肝靶向重组 * 质粒纳米粒制剂制造技术

本发明专利技术为肝靶向重组ｐ↑［ＥＧＦＰ－ＡＴＫ］质粒纳米粒制剂，以质粒ｐ↑［ＵＣ－ＡＦＰｌｂ］，ｐ↑［ＥＧＦＰ］和ｐ↑［ＮＧＶＬ－ＴＫ］为原料，先用常规法大抽三种质粒，然后分别用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ消化ｐ↑［ＵＣ－ＡＦＰｌｂ］分离纯化得ＡＦＰ－Ａｌｂ增强子－启动子片段，用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ－ＳｍａⅠ消化ｐ↑［ＮＧＶＬ－ＴＫ］，分离纯化得ＴＫ片段，用限制性内切酶Ｈｉｎｄ Ⅲ－ＳｍａⅠ消化真核表达载体ｐ↑［ＥＧＦＰ］，分离纯化得线性化载体片段，然后将该消化载体片段与ＡＦＰ－Ａｌｂ启动子片段进行５′端定向连接，酚抽提，乙醇沉淀后再用此连接产物与ＨｉｎｄⅢ－ＳｍａⅠ消化ＴＫ片段进行３′端定向连接，再次酚抽提，纯化，然后用绿豆芽核酸酶ＭＢ处理５′突出端后，再进行平端连接，得重组质粒，将聚酯载体，吐温８０用有机溶剂溶解，加入重组质粒，匀化后加入聚乙烯醇溶液，再次匀化，所得产物搅拌后冷冻干燥得本发明专利技术。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一种肝靶向重组ｐ↑［ＥＧＦＰ－ＡＴＫ］质粒纳米粒制剂，其特征在于以质粒ｐ↑［ＵＣ－ＡＦＰｌｂ］，Ｐ↑［ＥＧＦＰ］和ｐ↑［ＮＧＶＬ－ＴＫ］为原料，先用常规法大抽三种质粒，然后分别用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲ Ⅰ消化ｐ↑［ＵＣ－ＡＦＰｌｂ］分离纯化得８００ｂｐ的ＡＦＰ－Ａｌｂ增强子－启动子片段，用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ－Ｓｍａ Ⅰ消化ｐ↑［ＮＧＶＬ－ＴＫ］，分离纯化得１１２５ｂｐ的ＴＫ片段，用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ－Ｓｍａ Ⅰ消化真核表达载体ｐ↑［ＥＧＦＰ］，分离纯化得线性化载体片段，然后将该消化载体片段与ＡＦＰ－Ａｌｂ启动子片段进行５′端定向连接，酚抽提，乙醇沉淀后再用此连接产生与ＨｉｎｄⅢ－Ｓｍａ Ⅰ消化ＴＫ片段进行３′端定向连接，再次酚抽提，纯化，然后用绿豆芽核酸酶ＭＢ处理５′突出端后，再进行平端连接，得重组质粒，将聚酯载体，吐温８０用有机溶剂溶解，再加入上述重组质粒，匀化后加入聚乙烯醇溶液，再次匀化，所得产物搅拌后冷冻干燥而制成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：张志荣，何勤，刘戟，
申请(专利权)人：四川大学华西药学院，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]