本发明专利技术提供了一种恩诺沙星残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法。本发明专利技术所述试剂盒包被有恩诺沙星抗原的酶标板，镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体、恩诺沙星抗体等。本发明专利技术还公开了应用上述试剂盒检测恩诺沙星残留的方法。本发明专利技术提供的检测恩诺沙星的试剂盒采用间接竞争时间分辨免疫分析技术，灵敏度高、稳定性好，大大简化了操作步骤和反应时间，减少了因操作复杂引起的误差，降低了成本，非常适合大量样品的筛查，具有重要的现实意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测
，涉及一种化学品污染残留的检测试剂盒及其制备 方法，具体涉及一种检测恩诺沙星残留的时间分辨免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
食品安全是关系到广大人民的日常生活的一件大事。食品安全问题主要包括食品 中的物理危害、化学危害和微生物危害等几个因素，其中化学危害主要包括兽药残留、农药 残留、重金属、环境有害物等。、联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)残留联合立法委员会将兽药残留定 义为动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及其代谢物，以及兽药有关的杂质。 兽药残留已成为困扰全世界食品安全的难题，也是各国用以设置贸易壁垒的最主要的手段之一。恩诺沙星(enrofloxacin，ENR)又名乙基环丙沙星，化学名为1_环丙基_7_(4_乙 基-1-哌嗪基)-6-氟-1，4- 二氢-4-氧代-3-喹啉羧酸。该药物具有广谱抗菌效果，对霉 菌和革兰氏阴性菌效力强，对革兰氏阳性和厌氧菌效果较弱；内服及肌肉注射吸收迅速，且 在体内代谢为同样具有抗菌活性的环丙沙星，代谢物生成与消除缓慢，分布广泛。恩诺沙星 分子结构式如下权利要求1.一种检测恩诺沙星残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒，其特征在于包括包被了恩 诺沙星抗原的酶标板、恩诺沙星抗体、镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体；所述镧系元素为 Eu3+、Tb3+、Dy3+或 Sm3+。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述恩诺沙星抗原是将恩诺沙星和载体 蛋白偶联得到；所述恩诺沙星抗体包括单克隆抗体、兔多克隆抗体或基因工程抗体。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于还包括恩诺沙星标准溶液、增强液、浓缩 洗涤液和样品稀释浓缩液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述恩诺沙星标准溶液是以浓度为 1000 μ g/L的恩诺沙星配成的浓度梯度为0、0. 1,0. 3,0. 9,2. 7,8. 1 μ g/L的恩诺沙星标准 品溶液。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述增强液包括β-二酮体、三辛基氧化 磷(TOPO)、Triton X-100、冰醋酸和pH值为2. 0 3. 2的邻苯二甲酸氢钾。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述浓缩洗液包括0.5 1. 5%吐温20 的磷酸盐缓冲液；所述浓缩稀释液为pH值7. 4 8. 0、0. 1 0. 25mol/L的磷酸盐缓冲液。7.根据权利要求1所述的时间分辨免疫分析试剂盒，其特征在于所述酶标板是96/40 孔酶标板，且空白板的荧光值低于1000。8.一种恩诺沙星的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)样品前处理；(2)用权利要求1 7任一项所述的试剂盒进行检测；(3)结果处理与分析。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于所述样品前处理为(1)蜂蜜称取样品3g，加入3mL蒸馏水，振荡均勻，加入6mL乙酸乙酯，振荡15min，5000r/min离 心lOmin，吸取上层2mL旋转蒸干，加入ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL PBS溶液复溶， 除去上层正己烷相，下层清夜50 μ L待测；或⑵禽蛋称取样品3g，加入乙腈-水溶液6mL，振荡10min，5000r/min离心lOmin，取上层^iiL, 加入2mL乙酸乙酯，振荡15min，5000r/min离心lOmin，吸取全部上层溶液，旋转蒸干，加入 ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL PBS溶液复溶，除去上层正己烷相，下层清夜50 μ L待 测；或⑶组织所述组织为肌肉、肝脏或肾脏；称取样品3g，加入PBS 3mL，振荡IOmin ；5000r/min离 心lOmin，取上层2mL加入等量正己烷，轻轻混勻，5000r/min离心lOmin，取下层清夜50 μ L待测。10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，置于20 环境中平衡不少于30min，将酶标板条 固定，做平行实验，按顺序编号；(2)在标准品孔加入50μ L标准溶液，样品孔加入50 μ L待测样品，然后每孔加入 50 μ L恩诺沙星抗体工作液，混勻；振荡反应；(3)步骤(2)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入100μ L铕标二抗工作液，振荡反应；(4)步骤C3)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入200μL增强液，混勻，避光室温轻拍 振荡；(5)用时间分辨免疫分析检测仪测定各孔荧光值；(6)根据标准溶液荧光值与浓度半对数做标准曲线，根据标准曲线与样品溶液荧光值 计算样品浓度。全文摘要本专利技术提供了一种。本专利技术所述试剂盒包被有恩诺沙星抗原的酶标板，镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体、恩诺沙星抗体等。本专利技术还公开了应用上述试剂盒检测恩诺沙星残留的方法。本专利技术提供的检测恩诺沙星的试剂盒采用间接竞争时间分辨免疫分析技术，灵敏度高、稳定性好，大大简化了操作步骤和反应时间，减少了因操作复杂引起的误差，降低了成本，非常适合大量样品的筛查，具有重要的现实意义。文档编号G01N33/577GK102135534SQ20101026900公开日2011年7月27日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日专利技术者孙远明, 杨金易, 沈玉栋, 王弘, 肖治理, 雷红涛 申请人:华南农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种检测恩诺沙星残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒，其特征在于包括包被了恩诺沙星抗原的酶标板、恩诺沙星抗体、镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体；所述镧系元素为Ｅｕ３＋、Ｔｂ３＋、Ｄｙ３＋或Ｓｍ３＋。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙远明，雷红涛，杨金易，沈玉栋，王弘，肖治理，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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