犬血清免疫球蛋白长效剂型的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种可每周肌肉注射一次的犬血清免疫球蛋白长效剂型的制备方法，其特征在于采用复乳－溶剂挥发法制备，丙交脂／乙交脂共聚物为微球载体，用犬血清免疫球蛋白为包裹对象，制成的犬血清免疫球蛋白长效剂型体外释药性能符合长效制剂特征。本发明专利技术有益效果是：该注射用犬血清免疫球蛋白长效剂型克服了已有的犬血清免疫球蛋白注射针剂需要长期频繁注射、使用不便以及生物利用度低和药物使用量大的缺陷，一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效，是理想的犬血清免疫球蛋白的长效剂型。本发明专利技术制备简单，应用简便，且易吸收，更好的发挥治疗畜、禽病毒性疾病的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物药物的制备技术，特别涉及一种犬血清免疫球蛋白长效 剂型的制备方法。
技术介绍
犬血清免疫球蛋白是犬产生的抗感染物质，抗体产生是犬在漫长演化过 程中形成的对抗病原体入侵的最有效天然保护剂。具有抗体活性的免疫球蛋 白与体内的免疫细胞和免疫器官一起共同构建动物机体免疫力的五大功能 防御功能、免疫稳定功能、免疫监视功能、修复功能、由浆细胞产生能与细 菌、病毒产生特异性结合的免疫球蛋白。犬用免疫球蛋白的功能提高仔犬 免疫力，防止疾病感染；调节胃肠功能，防止营养性下痢；治疗常见的细菌、 病毒性传染病。如传染性肝炎、犬瘟热、细小病毒病、痢疾。目前，犬血清免疫球蛋白都是以注射的途径给药，通常有较好的治疗效 果，但多者每天需要注射1一2次，连用2 — 5天，给养殖业主的使用带来很多 不便，因此将其制成长效剂型便成为人们追求的目标。已有的犬血清免疫球 蛋白存在需要长期频繁注射、使用不便、生物利用度低以及药物使用量大等 缺陷。因此，提供一种，有效预防和治 疗各种畜、禽病毒性疾病，是该
科研人员急需开发的新课题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服已有技术的不足之处，提供一种制备简单、应用 方便、效果显著的。一种，其特征在于包括如下步骤(1) 将一定量的犬血清免疫球蛋白溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液， 制成水相溶液(Wl)，犬血清免疫球蛋白的含量为0.5 — 50毫克/毫升；(2) 将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交 脂/乙交脂共聚物的含量为0. l—O. 5克/毫升；将上述含犬血清免疫球蛋白 的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)与水相溶液(Wl) 的比例为20 : l至2 : 1，使这两种溶液在温度5 — 3(TC下搅拌混合均匀，制成 初乳W1/0，在4一10。C下保存；(3) 将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓 度为0.5-50%;将上述初乳W1 / 0加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，初乳W1/0 与水相溶液(W2)的比例为l : 50至1 : 200，制成复乳W1 / 0/W2，在4一10。C 下保存；(4) 将复乳Wl/0/W2转移到NaCl水溶液中，搅拌均匀，使有机溶剂挥 发，然后离心收集微球；(5) 所述步骤(2)中的搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌速度为500 — 8000 转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时；(6) 所述步骤(3)中的搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌速度为100 — 3000 转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；(7) 所述步骤(4)中的搅拌温度为5 — 30'C，搅拌速度为500 — 3000 转/分，搅拌时间为0.2 — 0.5小时；(8) 为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所 述制备步骤(1)溶液中。所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。 所述稳定剂的加入量为最终溶液的O. 1% — 10%。本专利技术方法的有益效果是该注射用犬血清免疫球蛋白长效剂型能够减 少犬血清免疫球蛋白用药次数，是一种理想的犬血清免疫球蛋白长效剂型。 具有制备工艺简单，容易实现，应用方便，所需成本低等特点，该方法采用 毒性小，注射安全的分散剂及油相等材料，使犬血清免疫球蛋白均匀的分散 溶解到油相中，最终成为一种犬血清免疫球蛋白的长效剂型。采用该方法制 成的犬血清免疫球蛋白的长效剂型体外实验表明，用畜、禽扰素为包裹对象， 所制得的犬血清免疫球蛋白微球形态圆整，粒度分布均匀，粒径分布在40微 米以下，载药量可达8.0%以上，包封率在30.0%以上，体外缓释可以达4周 释药，符合长效制剂特征。 一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效。 将犬血清免疫球蛋白做成微球制剂，可以延长药物作用时间，大大提高药物 疗效和经济效益。 具体实施例方式以下结合实施例，对依据本专利技术提供的具体实施方式详述如下 实施例l一种，其特征在于具体实施步骤 如下(1 )将90. 0毫克犬血清免疫球蛋白溶解在2, 0毫升含有2%的聚乙二醇 4000的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);(2) 将900.0毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于2毫'升二氯甲烷制成油相 溶液(0);(3) 将上述含犬血清免疫球蛋白的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0) 中，使这两种溶液在温度15。C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小时，搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一KTC下保存；(4) 将上述初乳W1 /0在2000转/分搅拌情况下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 — 30。C,搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；(5) 将复乳W1/0/W2加入到3倍复乳体积的3Q/oNaCl水溶液中，通过800 转/分搅拌，使有机溶剂挥发，然后1800转/分离心10分钟，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。所制得的犬血清免疫球蛋白微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在 22.4微米，载药量可达8. 1%，包封率在39.5%，体外释放实验表明，缓释可 以达2周，符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型犬血清免疫球蛋白除具 有犬血清免疫球蛋白的抗畜、禽病毒作用外，其在体内的半衰期是普通犬血 清免疫球蛋白的3.1倍，从而延长了其在体内的作用时间。实施例2一种，其特征在于具体实施步骤 如下(1) 将45毫克犬血清免疫球蛋白溶解在l毫升含有2Q/o的海藻糖的PBS缓冲 溶液，制成水相溶液(Wl);(2) 将600毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于3毫升二氯甲烷制成油相溶 液(0);(3) 将上述含犬血清免疫球蛋白的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0) 中，使这两种溶液在温度15'C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小时，搅拌混合，制成初乳W1/0，在4一1(TC下保存；(4) 将上述初乳W1 / 0在1500转/分搅拌情况下加入到300毫升2%的聚乙 烯醇中，搅拌温度为5 — 3(TC，搅拌时间为0.2小时，制成复乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；(5) 将复乳W1 / 0 / W2加入到3倍复乳体积的3。認aCl水溶液中，通过1500 转/分搅拌使有机溶剂挥发，然后2000转/分，离心15分钟，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。 '所制得的犬血清免疫球蛋白微球形态圆整，粒度分布均匀，平均粒径在 20.5微米，载药量可达15.5%，包封率在35.2%，体外释放实验表明，缓释可以达4周，符合长效制剂特征。动物实验证明这种新型.犬血清免疫球蛋白除 具有犬血清免疫球蛋白的抗畜、禽病毒作用外，其在体内的半衰期是普通犬 血清免疫球蛋白的2.5倍，从而延长了其在体内的作用时间。 实施例3一种，其特征在于具体实施步骤 如下(1) 将120.0毫克犬血清免疫球蛋白溶解在4.0毫升含有2%的牛血清白蛋 白的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(Wl);(2) 将1100毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于3.5毫升二氯甲垸制成油 相溶液(0);(3) 将上述含犬血清免疫球蛋白的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0) 中，使这两种溶液在温度15'C下、搅拌速度为8000转/分、搅拌时间为0.05 小本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种犬血清免疫球蛋白长效剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤：　（１）将一定量的犬血清免疫球蛋白溶解在含有稳定剂的ＰＢＳ缓冲溶液，制成水相溶液（Ｗ１），犬血清免疫球蛋白的含量为０．５－５０毫克／毫升；　（２）将丙交脂／乙交脂共 聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液（Ｏ），丙交脂／乙交脂共聚物的含量为０．１－０．５克／毫升；将上述含犬血清免疫球蛋白的水相溶液（Ｗ１）加入到油相溶液（Ｏ）中，油相溶液（Ｏ）与水相溶液（Ｗ１）的比例为２０∶１至２∶１，使这两种溶液在温度５－３０℃下搅拌混合均匀，制成初乳Ｗ１／Ｏ，在４－１０℃下保存；　（３）将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液（Ｗ２），聚乙烯醇的重量浓度为０．５－５０％；将上述初乳Ｗ１／Ｏ加入到水相溶液（Ｗ２）搅拌均匀，初乳Ｗ１／Ｏ与水相溶液（Ｗ２）的比例为１ ∶５０至１∶２００，制成复乳Ｗ１／Ｏ／Ｗ２，在４－１０℃下保存；　（４）将复乳Ｗ１／Ｏ／Ｗ２转移到１－５％的ＮａＣｌ水溶液中，搅拌均匀，使有机溶剂挥发，然后离心收集微球；　（５）所述步骤（２）中的搅拌温度为５－３０℃，搅拌速度为 ５００－８０００转／分，搅拌时间为０．０２－０．２小时；　（６）所述步骤（３）中的搅拌温度为５－３０℃，搅拌速度为１００－３０００转／分，搅拌时间为０．２－０．５小时；　（７）所述步骤（４）中的搅拌温度为５－３０℃，搅拌速度为５ ００－３０００转／分，搅拌时间为０．２－０．５小时；　（８）为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所述制备步骤（１）溶液中。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：田杏芳，王连民，
申请(专利权)人：天津生机集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]