一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗，其是用鸡新城疫病毒ＺＭ１０株、传染性支气管炎病毒Ｍ４１株和禽流感病毒Ｈ９亚型Ｓ２株分别接种易感鸡胚，收获感染鸡胚液；减蛋综合征病毒ＡＶ－１２７株接种易感鸭胚，收获感染鸭胚液；将收获的病毒液浓缩，经灭活后，再与油佐剂混合乳化制成。本发明专利技术提供的四联疫苗可用于预防鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（Ｈ９亚型）病毒引起的疾病，达到一针防四病的效果，减少免疫成本和免疫应激反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗。
技术介绍
一直以来禽流感和新城疫都困扰着养殖业的发展，尤其近年来高致病性禽流感的爆发，以及低致病性禽流感的长期存在，都已经给广大养殖户带来了巨大的经济损失，而禽流感病毒本身的高异变性，更给我们增加了防控的难度。同时鸡群常见的传染性支气管炎和减蛋综合征也对养殖的影响非常大，一般情况下，必须同时接种以上4种疾病的单独的疫苗来预防这些疾病在鸡群中的爆发，免疫成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可用于同时预防鸡四种疾病的四联灭活疫苗。为达到上述目的，本专利技术的技术方案提供一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗，其是用鸡新城疫病毒ZM10株、传染性支气管炎病毒M41株和禽流感病毒H9亚型S2株分别接种易感鸡胚，收获感染鸡胚液；减蛋综合征病毒AV-127株接种易感鸭胚，收获感染鸭胚液；将收获的病毒液浓缩，经灭活后，再与油佐剂混合乳化制成。上述四联灭活疫苗，所述收获的病毒液中鸡新城疫病毒ZM10株的病毒液每0.1ml病毒含量≥108.0EID50，传染性支气管炎病毒M41株的病毒液每0.1ml病毒含量≥106.0EID50，减蛋综合征病毒AV-127株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.0EID50，禽流感病毒H9亚型S2株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.5EID50。上述四联灭活疫苗，所述收获的病毒液浓缩至原体积的1/4后，按ZM10株占35％、M41株占25％、AV-127株占15％、S2株占25％的体积比例混合后乳化。上述四联灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：(1)制备生产用毒种：将鸡新城疫病毒ZM10株毒种、鸡传染性支气管炎M41株毒种和禽流感病毒H9亚型S2株毒种分别用灭菌生理盐水稀释，尿囊腔接种9～11日龄SPF鸡胚，每胚0.1～0.2ml，置36℃～37℃继续孵育，24小时前死亡的鸡胚弃去，此后每6～8小时照蛋1次，死亡的鸡胚随时取出，直至48～96小时，取出全部鸡胚，气室向上直立，置于2～8℃冷却12～24小时；然后无菌收获鸡胚尿囊液，取检验无菌且对1％鸡红细胞凝集价≥9log2的鸡胚液混合作为鸡新城疫病毒ZM10株生产用毒种、检验无菌且病毒含量≥106.0EID50/0.1ml、对1％鸡红细胞凝集试验为阴性的鸡胚液混合作为鸡传染性支气管炎M41株生产用毒种、以及检验无菌且对1％红细胞凝集价在8log2以上的鸡胚液混合作为禽流感病毒H9亚型S2株生产用毒种；将鸡减蛋综合征AV-127株毒种用灭菌生理盐水比例稀释，尿囊腔接种10日龄易感鸭胚，每胚0.1ml，置36℃～37℃继续孵育，24小时前死亡的鸭胚弃去，此后每6～8小时照蛋1次，死亡的鸭胚随时取出，直至120小时，取出全部鸭胚，气室向上直立，置于2～-->8℃冷却12～24小时；然后无菌收获鸭胚尿囊液，取检验无菌且对1％鸡红细胞凝集价≥14log2的鸭胚液混合作为鸡减蛋综合征AV-127株生产用毒种；(2)孵化制苗用种蛋：采用健康易感鸡种蛋和易感鸭种蛋，消毒后孵化，相对湿度50％～60％，每2小时翻蛋一次。(3)制备制苗用病毒液：取上述生产用毒种，用灭菌生理盐水稀释，尿囊腔内接种10～11日龄易感鸡胚或鸭胚，每胚0.1ml，接种后封闭针孔，置36～37℃孵育；鸡胚接种后，24小时照蛋1次，死亡的鸡胚弃去；此后，每6～8小时照蛋1次，死亡的鸡胚随时取出，直至48～120小时，全部取出，气室向上直立，置2～8℃冷却12～24小时；将冷却后的鸡胚或鸭胚取出，先以碘酒，后以75％酒精消毒气室部位的卵壳，然后以无菌方法剔除气室部位蛋壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜(勿使卵黄破裂)吸取鸡胚液混合后为病毒液；(4)浓缩病毒液：将步骤(3)制得的病毒液除去大颗粒物质澄清，超滤浓缩至原体积的1/4；(5)灭活病毒液：将浓缩后的各种病毒液，分别加入10％甲醛溶液，使其终浓度为0.2％，边加边充分摇匀，置37℃灭活16小时；(6)制备油乳剂灭活疫苗：油相：注射用白油94份和司本-80 6份混合后，加入2％硬脂酸铝，高压灭菌后备用。水相：将浓缩的病毒液，按比例混合ZM10株占35％、M41株占25％、AV-127株占15％、S2株占25％。吐温-80灭菌后在乳化时加到疫苗水相之中，加入量占水相体积的4％，充分振摇使吐温完全溶解为止。油相3份：1份水相乳化。在乳化终止前加入防腐剂。防腐剂为硫柳汞配成1％的溶液，无菌过滤后备用。1％硫柳汞的加入量占疫苗总体积的1％，最终浓度为万分之一。(7)分装：将乳化得到的疫苗分装于灭菌疫苗瓶内，密封，2～8℃保存。上述制备方法，所述步骤(3)制得的病毒液中，鸡新城疫病毒ZM10株的病毒液每0.1ml病毒含量≥108.0EID50，传染性支气管炎病毒M41株的病毒液每0.1ml病毒含量≥106.0EID50，减蛋综合征病毒AV-127株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.0EID50，禽流感病毒H9亚型S2株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.5EID50。上述制备方法，所述步骤(3)中各毒种的稀释倍数优选为：新城疫ZM10株生产用毒种进行10000倍稀释，传染性支气管炎病毒M41株生产用毒种进行100倍稀释，减蛋综合征病毒AV-127株生产用毒种进行1000倍稀释，禽流感H9亚型S2株生产用毒种进行1000倍稀释接种鸡/鸭胚。上述制备方法，所述步骤(3)中各毒种接种鸡胚或鸭胚后孵育的时间分别优选为：新城疫病毒ZM10株为96小时、M41株病毒为48小时、AV-127株为120小时及S2株病毒为96小时。上述制备方法，所述步骤(3)中各毒种接种的鸡胚或鸭胚分别优选为：新城疫病毒ZM10株为10日龄，传染性支气管炎病毒M41株为11日龄，减蛋综合征病毒AV-127株为10日龄，禽流感病毒S2株为10日龄。上文所述的SPF鸡是指生长在屏障系统或隔离器中、无国际、国内(尤其是国内)-->流行的主要鸡传染病病原的鸡群，其所产蛋即为SPF种蛋。SPF鸡胚对各种病原微生物有敏锐的感受性，且重复性好，是研制人和禽等多种生物制品的高标准原材料。上述技术方案具有如下优点：上述四联疫苗的制备方法简单，效果良好，经过多批次的动物实验和田间试验，结果表明：疫苗对鸡群无不良反应，鸡群在免疫后1个月测HI抗体水平，几何平均滴度ND为10.8～11.5log2，IB为8.8～9.2log2，EDS为9.7～10.5log2，禽流感H9为10.0～11.0log2。鸡群开产后产蛋性能良好，产蛋量与蛋壳质量正常，在6个月观察期内，免疫组死淘率较同群未免疫四联苗对照组降低0.5％～2.4％，平均每只鸡多产蛋2～7枚。上述制备方法制备的“鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感(H9亚型)四联灭活疫苗(ZM10株+M41株+AV-127株+S2株)”质量确实、可靠，符合要求。本专利技术提供的四联疫苗可用于预防鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感(H9亚型)病毒引起的疾病，达到一针防四病的效果，减少免疫成本和免疫应激反应。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1：毒种1.1毒种来源  制造本品的鸡新城疫毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗，其特征在于，用鸡新城疫病毒ＺＭ１０株、传染性支气管炎病毒Ｍ４１株和禽流感病毒Ｈ９亚型Ｓ２株分别接种易感鸡胚，收获感染鸡胚液；减蛋综合征病毒ＡＶ－１２７株接种易感鸭胚，收获感染鸭胚液；将收获的病毒液浓缩，经灭活后，再与油佐剂混合乳化制成。

【技术特征摘要】
1.一种用于预防鸡疾病的四联灭活疫苗，其特征在于，用鸡新城疫病毒ZM10株、传染性支气管炎病毒M41株和禽流感病毒H9亚型S2株分别接种易感鸡胚，收获感染鸡胚液；减蛋综合征病毒AV-127株接种易感鸭胚，收获感染鸭胚液；将收获的病毒液浓缩，经灭活后，再与油佐剂混合乳化制成。2.如权利要求1所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述收获的病毒液中鸡新城疫病毒ZM10株的病毒液每0.1ml病毒含量≥108.0EID50，传染性支气管炎病毒M41株的病毒液每0.1ml病毒含量≥106.0EID50，减蛋综合征病毒AV-127株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.0EID50，禽流感病毒H9亚型S2株的病毒液每0.1ml病毒含量≥107.5EID50。3.如权利要求2所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述收获的病毒液浓缩至原体积的1/4后，按ZM10株占35％、M41株占25％、AV-127株占15％、S2株占25％的体积比例混合后乳化。4.权利要求1所述的四联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备生产用毒种：将鸡新城疫病毒ZM10株毒种、鸡传染性支气管炎M41株毒种和禽流感病毒H9亚型S2株毒种分别用灭菌生理盐水稀释后尿囊腔接种9～11日龄SPF鸡胚，36～37℃孵育48～96小时，再置于2～8℃冷却12～24小时；然后无菌收获鸡胚尿囊液，取检验无菌且对1％鸡红细胞凝集价≥9log2的鸡胚液混合作为鸡新城疫病毒ZM10株生产用毒种，检验无菌且病毒含量≥106.0EID50/0.1ml、对1％鸡红细胞凝集试验为阴性的鸡胚液混合作为鸡传染性支气管炎M41株生产用毒种，以及检验无菌且对1％红细胞凝集价在8log2以上的鸡胚液混合作为禽流感病毒H9亚型S2株生产用毒种；将鸡减蛋综合征AV-127株毒种用灭菌生理盐水稀释后尿囊腔接种10～11日龄易感鸭胚，36℃～37℃孵育96～120小时，再置于2～8℃冷却12～24小时；然后无菌收获鸭胚尿囊液，取检验无菌且对1％鸡红细胞凝集价≥14log2的鸭胚液混合作为鸡减蛋综合征AV-127株生产用毒种；(2)孵化制苗用种蛋：采用健康易感鸡种蛋和易感鸭种蛋，消毒后孵化得易感鸡胚和鸭胚，相对湿度50％～60％，每2小时翻蛋一次；(3)制备制苗用病毒液：取上述生产用毒种，用灭菌生理盐水稀释，尿囊腔内接种10～11日龄易感鸡胚或鸭胚，36～37℃孵育48～120小时，再置2～8℃冷却12～24...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦卓明，艾武，徐怀英，杨培豫，彭平，
申请(专利权)人：乾元浩生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]