含有降低的4′-O-甲基吡哆素和二黄酮含量的银杏叶提取物制造技术

本发明专利技术涉及含有降低的４’－Ｏ－甲基吡哆素和二黄酮含量的银杏叶提取物、其制备方法和包含所述提取物的药物。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含有降低的4’-O-甲基吡哆素和二黄酮含量的银杏叶提取物、其制备方法和包含所述提取物的药物，即使在较高剂量下也不表现出由4’-O-甲基吡哆素和二黄酮引起的不良副作用。银杏叶提取物在治疗上已经使用了30年。位于柏林的联邦卫生局E委员会(Bundesgesundheitsamt)已经确认，包含一定提取物的药物在由脑机能不全、外周闭塞性疾病、眩晕和耳鸣导致的行为障碍的对症治疗中是有效的(BAnz No．133，7月19日，1994)。这些提取物的特征在于其成分为22至27％黄酮甙、5至7％萜烯内酯、2．8至3．4％银杏苦内酯A、B和C、2．6至3．2％bilobalide、和最多5ppm的银杏酚酸(烷基酚化合物)。该银杏叶提取物及其制备方法是已知的，见DE3940091(EP-B-0431535)和DE3940092(EP-B-0431536)。Wada等《化学与药学通报》33(1985)，3555-3557发现银杏种子中含有4’-甲氧基吡哆素(4’-O-甲基吡哆素)。在消耗大量银杏种子后，这种化合物可能导致中毒症状，如惊厥和意识丧失(“银杏食物中毒”和“银杏食品中毒”)。因此，发现这种化合物的人员将其命名为“银杏毒”。在以后的工作中，同一研究小组发现，银杏叶中不存在4’-O-甲基吡哆素(Wada等，《生物学与药学通报》16(1993)，210-212)。与此相反，最近有人报道从银杏叶中分离和鉴别到了4’-O-甲基吡哆素(Arenz等，Planta Medica，62(1996)，548-551)。在这项工作中，对含有银杏叶提取物的商品制剂中的抗维生素B6(4’-O-甲基吡哆素)成分进行了分析，发现了浓度介于4和10μg／ml液体药物之间。该浓度相当于在被加工成制剂的干提取物中100至250ppm的浓度。治疗用银杏提取物另外包含高达1000ppm的二黄酮。我们自己所进行的研究令人惊奇地揭示，除了文献已知的生物活性以外，这些化合物还显示出免疫毒理学作用。在小鼠腘淋巴结测定中，我们观察到银杏叶的醇-水总提取物的乙酸乙酯可溶性组分引起淋巴结反应；见实施例1。对色谱分离所得的亚组分进行试验，揭示了免疫毒理学作用仅发生在给药含有超过70％二黄酮的亚组分之后。银杏中发现的二黄酮是下列化合物sciadopitysin、银杏黄素、异银杏黄素、红杉黄酮和bilobetin。本专利技术所要解决的基本技术问题是提供基本上不含4’-O-甲基吡哆素和烷基酚化合物(银杏酚酸、银杏酚)的银杏叶提取物，具有技术上可行的最小二黄酮含量，并含有公认为活性决定性成分的黄酮醇甙和萜烯内酯，浓度符合E委员会的要求(BAnz No．133，1994年7月19日)。根据本专利技术的提取物含有-20至30重量％黄酮醇甙-总计2．5至4．5重量％银杏苦内酯A、B、C和J-2．0至4．0重量％bilobalide-低于10ppm、优选低于1ppm的烷基酚化合物(银杏酚酸、银杏酚)-低于10重量％的花色素原-低于50ppm的4’-O-甲基吡哆素-低于100ppm的二黄酮本专利技术进一步涉及这样一种银杏叶提取物的制备方法。所解决的技术问题在于，在银杏提取物的已知制备方法中，引入了两个另外的加工步骤1、用阳离子交换剂处理，以除去4’-O-甲基吡哆素2、在活性碳上吸附二黄酮这些措施是在按照DE 3940091权利要求3中的方法中，优选在步骤g)之前或之后进行。因此，将步骤f)所得溶液过滤后，使所述溶液通过阳离子交换柱，柱子用含水乙醇或含水甲醇洗脱。所得洗脱液用活性碳处理。至于阳离子交换剂的洗脱，可以使用含有20至80重量％、优选为50重量％乙醇或甲醇的水溶液。根据本专利技术的这两个步骤的顺序是可互换的，所得结果不变。然后继续进行按照权利要求3下面的步骤，溶液用一种脂族溶剂或脂环族溶剂萃取，以除去烷基酚化合物。该方法的步骤c)起到除去亲脂性组分的作用，它们是难溶于水的，包括大多数的二黄酮。因此，根据本专利技术权利要求1的提取物的优选制备方法是以下列数量和顺序的步骤为特征的a)将银杏叶用含水丙酮、具有1至3个碳原子的含水链烷醇或无水甲醇萃取，b)将溶剂浓缩至含量不超过10重量％，以分离有机溶剂，其中在最后的蒸馏步骤中可以加入水，c)将残余水溶液用水稀释至固体含量为5至25重量％，冷却至25℃以下，放置直至有沉淀生成，d)将残余水溶液用硫酸铵处理，然后用甲乙酮或甲乙酮与丙酮的混合物萃取至少一次，e)将所得萃取液浓缩，用乙醇-水混合物稀释至溶液各含有50％重量％的水和乙醇，并含有10重量％固体，f)将溶液用一种铅化合物或不溶性聚酰胺处理，g)将溶液过滤，使其通过强酸型阳离子交换剂，该阳离子交换剂用含水乙醇或含水甲醇洗脱，h)将洗脱液用活性碳处理，i)将过滤后的溶液用一种沸点为60至100℃的脂族溶剂或脂环族溶剂萃取，j)将残余的水-醇溶液浓缩，随后用硫酸铵处理，用甲乙酮和乙醇萃取，k)将所得有机相浓缩至固体含量为50至70重量％，和l)将浓缩物在真空下干燥，得到含水量低于5％的干燥提取物。在本专利技术进一步的实施方式中，步骤g)和h)互换。在本专利技术进一步的实施方式中，该方法的步骤g)和h)仅在步骤i)之后进行。在利用吸附树脂富集黄酮醇甙和萜烯内酯的已知方法(EP-B-0360556，JP-A-04182434)中，根据本专利技术的这两个步骤分别用解吸步骤所得提取物的甲醇-水溶液(参考EP-B-0360556，实施例Ⅲ，权利要求12)和根据JP-A-04182434的乙醇-水溶液进行。可用的阳离子交换剂的实例为酸性阳离子交换剂。最优选的阳离子交换剂是强酸型阳离子交换剂，如Merck Ⅰ。根据本专利技术所制备的提取物在药理试验模型中证明具有促进循环、防止局部缺血损伤、自由基清除剂和抑制血小板聚集的性质，与迄今已知的银杏提取物相反，即使在较高剂量下也不会产生可由4’-O-甲基吡哆素和二黄酮诱导产生的不良作用。而且，本专利技术涉及以含有根据本专利技术的银杏叶提取物为特征的药物。至于药物的制备，可以按照常规方法将根据本专利技术的提取物例如加工成溶液、包衣片、片剂或注射制剂。该药物可用于外周及脑动脉循环疾患的治疗。实施例1腘淋巴结试验使用18至24g雄性C57BL／6小鼠(Charles River，Sulzfeld)。将动物保持在标准化的环境条件下，可以自由进食和饮水。为了诱发腘淋巴结反应(PLR)，向左后爪内跖下注射供试物的10μl DMSO溶液。对照组动物仅注射一次10μl DMSO。单一提取物每次给药2mg。不同的次级提取物的剂量对应于其在初级提取物中的相应比例。七天后，在乙醚麻醉下将试验动物用颈脱位法处死。取下双侧腘淋巴结，除去粘连的组织后，收集在陪替氏培养皿内的温润滤纸上。然后立即在灵敏度为0．1mg的电子天平测定淋巴结的重量。PLR强度表示为同侧与对侧腘淋巴结的重量差异。物质 剂量 淋巴结重量(mg)乙酸乙酯组分 2．00mg4．2mg二黄酮组分 0．35mg3．4mg实施例2向根据DE3940091实施例1(第4栏1．67)的铅-单宁-沉淀的250ml上清液中加入2．5g活性碳，该上清液在含50％重量乙醇的溶液中含有10％干燥残余物。所得混合物在室温下搅拌30分钟。过滤除去活本文档来自技高网...

【技术保护点】
银杏叶提取物，含有 －２０至３０重量％黄酮醇甙 －总计２．５至４．５重量％银杏苦内酯Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｊ －２．０至４．０重量％ｂｉｌｏｂａｌｉｄｅ －低于１０ｐｐｍ、优选低于１ｐｐｍ的烷基酚化合物 －低于１０重量％的花色素原 －低于５０ｐｐｍ的４’－Ｏ－甲基吡哆素 －低于１００ｐｐｍ的二黄酮。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：KP施瓦布，
申请(专利权)人：威廉施瓦布博士有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]