一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法技术

一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法，含以下步骤：(1)冷匀浆选取贝肉于预冷水中匀浆得贝肉匀浆液；(2)超声波复合酶解处理在贝肉匀浆液中加入碱性蛋白酶，混匀，在超声波作用下进行酶解；(3)进一步酶解将超声波复合酶解后的匀浆液于水浴中进行继续恒温酶解，酶解完毕灭酶，冷却后离心分离得含合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的上清液；(4)膜分离和纯化处理将含合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的上清液依次采用5～10kDa和1kDa的超滤膜进行逐步分离，收集滤液，即得到合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液，经纯化处理得其粉末。该方法操作简单，工艺新，超声波辅助酶解可大大提高合浦珠母贝肉的水解率，缩短水解时间，降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海产品加工
，具体涉及一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备 方法。
技术介绍
合浦珠母贝，属珍珠贝科珠母贝属，是世界上生产养殖珍珠的主要贝种。我国海 南、广东、广西等省马氏珠母贝资源丰富。自六十年代中期我国合浦珠母贝人工育苗取得成 功并大批量生产之后，合浦珠母贝养殖业得到快速发展，养殖产量从1981年14. 5公斤增到 2009年的10000公斤。目前海南有海水珍珠养殖场1000多个，出产的珍珠占全国海水珍珠 总产量的30 40%。合浦珠母贝开珠后产生大量的贝肉，合浦珠母贝肉富含蛋白质、脂肪 含量低，营养价值很高，目前只有少量加工为珍珠贝肉干，产品形式单一，高值化加工几乎 没有。如何合理高值化利用珍珠贝肉资源，是合浦珠母贝养殖产业急需解决的问题。随着现代社会的发展，生存环境的恶化以及社会压力的加大使现代人的健康受到 严重的威胁，自由基引起机体损伤变性，导致机体各种疾病产生，已经引起人们强烈的重 视。抗氧化剂的消费量越来越大，低价、高效、低毒的天然食品抗氧化剂的开发成为研究热 点，其中以分子量小、易吸收、活性强，能有效地清除体内过剩的活性氧自由基，保护细胞和 线粒体的正常结构和功能，防止脂质过氧化的发生等研究为主。天然抗氧化剂在医药、化妆 品、保健品和食品与饲料添加剂等方面应用前景广阔，筛选具有强抗氧化活性的天然资源 已成为食品科学、生物学、医学等研究的新趋势。目前关于合浦珠母贝贝肉抗氧化寡肽的制 备工艺方面的研究较少，还存在很大的开发空间。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该方法操作简单 安全环保，使合浦珠母贝开珠后的贝肉得到高值化利用，可提高生产企业的经济效益。本专利技术的上述目的是通过如下技术方案来实现的一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽 的制备方法，含以下步骤(1)冷勻浆选取贝肉置于预冷水中勻浆后得贝肉勻浆液；(2)超声波复合酶解处理在贝肉勻浆液中加入碱性蛋白酶，混勻，将上述贝肉勻 浆液和碱性蛋白酶的混合液置于超声仪器中，调节频率为35kHz、功率为280 360W，并调 节温度为45 65°C进行酶解50 70min ；(3)进一步酶解将超声波复合酶解后的贝肉勻浆液置于45 60°C的水浴中进行 继续恒温酶解0. 5 2h，酶解完毕进行灭酶处理、冷却后离心分离得含合浦珠母贝肉抗氧 化寡肽的上清液；(4)膜分离和纯化处理将含合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的上清液依次采用截留分 子量为5 lOkDa和lkDa的超滤膜进行逐步分离，收集滤液，即得到合浦珠母贝肉抗氧化 寡肽液，经纯化处理得合浦珠母贝肉抗氧化寡肽粉末。上述制备方法中步骤(1)中所述的贝肉需经预处理，所述的预处理过程为选取冷冻贝肉解冻或 鲜贝肉，除去内脏，用清水清洗2 3次，浙水5min以上。步骤(1)中所述的贝肉与预冷水的重量体积比为1 0. 5 1. 0。步骤(1)中预冷水的温度为0 10°C，勻浆时间为2 5min。步骤(2)中所述的碱性蛋白酶的添加量为每克贝肉勻浆液中加入1800 2500U。步骤(3)中灭酶的温度为100°C，灭酶的时间为5 lOmin。步骤(3)中离心分离的过程是调节冷冻离心机的转速为10000 15000r/min， 在0 4°C下离心15 25min。步骤⑷中超滤膜分离的条件是操作压力为3 4bar，温度为3 10°C。优选的，步骤(4)中的纯化处理过程为将所得的合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液经 冷冻干燥得合浦珠母贝肉抗氧化寡肽粉。优选的，步骤(4)中的纯化处理过程为将所得的合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液采 用无水乙醇脱水后再经减压浓缩得合浦珠母贝肉抗氧化寡肽粉。本专利技术与现有技术相比，具有以下的优点(1)本专利技术通过超声波复合酶解及超滤技术相结合的集成技术，将合浦珠母贝肉 通过碱性蛋白酶进行酶解，利用超声波技术具有波动和能量的双重属性，一是空化现象，即 在液体介质中表现为泡的形成和破裂及伴随的能量释放，二是介质和容器也可以通过声的 吸收产生共振性质的二级效应，所以在超声波的辅助作用下促进碱性蛋白酶对合浦珠母贝 肉进行水解，通过控制酶解的时间、温度、加酶量、料水比例，获取具有高抗氧化活性的寡 肽。不仅对南海主要养殖珍珠贝_合浦珠母贝开珠后大量的贝肉进行高值化利用，而且得 到具有功能保健作用的抗氧化寡肽，可广泛应用于食品、化妆品等轻工行业及医药保健，促 进海水养殖珍珠产业的可持续发展，具有重要的经济意义和社会意义。(2)合浦珠母贝肉通过碱性蛋白酶进行酶解，水解度约为33.8%，平均肽链长度 约为3. 2，得到的合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液体为透明无色，固体为浅黄色粉末。产品具有 较强的抗氧化活性，特别是对DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基等的清除能力较强，具有 良好的吸湿能力与保湿能力。(3)该工艺操作简单，超声波辅助酶解可以大大提高水解率，缩短水解时间，生产 成本低，产品安全，可提高生产企业的经济效益。具体实施例方式以下列举具体实施例对本专利技术进行说明。需要指出的是，实施例只用于对本专利技术 作进一步说明，不代表本专利技术的保护范围，其他人根据本专利技术的提示做出的非本质的修改 和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1本实施例提供的合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法如下(1)贝肉预处理将冻贝肉解冻，除去内脏，用清水清洗2次，放在不锈钢或塑料框 中浙水5min以上；(2)冷勻浆将水先预冷到4°C，称取贝肉，按重量体积比为1 0.5加入预冷水，置于组织捣碎机中勻浆5min，得到贝肉勻浆液；(3)加酶、超声波处理将贝肉勻浆液置于不锈钢杯中，添加诺维信食品级碱性蛋 白酶Alcalase 2. 4L蛋白酶，丹麦NOVO公司产品，酶活为2. OX 104U/g，按贝肉勻浆液的重 量添加酶，每克贝肉勻浆液中添加2000U的Alcalase 2. 4L蛋白酶，搅勻后，放在超声波仪 器中，调节超声波工作频率为35kHz、超声波的强度为280W、控制处理温度为45°C，时间为 70min ；(4)进一步酶解经超声波处理后，将步骤(3)中的贝肉勻浆液继续在45°C恒温水 浴酶解2h，在100°C下灭酶lOmin，灭酶后迅速冷却；(5)离心将步骤(4)中的酶解液在冷冻离心机中离心，离心机的转速为10000r/ min，4°C下离心25min，取上清液；(6)超滤利用膜分离技术对步骤(5)中的上清液进行分离，膜分离的操作压力为 3. 5bar，超滤温度为4°C，先用截留分子量为lOkDa的超滤膜进行分离，收集滤液，滤液再用 截留分子量为5kDa的超滤膜进一步分离，收集滤液，滤液再用截留分子量为lkDa的超滤膜 进一步分离，收集滤液，即得到合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液，呈无色透明；(7)纯化将上述合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液经冻干得到白色抗氧化寡肽粉。实施例2本实施例提供的合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法如下(1)冷勻浆选取鲜贝肉，除去内脏，用清水清洗3次，浙水5min以上，然后按除去 内脏的鲜贝肉与预冷水的重量体积比为1 1.0，置于5°C的预冷水中勻浆5min后得贝肉 勻浆液；(2)超声波复合酶解处理在贝肉勻浆液中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶可采用 市售地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶，其酶活力为2.0\105 10\10力/^，其它可达到类似效果 的碱性蛋白酶也可，地衣本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的制备方法，其特征在于：含以下步骤：　　（１）冷匀浆：选取贝肉置于预冷水中匀浆后得贝肉匀浆液；　　（２）超声波复合酶解处理：在贝肉匀浆液中加入碱性蛋白酶，混匀，将上述贝肉匀浆液和碱性蛋白酶的混合液置于超声仪器中，调节频率为３５ｋＨｚ、功率为２８０～３６０Ｗ，并调节温度为４５～６５℃进行酶解５０～７０ｍｉｎ；　　（３）进一步酶解：将超声波复合酶解后的贝肉匀浆液置于４５～６０℃的水浴中进行继续恒温酶解０．５～２ｈ，酶解完毕进行灭酶处理，冷却后离心分离得含合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的上清液；　　（４）膜分离和纯化处理：将含合浦珠母贝肉抗氧化寡肽的上清液依次采用截留分子量为５～１０ｋＤａ和１ｋＤａ的超滤膜进行逐步分离，收集滤液，即得到合浦珠母贝肉抗氧化寡肽液，经纯化处理得合浦珠母贝肉抗氧化寡肽粉末。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴燕燕，李来好，杨贤庆，尚军，李有宁，刁石强，陈胜军，黄卉，岑剑伟，马海霞，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院南海水产研究所，
类型：发明
国别省市：81