高纯度栀子苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种从栀子果实中提取纯化制备高纯度栀子苷的方法，该方法采用水提醇沉法制备栀子提取物，采用大孔树脂吸附洗脱技术纯化制备栀子苷粗提物，再采用氧化铝柱层析技术或正丁醇萃取技术精制栀子苷得高纯度栀子苷。本发明专利技术制备方法操作简单，成本低廉，产品纯度高、得率高，不污染环境，适合工业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，具体涉及一种从桅子果实中提取纯化制备高纯度桅子 苷的方法。桅子为茜草科植物桅子Gardenia jasminoides Ellis.的干燥成熟果实。9-11 月果实成熟呈红黄色时采收。除去果梗及杂质，蒸至上汽或置沸水中略烫，取出，干燥.北京化学工业出版社，2005: 173]。性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛之功 效。桅子中含有大量的环烯醚萜甙类化合物.中国中药杂志，1996,21 ) :67-72]，包括京尼平苷、羟异桅子苷、京 尼平龙胆二糖苷、山桅子苷、桅子酮苷、鸡屎藤次苷甲酯、车叶草苷、脱乙酰基车叶草苷酸、 脱乙酰基车叶草苷酸甲酯、桅子酸(京尼平苷酸)、香豆酰京尼平龙胆双糖苷；有机酸类成 分，包括绿原酸、熊果酸、苦臧红花酸；黄酮类成分桅子素A、桅子素B、桅子素C、桅子素D、 桅子素E、3，4，5-三甲氧基汉黄芩素、3，4_ 二甲氧基汉黄芩素、4-二羟基汉黄芩素、3，4_ 二 羟基汉黄芩素、3，4，5-三羟基汉黄芩素、5，7，3，4-四羟基-6，8- 二甲氧基黄酮等黄酮类化 合物。桅子苷(geniposide)是主要的环烯醚萜苷化合物，是桅子中的主要化学成分，药理 学研究显示桅子苷及其代谢物具有对肝脏、胰腺细胞的保护作用，可以促进胆汁分泌、调 节胃机能、增加内脏血流量，以及降压、解热、抗菌、抗炎、抗肿瘤等作用。其结构式如下目前，国内外用桅子果实制备桅子苷时多用传统方法分离纯化桅子苷，如硅胶柱 层析、氧化铝柱层析和重结晶等方法。传统的分离方法在制备过程中需要使用大量的有 毒有机试剂，容易造成环境污染。而王兰采用现代分离技术制备型RP-HPLC从桅子药材中 提取、分离桅子苷单体的完整方法。制备的桅子苷经四谱(核磁共振、红外光谱、紫外光 谱、质谱，图略)共同检测，并同文献数据对照，确定纯度最高可达到99.9%，符合标准物 质的质量要求。但其前处理时，需要最大限度除去其它成分，提高样品溶液中桅子苷的含量，从 而增加了单元制备时间的制备量。使得制备样品方法复杂，得率低，不适合大规模生产。大孔吸附树脂是近十年来发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂，属多孔性交
技术介绍
联聚合物。它具有良好的网状结构和较高的比表面积，通过物理特性从水溶液中有选择地 吸附有机物质，从而达到分离提纯的目的。另外它具有物理化学稳定性高、吸附选择性独 特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和、使用周期长、节省费用等诸多优点， 广泛用于中药中化合物的分离纯化。沈荣光用大孔吸附树脂X-5柱色谱初步分离、富集桅 子提取液中的桅子苷，再经过冷冻干燥得到纯度为65.8%、得率91%的桅子苷。姚干通过 研究认为HPD450大孔吸附树脂能有效富集并纯化桅子总环烯醚萜 苷、桅子苷。吕茂平等通过比较D301R、D396、D296和AB-8四种型号大孔树脂对桅子 苷的吸附效果，发现D301R树脂可用来分离桅子苷，但并未对桅子苷的制备工艺和桅子苷 的纯度做进一步报道研究。任治军、何开泽等人比较了 H103、NKA-II、HPD100A、HPD400A及 D141等5种大孔吸附树脂对桅子提取液中桅子黄色素和桅子苷的吸附性能。确定了用H103 和HPD100A两种非极性大孔树脂进行桅子苷的分离纯化，并确定了工艺参数，得到的桅子 苷纯度达到81.3%，回收率为88. 5% 0由此可见，目前研究中均是 采用大孔树脂吸附技术纯化制备桅子苷，但是单独采用大孔树脂吸附技术制备桅子苷，桅 子苷的纯度均较低，需结合其他精制工艺作进一步研究。
技术实现思路
针对现有技术的上述不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种制备工艺简 单、低成本且对环境无污染的从桅子果实中制备高纯度桅子苷的方法。本专利技术提供的高纯度桅子苷的制备方法，包括如下步骤(1)制备桅子提取液取干燥桅子果实适量，浸泡后用水煎煮2-3次，每次加水 5-15倍量，每次1-1. 5h,滤过，合并滤液；将滤液浓缩至每ml含Ig生药，加入95 %乙醇至浓 缩液含醇量为70%，离心，收集上清液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至每Iml含有0. 5g 生药，该浓缩液即为桅子提取液；(2)纯化将上述桅子提取液经大孔吸附树脂，大孔树脂柱体积为1BV，先用IBV水 洗脱，弃去洗脱液；再用0% -30%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压干燥，得到纯度为60-80% 的桅子苷粗提物；(3)精制上述桅子苷粗提物通过下述正丁醇萃取工艺或氧化铝柱层析工艺精制 得到高纯度桅子苷正丁醇萃取工艺取桅子苷粗提物适量，加入10-20倍量的水使之溶解，分别加入 正丁醇，萃取两次，每次正丁醇用量为桅子苷粗提物的量的10-20倍，收集正丁醇萃取液， 回收正丁醇，干燥，得到纯度高于90%的高纯度桅子苷；氧化铝柱层析工艺取适量粒径为100-200目层析用中性氧化铝，装入玻璃柱中， 径高比7 1-5 1，桅子苷粗提物的上样量为氧化铝用量的1/30，将其溶于少量的蒸馏水 中作为上样液，将上样液慢慢加入到氧化铝层析柱中，上样后用浓度为95%以上的乙醇冲 洗氧化铝柱，洗脱液用量为6-15倍柱体积；收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，得到纯度高于90%的高纯度桅子苷。优选地，本专利技术上述高纯度桅子苷的制备方法之步骤O)中，大孔树脂采用D301R 弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂，且大孔树脂柱体积为1BV，桅子上样液上样量为1/;3BV， 水冲洗量为1BV，0% -30%的乙醇冲洗量为2-4BV。本专利技术根据桅子苷在环烯醚苷类成分中极性相对较弱的特点，采用大孔树脂纯化 桅子苷提取物时，先用大量的水洗去一些水溶性杂质(色素、糖等)和极性大的环烯醚苷类 成分，再用0% -30%的乙醇选择性洗脱桅子苷，可与弱极性的杂质和成分分离。采用大孔 树脂纯化桅子苷工艺制备的桅子苷纯度在60% -80%之间，要得到高纯度的桅子苷，需结 合其他分离纯化方法精制得高纯度的桅子苷。本专利技术中桅子苷提取过程桅子苷提取率为70% -80% ；大孔树脂吸附洗脱过程桅 子苷的转移率为80% -85% ；氧化铝柱层析工艺中桅子苷的转移率为60-70% ；正丁醇萃 取工艺中桅子苷的转移率为_75%。采用大孔树脂吸附技术结合氧化铝柱层析工艺 制备高纯度桅子苷过程中，桅子苷的转移率约为40-50%，采用大孔树脂吸附技术结合正丁 醇萃取工艺制备高纯度桅子苷过程中，桅子苷的转移率为35% -45%。采用高效液相色谱 (HPLC)法测定该粉末中桅子苷的含量，纯度按干燥品计高于92%。并进行UV、MSJR分析， 与桅子苷标准品图谱比对，进行结构分析，证明为桅子苷。采用本专利技术方法制备纯度高于90%的桅子苷，制备工艺简单，适合工业化生产。 附图说明图1为本专利技术中桅子苷精制品与桅子苷对照品紫外吸收光谱叠加图。图2为本专利技术中桅子苷精制品红外光谱图。图3为本专利技术中桅子苷对照品红外光谱图。图4为本专利技术中桅子苷对照品一级全扫描质谱图。图5为本专利技术中桅子苷精制品一级全扫描质谱图。图6为本专利技术中桅子苷对照品高效液相色谱图。图7为本专利技术中桅子苷精制品高效液相色谱图。具体实施例方式下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本专利技术。这些实施例应理解为仅用于说 明本专利技术而不用于限本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种高纯度栀子苷的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（１）制备栀子提取液：取干燥栀子果实适量，按常规浸泡后水煎提取，水煎液滤过，合并滤液；将滤液浓缩，浓缩液中加入乙醇醇沉，静置，收集上清液，减压回收乙醇至无醇味，浓缩，该浓缩液即为栀子提取液；（２）纯化：将上述栀子提取液过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，弃去水洗脱液；再用低浓度的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压干燥，得到纯度为６０－８０％的栀子苷粗提物；（３）精制：上述栀子苷粗提物通过下述正丁醇萃取工艺或氧化铝柱层析工艺精制得到高纯度栀子苷：正丁醇萃取工艺：取栀子苷粗提物适量，加－水使之溶解，分别加入正丁醇，萃取两次，－收集正丁醇萃取液，回收正丁醇，干燥，得到纯度高于９０％的高纯度栀子苷；氧化铝柱层析工艺：取适量层析用中性氧化铝，装入玻璃柱中，栀子苷粗提物溶于少量的蒸馏水中作为上样液，将上样液慢慢加入到氧化铝层析柱中，上样后用浓度为９５％以上的乙醇冲洗氧化铝柱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，得到纯度高于９０％的高纯度栀子苷。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张彤，丁越，李婷，尹胜利，黄孝春，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]