一种抗肿瘤药物及其生产方法，药物为蛇葡萄素，取葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄、蛇葡萄、小叶蛇葡萄，显齿蛇葡萄、光叶蛇葡萄的干燥的全株或根或叶，经酒精回流提取，回收酒精，加适量水，用石油醚，氯仿萃取，水层减压蒸馏至固体析出。过滤，所得固体用水溶解，加活性炭煮沸，趁热过滤，静置，析出结晶，即为蛇葡萄素，其具有疗效确切、疗效高、毒副作用小的优点。其有较广的抗瘤谱。本生产方法提取率高。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄(Ampelopsis cantoniensis Planch)主要盛产于我国华南一带，其根(《中药大辞典》称“无莿根”)或全株是民间的传统用药，被广泛用于消炎解毒，治皮肤病、疖肿及骨髓炎、急性淋巴炎等感染性疾病，疗效显著。该植物的干制品“白茶”(又称“藤茶”、“藤婆茶”)历来是民间作清凉解毒的代茶饮品。国内于1989年开始对粤蛇葡萄中的蛇葡萄素进行结构鉴别、含量测定以及抗氧化作用的研究。对于同属植物，除了已入药典的白蔹外，还有蛇葡萄、小叶蛇葡萄、显齿蛇葡萄、光叶蛇葡萄等，它们均有消炎解毒、活血散瘀、消肿止痛等功效。目前尚未有关于蛇葡萄素的肿瘤抑制作用的报道。文献报道蛇葡萄素的提取方法是药材经醇热提取得总黄酮后，采取(1)上聚酰胺柱层析分离，以大量的甲醇水溶液洗脱；(2)上硅胶柱层析分离，以大量的二元或三元有机溶剂洗脱。上述两种方法均使用较大量有较大毒性的有机溶剂，流程长且得率低，不适用于工业化大生产。本专利技术的目的就是为了提供一种疗效确切、疗效高、毒副作用小、提取效率高的抗肿瘤药物及其生产方法。本专利技术是这样实现的。取葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄、蛇葡萄、小叶蛇葡萄、显齿蛇葡萄、光叶蛇葡萄的干燥的全株或根或叶，原料药经粉碎后，先用30～100％酒精浸泡过夜，滤过。药渣再用酒精回流提取1～3次。滤过。合并滤液。回收酒精至有固体析出，加入适量水，使固体溶解。先用石油醚萃取2次，再用氯仿萃取3次，分去有机溶剂。水层液减压蒸馏至固体析出，经静置过夜，析出大量沉淀，过滤。所得固体再加入水加热溶解，加入粉末活性炭，煮沸后，趁热过滤。滤液再如上法经静置、析晶、水溶解、活性碳除杂质及重结晶，共1～3次。最后收集结晶，真空40℃干燥后，得白色针状结晶。取上述结晶，测定其理化性质如下白色针状结晶，mp246～247℃。易溶于热水、热乙醇，溶于甲醇、乙醇、丙酮，微溶于水、乙酸乙酯，难溶于氯仿、石油醚。进行结构鉴定C15H12O8实验值(％)C56.04,H3.79；计算值(％)C56.25,H3.78m/z:321(M++1),315,304,292(M+-CO),291(M+-CHO),259,241,223,186,167,153,149,139,124λmaxMeOH,nm(logε):290.5(4.27),226.5(4.41)]ymaxKBr,cm-1:3200～3600(-OH),1717,1640(＞=O),1600,1548,1509,1472,1166,1084,1026,840(DMSO-d6)δ(ppm):11.89(1H,s,C3-OH),10.85(1H,s,C5-OH),5.85(2H,d,J=15.6Hz,C6,8-H),5.75(1H,s,C7-OH),4.41(1H,d,J=10.8Hz,C3-H),4.90(1H,d,J=10.8Hz,C2-H),6.39(2H,s,C2’,6’-H),8.23(1H,s,C4’-OH),8.93(2H,s,C3’5’-OH)(DMSO-d6)δ(ppm):83.3,71.7,197.8,166.9,163.4,162.6,145.8,133.5,127.2,107.3,106.8,100.6,96.1,95.1,94.9经分析,其结构式为 3,5,7,3’,4’,5’-hexahydroxy-2,3化学名3,5,7,3’,4’,5’,-六羟基-2,3-二氢黄酮，又名蛇葡萄素，二氢杨梅黄素、福建茶素蛇葡萄素经小鼠腹腔注射，LD50为1034mg/kg(95％可限为866～1236mg/kg)，显示蛇葡萄素应用较为安全。与之相比抗肿瘤药氮烯咪胺的LD50为859mg/kg。(一)蛇葡萄素对小鼠移植性黑色素瘤的抑制实验1．实验材料注射用氮烯咪胺(DTIC)，噻唑蓝(MTT)、碘丙啶(PI)；RMPI-medium 1640；HEPES。C57BL/6小鼠，雌雄兼用，体重(20±2)g。小鼠黑色素瘤B16细胞。2．C57BL/6小鼠移植性黑色素瘤抑制实验2.1 动物荷瘤收集对数生长期小鼠黑色素瘤B16细胞，用注射用水洗涤两次，1000rpm离心5min，弃取上清液，B16细胞重悬于生理盐水中，稀释至浓度为1×107个/ml的单细胞悬液。无菌条件下接种于C57BL/6小鼠两侧腹股沟皮下，接种量为每只0.1ml细胞悬液(相当于1×106个/只)2.2 给药方案C57BL/6小鼠，于接种B16细胞后第一天，按体重完全随机分组。在蛇葡萄素的1/10～1/5LD50之间设三个剂量组，分别为0.280mmol/kg、0.420mmol/kg、0.560mmol/kg；另设生理盐水阴性对照组、溶剂对照组、及0.330mmol/kg氮烯咪胺阳性对照组，每组小鼠10只。从接种后第五天开始，连续腹腔注射给药9天(每日一次)。2.3 药液配制蛇葡萄素0.280、0.420、0.560mmol/kg剂量组，均以30％二甲基亚砜为溶剂，0.330mmol/kg氮烯咪胺阳性对照组以生理盐水为溶剂。(药液均临时配制，以0.22μm微孔滤膜过滤除菌)2.4 黑色素瘤生长抑制率(GI)蛇葡萄素的体内抗黑色素瘤作用，以移植性黑色素瘤的生长抑制率来评价。荷瘤小鼠连续给药9天后，停药24h后处死。剥离黑色素瘤肿块称重以各处理组瘤重为指标与对照组瘤重比较，评价蛇葡萄素在体内的抗黑色素瘤的作用，蛇葡萄素对小鼠移植性黑色素瘤的生长抑制结果见表1。各组瘤重差异，应用SPSS PC/windows 9.0统计软件作单因素方差分析。表1 蛇葡萄素对小鼠移植性黑色素瘤的生长抑制结果 2.5 蛇葡萄素对小鼠移植性黑色素瘤的生长抑制结果蛇葡萄素0.280mmol/kg、0.420mmol/kg、0.560mmol/kg剂量组小鼠连续给药9天后，小鼠黑色素瘤瘤重均有显著减小(P＜0.05)，抑制率分别为25.76％、32.03％、54.55％。3个剂量组均能有效抑制小鼠黑色素瘤的生长，且蛇葡萄素0.560mmol/kg剂量组与0.330mmol/kg氮烯咪胺阳性对照组疗效相当。3．流式细胞仪测含药血清对B16细胞周期及增殖的影响浓度为5.25×104个/ml的B16细胞，按4ml/瓶接种至25ml培养瓶中。在5％CO2、37℃(饱和湿度)条件下培养24h后，加入蛇葡萄素0.420mmol/kg及0.560mmol/kg剂量组的小鼠10min时间点含药血清1ml(相当于20％体积的血清加入量)。在5％CO2、37℃(饱和湿度)条件下继续培养72h，收集细胞用无血清的RMPI-1640培养液将细胞洗涤后，重悬为单细胞悬液，加入-20℃预冷的乙醇(使含醇量至70％)固定，待测。PI染色30min，用350目筛网过滤，流式细胞仪检测含量及细胞周期分布，计算机软件处理结果。根据公式计算细胞分裂增殖指数(PI)=(S+G2M)/(G1+S+G2M)×100％。蛇葡萄素含药血清对B16细胞的周期影响如表2.表2．蛇葡萄素含药血清对B16细胞的周期影响 在2种剂量组蛇葡萄素含药血清的作用下，小鼠黑色素瘤B16细胞均表现为G1期及G2M期细胞含量相对比未加药阴性对照组细胞有不同本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗肿瘤药物，其结构式为＊＊＊ 化学名：３，５，７，３’，４’，５’－六羟基－２，３－二氢黄酮。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘德育，
申请(专利权)人：中山医科大学科技开发部，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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