增强患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中，沿非淀粉样蛋白生成途径加工淀粉样前体蛋白的方法，以及通过减少βＡ４在患有或有发展成阿尔茨海默症危险之患者中的生成来治疗或预防阿尔茨海默症的方法，包括给患者施用有效非毒性量的乙腈类化合物；所述化合物在制备用于所述方法之药物中的用途以及用于所述方法的组合物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及增强淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径加工的方法并涉及用于所述方法的化合物。淀粉样前体蛋白(APP)是可以在数种途径中加工的膜组成糖蛋白。用β和γ分泌酶(secretase)裂解最终导致β淀粉样蛋白(βA4)的释放，它们在患阿尔茨海默症(AD)的个体脑中沉积。或者用α分泌酶裂解又会导致非淀粉样蛋白生成途径的APP片段的释放。已经表明毒蕈碱激动剂卡巴胆碱、乌拉胆碱、AF-102B和xanomeline通过激活ml和/或m3受体亚型可以提高非淀粉样蛋白生成途径的APP片段的生成(Nitsch等人，1992，Buxbaum等人，1992，1994，Haring等人，1994，Growdon1994)。EP-A-0392803(Beecham Group p.l.c)公开了某些氮杂双环化合物，它们通过在中枢神经系统内毒蕈碱受体的作用可以增强乙酰胆碱的功能，这些化合物包括-α-(甲氧基亚氨基)-α-(1-氮杂双环辛-3-基)乙腈(化合物(I))和可药用盐，并公开了制备这些化合物的方法。WO-93/17018公开了其它制备化合物(I)的方法。现已发现化合物(I)提高淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径的加工，因此通过降低βA4的生成而在阿尔茨海默症的治疗中有潜在的用途。根据本专利技术，提供了化合物(I)或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物在患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中用于提高淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径的加工。本专利技术还提供了化合物(I)或其可药用盐通过降低βA4的生成而治疗或预防阿尔茨海默症的用途。本专利技术的另一方面还提供了在患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中提高淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径加工的方法，包括给患者施用有效非毒性量的化合物(I)或其可药用盐。本专利技术还提供了在患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中通过降低βA4的生成而治疗或预防阿尔茨海默症的方法，包括给患者施用有效非毒性量的化合物(I)或其可药用盐。化合物(I)可以与强酸形成酸加成盐。术语可药用盐包括溶剂化物和水合物。优选在药物组合物中提供化合物(I)，所述组合物含有化合物(I)或其可药用盐和可药用载体。所述组合物可以是片剂，胶囊，粉末，颗粒，锭剂，栓剂，可再配制的粉末或液体制剂如口服或无菌非肠道溶液或悬浮液。为了使给药均匀，优选该组合物为单位剂型。用于口服的单位剂量形式可以是片剂和胶囊，而且可含有常规赋形剂如粘结剂如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘油；压片润滑剂如硬脂酸镁；崩解剂如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠或微晶体纤维素；或可药用湿润剂如月桂基硫酸钠。用常规的混合，填充，压片等方法可以制备固体口服组合物。可以用反复混合操作将活性剂分散在施用大量填充剂的那些组合物中。当然，所述操作是本领域常规的。采用常规药物实践中熟知的方法，特别是用肠溶包衣可以将片剂包衣。口服液体制剂可以是例如乳液、糖浆或酏剂形式，或可以作为在使用前与水或其他适宜载体再配制的干燥产品。所述液体制剂可以含有常规添加剂如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧基甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化的可食用脂肪；乳化剂，如卵磷脂，脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水载体(可包括可食用油)，例如杏仁油，分馏的椰子油，油酯如甘油、丙二醇或乙醇酯；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；如果需要还可以加入常规的调味剂或着色剂。对于非肠道给药，用所述化合物和无菌载体，并根据所用的浓度制备液体单位剂量形式，可以将化合物悬浮或溶解在所述载体中。在制备溶液时，可以将所述化合物溶解在注射用水中，在装到适宜的小瓶或安瓿中前过滤灭菌，然后密封。有利的是，可将佐剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解在载体中。为了提高稳定性，在装到小瓶中后，可以将所述组合物冷冻，在真空下除去水。用基本上相同的方法制备非肠道悬浮液，不同的是将所述化合物悬浮在载体中而不是将其溶解于载体中，而且不能通过过滤灭菌。在悬浮于无菌载体中前，通过与环氧乙烷接触可以将所述化合物灭菌。有利的是，在所述组合物中可以包含表面活性剂或湿润剂以有利于所述化合物的均匀分散。根据给药方法，所述组合物可以含有0.1％-99％重量，优选10-60％重量的活性物质。本专利技术还提供了如上定义的药物组合物，该组合物用于在患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中提高淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径加工。本专利技术还提供了如上定义的药物组合物，该组合物用于通过降低βA4的生成治疗和/或预防阿尔茨海默症。通常所述化合物的剂量可以随疾病的严重程度、患者的体重以及所述化合物的相对效力而有所不同。然而，一般推荐的适宜单位剂量可以是5-300μg，例如10-200μg，所述单位剂量每天可以给药一次以上，例如一天两次或三次，这样每天的总剂量在约30-600μg的范围内，所述治疗可以延续许多年。在上述表明的剂量范围内，化合物(I)没有不可接受的毒性作用。用下列药理学资料来说明本专利技术。药理学资料淀粉样前体蛋白作用于CHO细胞用Western印迹技术研究在用人毒蕈碱受体转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，试验化合物对APP加工的影响。用激光密度测量仪扫描免疫反应带对印迹作定量分析。材料从N.I.M.H.(Md.USA)得到用人毒蕈碱受体(Bonner1988)稳定转染的CHO细胞。组织培养基和试剂来自Gibco BRL(苏格兰)。一般的实验室试剂来自Signa化学公司(Dorset)。在EP-A-0392803中，将-α-(甲氧基亚氨基)-α-(1-氮杂双环辛-3-基)乙腈一盐酸盐描述为草酸盐。使用下列初级抗体识别APP氨基末端表位的22C11小鼠单克隆抗体(Boehringer Mannheim，Sussex，UK)，该抗体可识别APP的氨基酸末端表位；抗大鼠βA4 1-25的抗βA4 1-25兔多克隆抗体；抗APP羧基末端表位(APP770的氨基酸751-770)的Ab54兔多克隆抗体。二级抗体是抗兔或抗小鼠IgG(Sigma化学公司，Dorset，UK)接着兔或小鼠过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)(Sigma化学公司，Dorset，UK)。所用的底物是增强的化学发光试剂盒(ECL)(RPN2106，Amersham，Bucks，UK)，用Hyperfilm-ECL(Amersham，Bucks，UK)监测免疫反应带。方法细胞培养使用人毒蕈碱受体亚型hm1、hm2、hm3和hm4转染的CHO细胞在组织培养皿(直径10cm)上，于含核糖核苷和脱氧核糖核苷、10％胎牛血清、青霉素100单位/ml和链霉素100单位/ml的α基本培养基(αMEM)中生长至融合。用试验化合物处理细胞按上述使细胞生长至融合，然后除去含血清的培养基，接着用5ml无血清培养基将细胞洗涤两次。然后用5ml含适宜浓度试验化合物的无血清培养基处理细胞，在37℃保温三小时。收集条件培养基，放在冰上，加入蛋白酶抑制剂(1mM苯基甲基磺酰氟(PMSF)，5mM EDTA，1ug/ml亮肽素)。然后在3000G和4℃，将培养基离心15分钟，除去细胞碎片。取出上清液，用Centrico本文档来自技高网...
【技术保护点】
［Ｒ－（Ｚ）］－α－（甲氧基亚氨基）－α－（１－氮杂双环［２．２．２］辛－３－基）乙腈或其可药用盐在制备用于患有或有发展成阿尔茨海默症危险的患者中，增强淀粉样前体蛋白沿非淀粉样蛋白生成途径加工之药物方面的应用。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：RE马克威尔，J霍金斯，CW格雷，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
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