辅酶NAD及其组合物在细胞保护药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开辅酶ＮＡＤ及其组合物在细胞保护药物中的应用。ＮＡＤ能够促进人体内红细胞的生成，与化疗同时应用可改善贫血状态。该酶能预防正常组织细胞免受化学和辐射损伤以及凋亡产生。ＮＡＤ处理的Ｈ２２细胞具有较强免疫原性，能激发机体产生特异性抗肿瘤免疫，是一种良好的肿瘤疫苗，其抗肿瘤效应是由表达在肿瘤细胞膜上的ＨＳＰ７０蛋白所介导。ＮＡＤ有增强胃粘液屏障，促进溃疡愈合作用。ＮＡＤ有抗氧化和抗衰老，保护细胞膜并预防细胞的坏死和突变以及防治肝纤维化作用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开辅酶NAD及其组合物在细胞保护药物中的应用，辅酶NAD及其组合物可用于骨髓的保护，放化疗的保护，提高放化疗治疗强度，改善患者生存质量，提高免疫功能，用于促进溃疡愈合以及防治肝纤维化。肿瘤患者的造血机制和造血环境存在着缺陷和紊乱，因此，大部分患者存在着不同程度的贫血，而化疗又能加重贫血。我们既往研究表明，作为辅酶NAD能够促进人体内红细胞的生成，与化疗同时应用可改善贫血状态，保证化疗顺利进行，提高生存质量。包括肿瘤在内的任何影响造血环境及血细胞生成因子的疾病都可以造成血细胞减少，红细胞减少则造成贫血。肿瘤本身及与肿瘤相关的并发症都可以直接或间接地导致贫血。细胞毒性化疗药物对红细胞生成过程有许多负面影响，主要包括多能干细胞坏死、红细胞前体细胞坏死、红细胞前体细胞细胞周期的阻滞和延迟、EPO的水平下降或功能减退、成熟红细胞的氧化、骨髓发育不良及化疗药物相关性水钠潴留等。在化疗药物中，环磷酰胺、马法兰及其它烷化剂等非细胞周期特异性药物的使用与贫血的关系最为明显，特别是当大剂量长期使用这些药物时可以导致多能干细胞的进行性损耗，烷化剂及VP16和VCR等的长期使用还可以导致骨髓发育不良。化疗药物的上述作用经常导致骨髓修复障碍，进而出现长期贫血。化疗药物可以通过抑制多能干细胞及红细胞前体细胞的增殖造成贫血，某些化疗药物通过氧化效应导致多能造血干细胞、红细胞前体细胞及成熟红细胞的氧化坏死，PDD、MMC等化疗药物可以造成肾脏损伤或微血管内凝血导致贫血。化疗药物还可以导致体内EPO生成减少或破坏EPO功能。目前所知，抗癌药物、放射线和化学战剂对肾脏、肝脏、神经系统和粘膜上皮等均有毒性。这些毒性限制抗癌药物和放疗的治疗强度，明显地影响生存质量及威胁生命。改善治疗的方法包括提高恶性细胞的对化疗的敏感性或降低化疗药物对正常组织的毒性，发展保护正常组织(不保护恶性细胞)免受损伤的药物。由于抗肿瘤药物对靶细胞的非特异性，正常组织细胞亦受到杀伤，因此如何避免化疗中正常细胞受损伤和明确参与修复DNA损伤的机制具有重要的临床治疗意义。近年来国内外研究表明辐射、生物和化学毒素等均能引起细胞DNA损伤，诱导人正常细胞发生凋亡，造成机体正常生理功能紊乱和破坏。许多现代战伤的病理机制涉及异常的细胞凋亡/死亡过程，其诱发的缺血、缺氧、中毒及氧化应激等可导致心、脑、肝等多种组织细胞的凋亡和坏死，并继而引起多种并发症的发生，基于上述凋亡线粒体机制的揭示，人们正从新的角度探寻有效控制细胞凋亡/死亡的战略，如Ca2+螯合剂，自由基清除剂及环孢素A等能够阻抑线粒体渗透性转换抑制细胞死亡。国外对于急性放射病的预防，主要采用化学药物、中草药、生物制剂等基抗放用作用机制也互不相同，例如保护靶细胞分子的巯基，清除自由基，稳定DNA结构等，虽体外实验和动物模型的研究已发现为数颇多的有效辐射防护剂，但由于药物毒性等原因很少用于人体。NAD是细胞能量代谢所必需的辅酶，在启动生物体氧化还原反应和调节细胞膜糖蛋白受体表达起重要作用。目前国内外尚未见辅酶NAD用于抗细胞损伤的研究报道。70年代初人们发现，用抗肿瘤药物处理的肿瘤细胞去免疫动物，能使其获得特异性的抗肿瘤免疫。丝裂霉素C(MMC)是目前临床上常用的一种抗肿瘤药物，而NAD是细胞能量代谢所必需的辅酶，不仅能直接作用于肿瘤细胞核中的DNA，起抑制或杀伤肿瘤的作用，而且能提高肿瘤细胞的免疫原性，增强机体对其的杀伤活性，但对后者所涉及的分子基础目前尚不清楚。有文献报道，HSP70蛋白可携带多种抗原多肽，起到抗原提呈分子的作用。而多种刺激因素，包括化疗药物，能诱导和改变肿瘤细胞浆内及胞膜HSP70蛋白的合成及分布。因此，NAD药物单独或联合热休克处理的H22细胞，其胞膜HSP70蛋白表达的变化以及药物处理后的H22细胞免疫C57BL/6小鼠抗肿瘤的保护效应，为进一步阐明抗肿瘤药物，尤其是NAD处理肿瘤细胞后提高免疫原性的机理及新型瘤苗的研制提供理论依据。消化性溃疡易复发，难防止。因此，消化性胃溃疡的治疗关键就在于防止复发。大鼠乙酸胃溃疡具有反复再发的特点，且与人的胃溃疡在形态结构上十分相似。选用此模型，用NAD治疗30d，探讨NAD的近期疗效和停药后的远期效果以及与胃粘膜表面凝胶的厚度和溃疡边缘胃粘膜细胞增殖的关系。约有5％～10％的人胃粘膜反复发生溃疡。对抗消化性溃疡药物的评价既要重视近期疗效，又要重视防止复发的远期效果。大鼠乙酸胃溃疡具有反复再发的特点，且与人的胃溃疡在形态结构上十分相似。1969年Takagi复制出大鼠乙酸胃溃疡模型，其自然愈合过程是溃疡制成后的d1～d30溃疡急速愈合而UI迅速降低，此时为溃疡的急性期；d31后溃疡愈合逐渐缓慢而溃疡UI缓慢降低，至d80 UI最低，此时为缓慢愈合期；d81后溃疡UI逐渐升高，d120～d140后UI升高明显，此时复发率也最高，而后又逐渐降低，到d160又达到最低水平。d81～d160为复发期。NAD具有显著的抗大鼠实验性胃溃疡的作用，并在临床上取得了明显的疗效，但对溃疡的复发尚未进行深入的研究，作者选用大鼠乙酸胃溃疡模型，用NAD治疗30d，探讨NAD治疗急性期大鼠乙酸胃溃疡的疗效和停药后防止复发的远期效果。结果表明NAD有促进溃疡愈合、防止溃疡复发的作用，且优于西咪替丁。NAD能促进溃疡边缘胃粘膜细胞DNA的合成和逆转细胞凋亡，形成新生的胃粘膜细胞，使溃疡得以修复，同时促进了胃粘膜细胞分泌粘液，加强了二道屏障防御有害因子的作用。肝纤维化是由于肝细胞损伤，肝脏细胞外间质(ECM)尤其是胶原的合成增加，降解减少或二者兼有所造成的。迄今尚无特效的抗肝纤维化药物。NAD在细胞质中有抗氧化作用，清除脂质过氧自由基和羟自由基，使细胞免受自由基的破坏，从而保护细胞膜并预防细胞的坏死和突变。本实验旨在评价NAD对实验性大鼠肝纤维化的防治作用。NAD抗纤维化作用机制可能为①能清除脂质氢过氧自由基和羟自由基，从而保护细胞膜功能及预防细胞的坏死和突变。NAD缺乏可导致肝组织中(GPX)活性降低，活化分子氧产生超氧离子(O)，使内质网膜上的多价不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，从而破坏肝细胞膜性结构，导致肝功能障碍，肝细胞破坏纤维组织形成。补NAD后(GPX)酶活性加强，对肝细胞损伤有保护作用，从而预防和治疗肝纤维化。②通过免疫系统(B-淋巴细胞，T-淋巴细胞，巨噬细胞等)中的GPX，控制H2O2的释放来调节杀伤作用和保护自身。NAD的抗大鼠肝纤维化作用与秋水仙碱相似，提示NAD是抗肝纤维化的有效药物。本专利技术的目的是提供可作为一种细胞损伤的保护剂，用于细胞损伤修复，调节免疫功能，促进溃疡愈合以及防治肝纤维化的有效药物。我们的研究表明NAD能预防正常组织细胞免受化学和辐射损伤，细胞DNA损伤与凋亡产生相关。该酶能阻断凋亡分子Caspase-3和Caspase-8表达，阻止细胞色素C从线粒体释放到胞浆，抑制凋亡时线粒体膜电位下降和游离钙离子升高，降低ROS释放。辅酶NAD能促进正常细胞增殖生长，并能通过上调bcl-2基因表达和下调p53基因表达抑制凋亡。NAD通过影响凋亡相关基因c-myc、c-erbB-2、c-fos、fas和cyclin的表达保护细胞DNA损伤本文档来自技高网...

【技术保护点】
辅酶ＮＡＤ及其组合物在细胞保护药物中的应用特征在于：（１）能保护造血干细胞，即能刺激造血又能保护造血干细胞免受放射和化疗毒性损伤，是骨髓的保护因子。（２）能保护正常组织细胞免受化学和辐射损伤，利用正常组织和肿瘤组织之间ＮＡＤ浓度的差 别，可以达到正常组织细胞免受放化疗损伤而又不影响放化疗最佳疗效的目的，用于肿瘤患者放化疗毒性防治药物。（３）ＮＡＤ是一种良好的免疫增强剂，能激发机体产生特异性抗肿瘤免疫。（４）ＮＡＤ有增强胃粘液和黏膜屏障，降低幽门螺杆菌感染发生率， 促进溃疡愈合作用。（５）ＮＡＤ有抗氧化和抗衰老作用，保护细胞膜并预防细胞的坏死和突变以及能防治肝纤维化。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，徐萌，
申请(专利权)人：第一军医大学珠江医院，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]