本发明专利技术公开的木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法，采用高效液相色谱仪、紫外检测器；按照中国药典２００５版一部附录ＶＩ Ｄ高效液相色谱法测定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ；特定的流动相；检测波长３７０ｎｍ或２５４ｎｍ；进样量２０μＬ，理论塔板数按槲皮苷计算应不低于３０００；按照制得的供试品溶液、对照品溶液在色谱检测条件下注入高效液相色谱仪进行检测。本发明专利技术的方法，根据槲皮苷的峰面积可以计算槲皮苷在总黄酮中所占的含量，根据供试品溶液的各个峰的出峰时间定性检测出芦丁与金丝桃苷。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药检测
，涉及一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测 方法。
技术介绍
木芙蓉属锦葵科植物，又名拒霜花、芙蓉木、木莲、大叶芙蓉、下排杯、地芙 蓉、华木、旱芙蓉、九头花等，我国多有栽培。药用叶、花、根皮，夏秋季收。鲜用或 晒干备用。全株具清热解毒、凉血消肿功效，用于痈疽肿毒初起、臁疮、烫伤、跌打损 伤、目赤肿痛、肺痈、咳喘、赤白痢疾、妇人白带、肾盂肾炎等症。木芙蓉中主要化学成分为黄酮类和留醇类，分离得到的黄酮类成分有槲皮素、 山奈酚、芸香苷、山奈酚-3-Ο-β-芸香糖苷、山奈酚-3-Ο-β-刺槐双糖苷及山奈 酚-3-0- β -D- (6-Ε-对羟基桂皮酰基)_葡萄糖苷等。采用木芙蓉叶加工得到中药，其黄酮类成份必须有着严格的控制，以满足医用 的需要，现有木芙蓉中黄酮类成份质量的检测方法为采用紫外分光光度法测定总黄 酮；采用RP-HLPC法测定木芙蓉提取物中芦丁含量，以芦丁标准品为对照进行反向高效 液相法测定Ubondpak C18色谱柱，柱温25°C，在370nm波长处紫外检测；流动相 0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液(含冰醋酸)与甲醇以体积比为73 27组成流动相， 流速为l.Oml/min，SPD-2ASUV检测器于波长370nm检测；芦丁与木芙蓉中其他成分基 线分离良好。或用ODS (150mmX 4.6mm, 5 μ m),流动相为甲醇-水-冰醋酸(甲醇 水冰醋酸体积比30 70 2.5)，检测波长254nm。采用HPLC法测定木芙蓉中槲皮甙的含量，色谱柱ODS C18 (4.6mm X 250mm, 10 μ m)；流动相为甲醇-水-冰乙酸(甲醇水冰乙酸体积比 45 55 1.5)流速lmL/min ；检测波长370nm。采用HPLC法测定木芙蓉中金丝桃苷的含量，Agilent Zorbax SB C18 (4.6mmX 250mm，5 μ m)，ODS预柱。流动相乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%冰醋 酸(乙腈甲醇四氢呋喃0.5%冰醋酸体积比为1 1 19.4 78.6)，流速l.OmL/ min，柱温30 °C,检测波长363nm。可以看出，采用上述的方法检测起来比较麻烦，不能同时定性定量检测几种黄 酮类成分；并且在同一高效液相色谱系统中，同时定性定量检测多种黄酮类成分的研究 未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，可以一次 定量检测出木芙蓉总黄酮中的槲皮苷，定性检测出木芙蓉总黄酮中的芦丁、金丝桃苷。本专利技术采用的第一种技术方案是，一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方 法，具体按照以下步骤进行步骤 1，供试品溶液的制备称取木芙蓉总黄酮0.5g，精密称定后加入蒸馏水适量，超声溶解，功率为 200w,频率为40kHz，时间为IOmin ；然后用水稀释至50ml，加入沸点60°C-90°C石油 醚萃取三次，每次50ml，石油醚液弃去，水液中再加入乙酸乙酯萃取三次，每次50ml， 合并乙酸乙酯液并减压蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至50ml，过0.45 μ m微孔滤膜，即 得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮苷对照品适量，加甲醇制成每ImL分别含 40.0 μ g、32.2 μ g、28.0 μ g 的混合溶液，即得；采用的检测仪器高效液相色谱仪、紫外检测器；采用的色谱检测条件按照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测 定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂XBridge Shield RP18 色谱柱，4.6mmX250mm，5ym ；流动相梯度为在0-10分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为85 15，在10-15分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为82 18，在15-20分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为81 19，在20-25分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为80 20，在25-28分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为79 21，在28-31分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为78 22，在31-33分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为77 23，在33-36分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为76 24，在36-38分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为75 25，在38-45分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为68 32，在45分钟后，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为65 35;检测波长370nm或254nm ；进样量20 μ L，理论塔板数按槲皮苷计算应不低于 3000 ；步骤 2，按照步骤1制得的供试品溶液、对照品溶液在步骤1的色谱检测条件下注入高效 液相色谱仪进行检测，根据槲皮苷的峰面积计算槲皮苷在总黄酮中所占的含量，根据供 试品溶液的各个峰的出峰时间定性检测出芦丁与金丝桃苷。本专利技术采用的第二种技术方案是，一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方 法，具体按照以下步骤进行步骤 1，供试品溶液的制备称取木芙蓉总黄酮2.0g，精密称定后分别依次加入占木芙蓉总黄酮质量8-10倍 量、5-8倍量，5-8倍量，浓度为80%的乙醇回流提取三次，合并三次滤液，滤液蒸干至 无醇味，加水稀释至20ml，再加入沸点60°C-90°C石油醚萃取三次，每次20ml，石油醚液弃去，在水液中加入乙酸乙酯萃取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，得 到残渣加甲醇溶解，定容至10ml，过0.45μιη微孔滤膜，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮苷对照品适量，加甲醇制成每ImL分别含 40.0 μ g、32.2 μ g、28.0 μ g 的混合溶液，即得；采用的检测仪器高效液相色谱仪、紫外检测器；采用的色谱检测条件按照中国药典2005版一部附录VI D高效液相色谱法测 定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂XBridge ShieldRP18 色谱柱(4.6mmX250mm，5 μ m)；流动相梯度为在0-10分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为85 15，在10-15分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为82 18，在15-20分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为81 19，在20-25分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为80 20，在25-28分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为79 21，在28-31分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为78 22，在31-33分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为77 23，在33-36分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为76 24，在36-38分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为75 25，在38-45分钟，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为68 32，在45分钟后，流速l.Oml/min，水与乙腈体积比为65 35;检测波长370nm或254nm ；进样量20 μ L，理论塔板数按槲皮苷计算应不低于 3000 ；步骤2，按照步骤1制得的供试品溶液、对照品溶液在步骤1的色谱检测条件本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种木芙蓉总黄酮中黄酮类化合物的检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤１，供试品溶液的制备：称取木芙蓉总黄酮０．５ｇ，精密称定后加入蒸馏水适量，超声溶解，功率为２００ｗ，频率为４０ｋＨｚ，时间为１０ｍｉｎ；然后用水稀释至５０ｍｌ，加入沸点６０℃－９０℃石油醚萃取三次，每次５０ｍｌ，石油醚液弃去，水液中再加入乙酸乙酯萃取三次，每次５０ｍｌ，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至５０ｍｌ，过０．４５μｍ微孔滤膜，即得供试品溶液；对照品溶液的制备：精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮苷对照品适量，加甲醇制成每１ｍＬ分别含４０．０μｇ、３２．２μｇ、２８．０μｇ的混合溶液，即得；采用的检测仪器：高效液相色谱仪、紫外检测器；采用的色谱检测条件：按照中国药典２００５版一部附录ＶＩＤ高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：ＸＢｒｉｄｇｅＳｈｉｅｌｄＲＰ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相梯度为：在０－１０分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为８５∶１５，在１０－１５分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为８２∶１８，在１５－２０分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为８１∶１９，在２０－２５分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为８０∶２０，在２５－２８分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为７９∶２１，在２８－３１分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为７８∶２２，在３１－３３分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为７７∶２３，在３３－３６分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为７６∶２４，在３６－３８分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为７５∶２５，在３８－４５分钟，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为６８∶３２，在４５分钟后，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，水与乙腈体积比为６５∶３５；检测波长３７０ｎｍ或２５４ｎｍ；进样量２０μＬ，理论塔板数按槲皮苷计算应不低于３０００；步骤２，按照步骤１制得的供试品溶液、对照品溶液在步骤１的色谱检测条件下注入高效液相色谱仪进行检测，根据槲皮苷的峰面积计算槲皮苷在总黄酮中所占的含量，根据供试品溶液的各个峰的出峰时间定性检测出芦丁与金丝桃苷。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邓亚利，王菊，孙平川，郭颖娟，
申请(专利权)人：陕西省中医药研究院汉唐制药有限公司，
类型：发明
国别省市：87
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