＬＧＡ－ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液； 步骤２：取２０～１００μｌ甲氨蝶呤碱性溶液注入０．５～４ｍｌ的ＰＬＧＡ－ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液中，超声乳化后得到Ｗ／Ｏ初乳； 步骤３：将上述初乳加入到１～４ａｔ ％胆酸钠０．５～４ｍｌ中，超声乳化后得到Ｗ／Ｏ／Ｗ复乳； 步骤４：将所得复乳置于１０～１００ｍｌ ０．５ａｔ％胆酸钠中在室温下减压蒸发，除去ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］，即得纳米囊粒悬液； 步骤５：将所制得的纳米囊粒悬液于２～１０ ℃下离心、沉淀，并洗去未包裹的游离ＭＴＸ，纳米囊粒沉淀用１～１０ｍｌ双蒸水吹打分散后，加入甘露醇至甘露醇终浓度为３～１０ａｔ％，冷冻干燥即得纳米囊粒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备用于骨肿瘤治疗的纳米嚢及纳米嚢复合微球的方法。
技术介绍
骨肿瘤治疗是集手术、化疗和放疗相结合的综合治疗，由于四肢恶性骨 肿瘤的保肢治疗，脊柱恶性骨肿瘤毗邻结构复杂，病灶难以彻底切除，术后 防止复发就成为越来越重要的问题，而这一问题和肿瘤切除后骨重建所需大 量植骨材料的缺乏仍是困扰外科医师的难题，是影响骨肿瘤治疗效果和治疗 观念发展的瓶颈，也是目前研究的热点和难点。目前对于骨肿瘤的治疗方法的研究主要集中在肿瘤切除后重建材料和 术后化疗给药方案及途径的研究两个方面，在骨重建替代材料方面目前主要 有自体骨、异体骨、骨水泥和各种人工假体等。术后化疗方案及用药途径方 面主要集中在开发高效低毒的药物或剂型，以及开发不同的给药途径方面。关于术后化疗药物的开发主要的研究方向分为两个方面， 一是研究具有 较高活性同时毒性较低的药物和剂型，目前关于这方面的研究国内外都开展的如火如茶，但还没有理想的药物和剂型应用到临床；另一方面是采用现有 具有良好抗肿瘤活性的药物通过改变其进入体内的方式，使其能够通过外科 植入需要用药的局部，通过药物緩释作用达到在局部具有较长时间的药物存 在，同时在緩释的具有较高的药物浓度，进而发挥较好的局部抗肿瘤活性， 同时由于緩释主要在肿瘤切除后活在在肿瘤所在部位，全身药物浓度相对较 低，因此化疗药物的全身毒副作用相对较小，通过对不同化疗药物的联合载 药可以进行局部联合化疗方案，进而实现较理想的治疗肿瘤作用。现在已经 有了多种的化疗药物緩释剂型的出现，但由于药物緩释时间和缓释的药物浓 度与骨肿瘤局部緩释用药的要求不吻合至今也没有在临床上广泛应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种纳米嚢及纳米嚢复合微球的制备 方法，所制备的纳米嚢及纳米嚢复合微球均具者峰值释放药物和平稳释放药 物的特点，体外对骨肉瘤细胞具有较好的长期杀伤作用，在其药物释放的过 程中与直接给药相似。为了解决上述问题，本专利技术提供了一种纳米嚢的制备方法，包括如下步骤步骤1:取100mg曱氨蝶呤加入到0.25M NaOH溶液2ml中，制得 50mg/ml的曱氨虫某呤石咸性溶液；将100 ~ 200mgPLGA (聚乳酸-羟基乙酸共 聚物)溶于5ml 二氯曱烷中，搅拌后充分溶解制成浓度为20~40mg/ml的 PLGA - CH2C12溶液；步骤2:取20 ~ 100(il曱氨蝶呤碱性溶液注入0.5 ~ 4ml的PLGA - CH2C12 溶液中，超声乳化后得到W/O (水相/油相)初乳；步骤3:将上述初乳加入到1 ~ 4at% (质量百分比)胆酸钠0.5 ~ 4ml中， 超声乳化后得到W/O/W (水相/油相/水相)复乳；步骤4:将所得复乳置于10 ~ 100ml 0.5at。/。胆酸钠中在室温下减压蒸发， 除去CH2Cl2,即得纳米嚢粒悬液；步骤5:将所制得的纳米嚢粒悬液于2~ 10。C下离心、沉淀，并洗去未 包裹的游离MTX (曱氨蝶呤)，纳米嚢粒沉淀用1 ~ 10ml双蒸水吹打分散 后，加入甘露醇至甘露醇终浓度为3~ 10at%，冷冻干燥即得纳米嚢粒。优选地，在所述步骤2和步骤3中采用超声波细胞粉碎机进行超声乳化。优选地，在所述步骤4中采用旋转蒸发仪进行减压蒸发。本专利技术还提供了 一种纳米嚢复合微球的制备方法，包括如下步骤步骤a，制备纳米嚢，包括如下步骤步骤1:取100mg曱氨蝶呤加入到0.25MNaOH溶液2ml中，制得 50mg/ml的曱氨蝶呤碱性溶液；将100 ~ 200mgPLGA (聚乳酸-羟基乙酸共 聚物)溶于5ml 二氯甲烷中，搅拌后充分溶解制成浓度为20~40mg/ml的PLGA (聚乳酸-羟基乙酸共聚物)-CH2Cl2溶液；步骤2:取20 ~ 100^1的曱氨蝶呤碱性溶液注入0.5 ~ 4ml的PLGA -CH2Cl2溶液，超声乳化后得到W/O (水相/油相)初乳；步骤3:将上述初乳加入到0.5 ~ 4ml的1 ~ 4at。/。胆酸钠中，超声乳 化后得到W/0/W (水相/油相/水相)复乳；步骤4:将所得复乳置于10 ~ 100ml 0.5at。/。的胆酸钠中在室温下减 压蒸发，除去CH2Cl2,即得纳米嚢粒悬液；步骤5:将所制得的纳米嚢粒悬液于2~ l(TC下离心、沉淀，洗去 未包裹的游离MTX (曱氨蝶呤)，纳米嚢粒沉淀用1 ~ 10ml双蒸水吹打分 散后，加入甘露醇至甘露醇终浓度为3 ~ 10at%，冷冻干燥即得纳米嚢粒；步骤6:将纳米嚢粒加入到10at。/。的聚乙二醇唬拍酸维他命E (VitaminETPGS)溶液中，充分搅拌混匀；步骤b,制备纳米嚢复合微球，即将100 ~ 250mgPLGA (聚乳酸-羟基 乙酸共聚物)溶于5ml 二氯曱烷中，搅拌后充分溶解制成20 ~ 50mg/ml的溶 液，取2ml该溶液然后再加入5 15mg MTX (曱氨蝶呤)，用乳匀机分散 均匀，迅速倒入100ml 2 5at。/。聚乙烯醇溶液中，在常温下快速搅拌，再将 步骤6所制备的纳米嚢聚乙二醇琥珀酸维他命E溶液2ml快速倒入并强力搅 拌1~3秒后用微孔滤膜抽滤，用去离子水洗，最后干燥，即制得MTX纳 米嚢复合微球。优选地，在玦述步骤2和步骤3中采用超声波细胞粉碎机进行超声乳化。优选地，在所述步骤4中采用旋转蒸发仪进行减压蒸发。本专利技术所制备的纳米嚢具有如下优点纳米嚢颗粒大小均匀，粒径大小 为100 -220nm，表面光滑，载药量和包封率较高，制备工艺简单，药物释 放具有峰值释药和平稳释药的特点；本专利技术所制备的纳米嚢复合微球具有如下优点本纳米嚢复合微球的组 成内部由化疗药物纳米嚢组成，在微球降解的过程中可以释放出完整的化疗 药物纳米嚢微球，纳米嚢复合微球粒径大小为40~50,，微球得载药量为 5.1~8.4%，包封率为65~85%,药物释放具有峰值释药和平稳释药的特点，有效抗肿瘤活性药物释放时间达26 32天。从而使微球释药可以出现 峰值释药和平稳释药交替出现的特点，符合抗肿瘤药物的最佳用药特点，并 且在释药过程中有2~3个高峰释药节段，平稳释药节段在植入局部即可维 持需要的抗肿瘤浓度，峰值释药节段在局部可以达到有效抗肺瘤药物浓度的 20倍，而全省毒副作用较小。具体实施方式实施例1(纳米嚢的制备) 本实施例的纳米嚢的制备工艺具体如下步骤1:取100mg曱氨蝶呤加入到0.25M NaOH溶液2ml中，制得 50mg/ml的甲氨蝶呤碱性溶液；将100mgPLGA (聚乳酸-羟基乙酸共聚物) 溶于5ml 二氯曱烷中，搅拌后充分溶解制成浓度为20mg/ml的(聚乳酸 - 羟 基乙酸共聚物)-CH2Cl2溶液；步骤2:取20^1的MTX碱性溶液注入0.5ml的PLGA - 012(:12溶液， 用超声波细胞粉碎机120w连续超声15s乳化后，得到W/O初乳；步骤3:将上述初乳加入到0.5ml的lat。/。胆酸钠中，用超声波细胞粉碎 机120w脉冲超声15s,每次间隔ls乳化后，得到W/0/W复乳；步骤4:将所得复乳置于10ml含有0.5at。/o胆酸钠中，于旋转蒸发仪中 室温减压蒸发，除去CH2Cl2，即得纳米嚢粒悬液；步骤5:将所制得的纳米嚢粒悬液于2。C下11000xg离心45min,弃去 上清本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纳米囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤１：取１００ｍｇ甲氨蝶呤加入到０．２５Ｍ ＮａＯＨ溶液２ｍｌ中，制得５０ｍｇ／ｍｌ的甲氨蝶呤碱性溶液；将１００～２００ｍｇＰＬＧＡ溶于５ｍｌ二氯甲烷中，搅拌后充分溶解制成浓度为２０～４０ｍｇ／ｍｌ的ＰＬＧＡ－ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液； 步骤２：取２０～１００μｌ甲氨蝶呤碱性溶液注入０．５～４ｍｌ的ＰＬＧＡ－ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］溶液中，超声乳化后得到Ｗ／Ｏ初乳； 步骤３：将上述初乳加入到１～４ａｔ％胆酸钠０．５～４ｍｌ中，超声乳化后得到Ｗ／Ｏ／Ｗ复乳； 步骤４：将所得复乳置于１０～１００ｍｌ ０．５ａｔ％胆酸钠中在室温下减压蒸发，除去ＣＨ↓［２］Ｃｌ↓［２］，即得纳米囊粒悬液； 步骤５：将所制得的纳米囊粒悬液于２～１０℃下离心、沉淀，并洗去未包裹的游离ＭＴＸ，纳米囊粒沉淀用１～１０ｍｌ双蒸水吹打分散后，加入甘露醇至甘露醇终浓度为３～１０ａｔ％，冷冻干燥即得纳米囊粒。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许国华，徐一帆，叶晓健，蔡舒，袁文，吴建峰，徐虹，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31
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