本发明专利技术提供了与细胞凋亡有关的疾病的预防和／或治疗药，该预防和／或治疗药含有巴曲酶作为有效成分。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于含有巴曲酶(batroxobin)作为有效成分的、预防和/或治疗与细胞凋亡(apoptosis)有关的疾病的药剂。细胞凋亡是由Kerr、Wyllie’、Currie等人提出的细胞死的过程或方式之一(参见Brit，J.Cancer，26，239(1972))。在胚胎学中现已知道，在胚胎发生的一定时期在一定的地方必然发生细胞死，在随着发生的程序而产生的细胞死的意义上也被称作“程序细胞死”。因此，在形态学上与必要的细胞受到障碍而坏死的过程(necrosis)有所区别。作为细胞凋亡的形态学的特征，可以举出与周围的细胞缺少接触、细胞质的浓缩化、与核酸内切酶的活性有关的染色质的凝缩和核凝缩、以及核的分节化等，此外还可以观察到细胞表面的微绒毛的消失以及细胞表面的平滑化(细胞表面的水泡形成membrane blebbing)等。另外，通过核酸内切酶活性还可以观察到DAN片段化的现象，细胞本身形成被称作凋亡小体的细胞片段，所形成的凋亡小体迅速被周围的细胞或巨噬细胞等蚕食分解，产生细胞凋亡。现已知道，生物体通过细胞增殖和细胞死亡的平衡而自动调节、维持动态平衡(homeostasis)。以往，人们对细胞增殖的控制研究得较多，但对细胞死亡的控制则几乎毫无所知。众所周知，细胞凋亡是由生理活性物质(神经生长因子(NGF)或集群刺激因子(CSF)等)的缺乏、凋亡诱导因子(肿瘤坏死因子(TNF)和淋巴细胞毒素等的因子以及C-myC、p-53基因产物等)诱导的(参见Cell，69，119(1992)；Nature，362，849(1993))，另一方面，细胞凋亡受到凋亡抑制因子(bC1-2等)的抑制(参见Nature，359，552(1992)；NATure，359，554(1992))等。最近，人们已经知道，这种细胞凋亡在多种疾病中都起到重要作用，并进行了各种试验，试图通过诱导或控制细胞的凋亡来诊断、预防和治疗这些疾病，引起世人的关注(参见Science，267，1456(1995))。另外，现在，在局部缺血后的神经细胞死亡中海马迟发性神经细胞死亡由于与细胞凋亡有关而受到人们的注意。即，将沙土鼠或大鼠的两侧颈动脉短时间(～10分钟)闭塞后再开通，2天(48小时)以后观察到两侧海马CA1区域的细胞死，经过4天(96小时)以上时，细胞缩小、呈树状突起，观察到空包，在一周后完全消灭。脑是全身的组织中耗氧量最高的组织，而且也是消耗大量能量的部位。因此，对于局部缺血来说是一个薄弱的部位，容易因神经细胞坏死而引起脑功能障碍。神经细胞死亡在发育过程中可以明显地观察到，细胞在产生之后不断地死亡。据报导，在人的大脑皮层中，每天大约有10万个神经细胞死亡。神经细胞是不能再生的，因此，如果由于某种障碍而过度死亡，将导致功能障碍。特别成问题的是由于局部缺血、药物、应激反应或病毒等而引起的神经细胞死亡，弄清楚其机理对于研制脑缺血性障碍的治疗药剂或因AIDS引起的神经障碍等多种神经疾病的治疗药剂和确定治疗方法以及了解神经细胞长期生存能力的线索都是致关重要的。另外，最近，细胞凋亡与包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病等在内的神经变性疾病的关系也受到人们的关注，弄清发病的机理以及研制预防的方法和治疗药剂成为日益重要的课题。本专利技术的目的是，提供通过抑制细胞凋亡来有效地预防和/或治疗与凋亡有关的疾病的治疗药。在此之前，本专利技术人发现，巴曲酶在局部缺血再灌流时可以有效地预防和/或治疗心脏病、脑疾病，并且就此而申请了专利(特愿平7-161665)。该专利申请是基于发现巴曲酶可以抑制细胞受伤害而死亡的过程(坏死)而完成的。如上所述，“细胞凋亡”与“坏死”在形态学上是完全不同的，在上述专利申请中完全没有提及巴曲酶与抑制细胞凋亡的关系。本专利技术人对巴曲酶的药理作用进一步进行了详细研究，结果发现巴曲酶具有抑制细胞凋亡的效果，从而完成了本专利技术。本专利技术中的巴曲酶是“由Bothrops atrox moojeni蛇毒提取的凝血酶样酶”，作为市售的制剂例如可以举出东菱药品工业(株)制造的巴曲酶制剂。本专利技术的与细胞凋亡有关的疾病的预防和/或治疗药，能抑制凋亡，可以用来作为预防和/或治疗这些与细胞凋亡有关的疾病。上述与细胞凋亡有关的疾病例如可以举出局部缺血性疾病(再灌流障碍除外)、神经障碍疾病、末梢神经障碍、再生不良性贫血、肝障碍和HIV感染症等。上述的局部缺血性疾病例如可以举出心肌梗塞、心绞痛、淤血性心力衰竭和心律不齐等心脏病、中风、蛛网膜下出血、脑梗塞和脑血栓等脑血管疾病等。另外，上述的神经变性疾病例如可以举出阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化症、色素性网膜炎和小脑变性等。每1ml巴曲酶(由Bothrops atrox moojeni蛇毒提取的凝血酶样酶)制剂中的成分及含量如下。巴曲酶(主要成分)10BU氯丁醇(防腐剂) 3mG明胶水解物(稳定化剂)0.1mG氯化钠(等张化剂)9mG注射用蒸馏水 总量1ml本专利技术的巴曲酶的用药量，根据病症而有所不同，一般地说，成人每天一次、1-20巴曲酶单位(Batroxobin Unit，简称BU)，根据症状适当增减。最好是将其适当稀释，点滴静脉内给药、静脉内给药、动脉内给药或者局部给药。这里所说的巴曲酶单位，是表示巴曲酶的酶活性量的单位，在37℃的温度下，标准人一枸橼酸血浆0.3ml中添加0.1ml巴曲酶溶液时，在19.0±0.2秒内使血浆凝固的活性量规定为2BU。巴曲酶的急性毒性试验是通过将其给小鼠、大鼠、兔子和狗静脉内给药来进行。LD50(BU/kG)列举如下。动物种LD50值(BU/kG)小鼠(DDY系) 192-210大鼠(WISTAR系)105-110兔子(NW种)＞300狗(杂种) 190-208下面通过实施例具体地说明本专利技术，但本专利技术不受下列实施例的限制。实施例由巴曲酶产生的在大鼠脑局部缺血再灌流障碍模式中的细胞凋亡抑制效果。试验方法使用51只体重250-300G的Wistar系雄性大鼠，将其分为未处理组6只、假手术组9只、局部缺血对照组18只和巴曲酶给药组18只。按照Smith等人的方法(参见Acta Neurol.Scand，69，385(1984))，将两侧的总颈动脉闭塞，通过放血将平均动脉压保持在50mmHG.使总颈动脉闭塞10分钟后，将2ml生理食盐水给局部缺血对照组用药，进行再灌流，在24、48、96小时后将它们断头致死。对于巴曲酶给药组，将2ml生理食盐水稀释巴曲酶而得到的溶液、按1.6BU/kG的剂量静脉内给药。假手术组不进行总颈动脉闭塞和放血，除此之外其它操作与局部缺血组同样进行。未处置组不进行任何处置，直接断头、致死。细胞凋亡的观察使用“In situ细胞死亡检测药盒AP”(BoehringerMannheim公司制造)进行。即用4％的多聚甲醛(Sigma公司制造)将冷冻组织切片固定，用PBS洗净3次，用TUNEL(TdT using nick endlabeling)标记DAN链分解物。在37℃下放置45分钟后，用PBS洗净，添加CONVERTER-AP，在37℃下处理60分钟。按照规定方法脱水、透明化、封入，用光学显微镜观察。凋亡细胞的染色质在核膜周围凝缩成新月形，本文档来自技高网...
【技术保护点】
与细胞凋亡有关的疾病的预防和／或治疗药，其特征是，含有巴曲酶作为有效成分。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：李庆有，
申请(专利权)人：东菱药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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