病毒载体的生产方法技术

本发明专利技术公开了一种病毒载体的大规模生产方法。包括用聚酯纤维纸片方法培养病毒载体包装细胞和细胞高密度转染技术，本发明专利技术方法可以提高包装细胞的产量与病毒载体的产量，提高转染效率，本发明专利技术的浓缩高密度转染时的细胞密度达到５×１０７细胞／ｍｌ。本发明专利技术适用于腺病毒载体，腺相关病毒载体，杆状病毒载体以及α逆转录病毒载体、β逆转录病毒属、γ反转录病毒载体、δ反转录病毒载体、ε反转录病毒载体、牛慢病毒载体、马慢病毒载体、猫慢病毒载体、羊慢病毒载体或人类慢病毒载体的大规模制备，并适用于蛋白的大规模生产应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．一种病毒载体的生产方法，其特征在于该方法包括下列步骤：一、聚酯纤维纸片方法培养慢病毒载体包装细胞：（１）包装细胞先在细胞培养皿中培养到１０６－１０７个总量；（２）将１０６－１０７个总量的细胞从细胞培养皿中消化下来，并离心收集；（３）将收集的细胞与聚酯纤维纸片混合后铺入细胞培养皿或细胞培养装置，酯纤维纸片的浓度为每３０ｍｌ培养基中加入０．１ｇ－５ｇ的聚酯纤维纸片；（４）加入含５％－１０％胎牛血清的细胞培养基淹没聚酯纤维纸片；（５）放置３２－３７℃的二氧化碳培养箱中孵育；（６）２４小时内进行细胞换液；（７）连续培养４－１０天后，将聚酯纤维纸片收集，用胰酶进行消化，消化时间短于２０分钟，然后低速离心收集细胞；（８）在１５ｍｌ或５０ｍｌ离心管中，将细胞重新悬浮于１０－３０ｍｌ的新鲜含０％－２％胎牛血清培养基中；二、细胞高密度转染：（１）取一个试管，将产病毒所需要的各种质粒，包括辅助质粒和目的载体质粒，按照１∶１∶２比例混合，总量３００－６００ｕｇ；（２）向质粒中加入２５０ｕ１－８００ｕｌ的０．５Ｍ氯化钙；（３）将上述质粒和氯化钙混合物放置冰上或４℃１０－２０分钟；（４）取５００ｕｌ－２ｍｌ的２×ＨＢＳ平衡缓冲液与上述混合物混匀；（５）混匀后将试管放置室温２５℃１０－３０分钟后加入到步骤一（８）中得到的细胞悬浮液中，形成转染体系；（６）将转染体系放置到３２－３７℃的二氧化碳培养箱中孵育２０－６０分钟，每５分钟轻摇管子，避免细胞纠集成团；（７）将离心管中的混合物倒入到预先准备的含有０．６－１０ｇ的聚酯纤维纸片载体的１５ｃｍ细胞培养皿或细胞培养设备中，同时再加５％胎牛血清的培养基至总体积３０ｍｌ；（８）放入３２－３７℃二氧化碳培养箱中培养６－１２小时后，用新鲜的含有１０％胎牛血清培养基换液；（９）每隔２４小时收取病毒上清液，收取４次，获得病毒上清。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨光华，王华，张文炜，
申请(专利权)人：上海比昂生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]